Векторы на основе бактериофагов
Векторы на основе бактериофага λ
Векторы на основе фага λпоявились в 1974 г.. ДНК фагаλдвухцепочечная, линейная, размер 48 502 пн. На концах имеются одноцепочечные ГЦ- концы длиной 12 н
Фаговые векторы обычно создают на базе умеренного бактериофага λ, содержащего двухцепочечнуюлинейную молеклул ДНК. Левое и правое плечи фага имеют все гены, необходимые для литического цикла(репликации, размножения). Средняя часть генома бактериофага λ (содержит гены, контролирующиелизогению, то есть его интеграцию в ДНК бактериальной клетки) не существенна для его размножения исоставляет примерно 25 тысяч пар нуклеотидов. Данная часть может быть заменена на чужеродныйфрагмент ДНК. Такие модифицированные фаги проходят литический цикл, но лизогения не происходит.Векторы на основе бактериофага λ используют для клонирования фрагментов ДНК
Фаг M13 — нитевидный колифаг, имеющий кольцевой онДНК-геном. Для получения рекомбинантных ДНК используют репликативную форму фага, представляющую собой кольцевую двухнитевую ДНК размером 6400 п.н., в которую вставлен ген lacZ, содержащий полилинкер сайтов для целого ряда рестриктаз. Рекомбинантные фаги отбирают из зон лизиса бактериального газона, имеющих белый цвет. Использование векторов на основе фага M13 имеет ряд положительных моментов. Так, одно клонирование дает два вида фагов с однонитевым ДНК-геномом. Каждый вид фага содержит только одну из нитей вставки ДНК, которые могут находиться в разных ориентациях. В связи с этим, клонирование с использованием фага M13 удобно для создания однонитевых ДНК-зондов и секвенирования ДНК.
Дата добавления: 2016-01-04; просмотров: 25; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!