Использование ДНК полимеразы Iи ее фрагментов
-PolIиспользуется для ведения меченых дезоксирибонуклеотидов в синтезируемые цепи ДНК путем перемещения одноцепочечного разрыва вдоль двухцепочечной ДНК, в котором 3‘-ОН-конец используется в качестве затравки (ник-трансляция), при этомPolIпрокладывает себе путь с помощью 5‘-3 ‘- экзонуклеазной активности
-Термостабильная Taq-ДНК-полимераза широко используется для проведения ПЦР
Фрагмент Кленова ДНК-полимеразы I E. coli (PolI)
· Содержит С-концевой и средний домены PolI
· Обладает
o 5‘-3‘– полимеразной
o 3‘-5‘– экзонуклеазной активностями
· Используется в методе репарации направляемой праймером
· Секвенирования ДНК по методу Сэнгера
· Заполнения 5‘-выступающих липких концов с образованием тупых
· Введения концевой метки
· Удаления 3‘-выступающих концов рестрикционных фрагментов ДНК
РНК-зависимая ДНК-полимераза (обратная транскриптаза, РНК-полимераза, ревертаза)
· Открыта в 1970 г. Х. Теминым, С. Мизутани и независимо от них Д. Балтимором
· Состоит из двух субъединиц - α(65 кДа) иβ(95 кДа)
· Обладает тремя активностями:
o ДНК-полимеразной, использующей в качестве матрицы как РНК, так и ДНК Для синтеза необходим праймер
o Активностью РНКазы Н, гидролизующей РНК в составе гибрида РНК-ДНК, но не одно- или двухцепочечную РНК
o ДНК-эндонуклеазной
Фосфатазы. Киназы.
Фосфатаза (КФ 3.1.3.48) — фермент, который дефосфорилирует субстрат (как правило другой белок) в результате гидролиза сложноэфирной связи фосфорной кислоты. При этом образуется фосфатный анион и молекула продукта с гидроксильной группой. По своему каталитическому и физиологическому действию фосфатаза является антагонистом фосфорилазы и киназы, которые присоединяют фосфатную группу к субстрату.
|
|
|
Хотя белки являются наиболее распространённым субстратом фосфатаз, некоторые фосфатазы дефосфорилируют фосфорилированные липиды, сахара инуклеотиды. Например, фосфатаза PTEN специфически дефосфорилирует сигнальный липид фосфатидилинозитол-3,4,5-трифосфат.
В зависимости от природы активной группы фермента фосфатазы делятся на два типа: цистеин-зависимые фосфатазы и металлофосфатазы. Типичным представителем группы фосфатаз является щелочная фосфатаза, широко используемая в диагностических и лабораторных целях.
Киназы
Киназы (протеинкиназы, фосфотрансферазы) - это особые специфичные ферменты, производящие фосфорилирование белка и тем самым поддерживющие и завершающие каскады внутриклеточных биохимических реакций.
Киназы переносят фосфатные группы с аденозинтрифосфорной кислоты (АТФ) на разные субстраты, преимущественно на гидроксильную группу спиртов, углеводов или аминокислот. Для работы всех киназ необходимо присутствие ионов магния (Mg2+), который служит связующим звеном между АТФ и белком.
|
|
|
Из всевозможных киназ с точки зрения мезанизмов пластичности синапсов нас интересует группа протеинкиназ, т.е. тех киназ, которые "пересаживают" фосфорные остатки с АТФ на белок. Тем самым они могут так изменить белок, что он начнёт работать совершенно не так, как работал раньше. Это уже и есть, собственно говоря, пластичность.
В результате киназного фосфорилирования происходит химическая модификация «рабочих» белков именно за счёт того, что с помощью киназы к определенным участкам этих белков присоединяются остатки фосфорной кислоты. В результате такие фосфорилированные белки меняют свои прежние свойства. Соответственно, меняются процессы, которые осуществляются этими «рабочими» белками. А вследствие этого – меняется состояние отдельной структуры, содержащей эти белки, или состояние всей клетки и её свойства. Киназы сажают фосфорные остатки не куда попало, а строго на предназначенные для них места. Каждый вид киназы имеет свою определённую мишень, т.е. киназы обладают специфичностью.
Дата добавления: 2016-01-04; просмотров: 116; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!