Рибонуклеаза (РНКаза А)
В. Нуклеаза Bal 31
Псевдомонада Alteromonas espejiana секретирует единственную дезоксирибонуклеазу, получившую название Bal 31. В отношении одноцепочечной ДНК, в том числе одноцепочечных участков двухцепочечной ДНК, Bal 31 ведет себя как эндонуклеаза, действуя аналогично другим эндонуклеазам, специфичным к одноцепочечным ДНК. Однако в отношении интактной двухцепочечной ДНК этот фермент проявляет экзонуклеазную активность, по-видимому, благодаря тому, что он способен распознавать локальные одноцепочечные участки. Bal 31 разрезает обе цепи на обоих концах дуплекса, т.е. осуществляет деградацию одновременно в направлениях 3' – >5' и 5'–>3'. В результате двухцепочечная молекула постепенно укорачивается. Если эмпирически оценить скорость этого процесса, то с помощью фермента Bal 31 можно получать фрагменты ДНК нужной длины. Хотя укорочение разных молекул ДНК происходит несинхронно, получается набор фрагментов, длина которых близка к заданной. В результате исчерпывающего гидролиза с помощью Bal 31 промежуточные олигонуклеотидные продукты расщепляются до 5'-мононуклеотидов.
Дезоксирибонуклеаза I (ДНКаза I) — эндонуклеаза, закодированная геном DNASE1 в геноме человека.[1] Синтезируется в основном в тканях пищеварительного тракта. Высокий уровень в моче, также присутствует в семенной жидкости и слюне.
ДНКаза I — нуклеаза, расщепляющая фосфодиэфирные связи в ДНК вблизи пиримидиновых нуклеотидов, образуя при этом полинуклеотиды с концевым-5'-фосфатоми свободной гидроксильной группой на 3'-конце. Обычно расщепление идет до тетрануклеотидов. Субстратами ДНКазы I являются: одноцепочечная ДНК, двуцепочечная ДНК, хроматин. ДНКаза I является эндонуклеазой, расщепляющей чужеродные и ненужные молекулы ДНК, также показана роль этого фермента во фрагментации ДНК при апоптозе.[2]
|
|
|
Известно, что ДНКаза I связывает мономеры белка цитоскелета актина с высоким сродством (константа диссоциации ~ нМ) и полимеры актина с более низким сродством.
Экзонуклеазы
-Экзонуклеаза III E.coli- Катализирует последовательное отщепление нуклеотидов из двухцепочечных ДНК в направлении 3'→5'
Фермент обладает эндонуклеазной активностью РНК-азы Н, осуществляющей гидролиз РНК в РНК-ДНК-гибридах
-Экзонуклеаза фага λКатализирует последовательное отщепление мононуклеотидов в двухцепочечных ДНК при наличии в них 5' –концевых фосфатных групп. Используют для получения одноцепочечных молекул ДНК с целью их последующего секвенирования
-Нуклеаза S1 -Специфически расщепляет одноцепочечные молекулы ДНК с образованием 5'-фосфорилированных моно- и олигонуклеотидов
Эти же свойства присущи нуклеазе SI золотистой фасоли
|
|
|
-Панкреатическая дезоксирибонуклеаза I (ДНКазаI) -Гидролизует одно и двухцепочечные ДНК с образованием сложной смеси моно- и олигонуклеотидов, содержащих 5'-фосфатные группы
Рибонуклеаза (РНКаза А)
-Обладает активностью эндорибонуклеазы, специфически расщепляющей фофодиэфирные связи, образованные пиримидиновыми нуклеотидами
-Продуктами гидролиза являются 3'-фосфорилированные пиримидиновые мононуклеотиды и олигонуклеотиды, содержащие концевые пиримидин-3'-монофосфаты
-Ферменты, способные использовать в качестве субстрата катализируемых ими реакций нуклеиновые кислоты являются инструментами экспериментов по конструированию и анализу гибридных молекул НК
-Все используемые в ГИ ферменты должны быть высокоочищенными, т.к. посторонние активности могут привести к побочным реакциям и резко снизить эффективность получения целевых генетических конструкций
Дата добавления: 2016-01-04; просмотров: 110; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!