Область применения, контроль качества

План занятия:

1. Способы стерилизации и дезинфекции лабораторной посуды и лечебного инструментария, особенности предстерилизационной обработки.

2. Определить по готовым посевам антибактериальное действие УФ-лучей в отношении стафилококка и кишечной палочки, зарисовать демонстрацию.

3. Бактериологическое изучение антибактериального действия спирта, перманганата калия, хлорамина на культуры стафилококка и кишечной палочки, зарегистрировать результаты.

4. Определение антимикробного действия антисептических и дезинфицирующих веществ.

5. Изучение антибактериального действия высоких температур.

6. Проведение микробиологического контроля эффективности дезинфекции методом смывов.

7. Определить бактериологическим путем качество проведения стерилизации.

7.1. Проведение посева с целью проверки качества стерилизации шовно­го, перевязочного, стоматологического и хирургического инструмента путем прямого посева и методом смывов.

7.2. Знакомство с результатами биологического теста контроля качества стерилизации, зарегистрировать результаты.

 

Методические указания

1. Способы стерилизации и дезинфекции лабораторной посуды

и лечебного инструментария

Теоретически разобрать принципы и физико-химические основы деконтаминации, учитывая особенности разрушения бактерий, грибов и их спор, виру­сов, вироидов и прионов. Познакомиться с современными методами дезинфек­ции и контролем над ее эффективностью.

Разобрать последовательность и особенность предстерилизационной обра­ботки в зависимости от объекта стерилизации. Познакомиться и осуществить предстерилизационную обработку и упаковку оборудования для обработки су­хим жаром и паром под давлением. Изучить основные методы стерилизации, оборудование, которое используется для ее осуществления.

 

2. Определить по готовым посевам антибактериальное действие УФ-лучей в отношении стафилококка и кишечной палочки,

зарисовать демонстрацию

Ход исследования: 1 мл суспензии стафилококка или кишечной па­лочки в изотоническом растворе хлорида натрия поместить на стерильное часо­вое стекло и облучить лампой 15 мин на расстоянии 10 - 20 см засеять на МПБ и инкубировать 16-24 ч параллельно с контролем из необлученной культуры. Помутнение, свидетельствующее о росте должно наблюдаться только в кон­трольной пробирке. Просмотреть результаты исследования и зарегистрировать в таблице.

Таблица1. Бактерицидное действие УФ-лучей на взвесь бактерий

№	Культура бактерий	Облучение УФ-лучами
		Опыт	Контроль
1.	E. coli
2.	S. aureus

 

Заключение ________________________________________________

 

3.Бактериологическое изучение антибактериального действия спирта, перманганата калия, хлорамина на культуры стафилококка и кишечной

палочки, зарегистрировать результаты

Ход исследования:диски фильтровальной бумаги смачивают раствором исследуемого дезинфицирующего вещества и помещают на поверхность МПА в чашки Петри, засеянные «газоном» культурами стафилококка и кишечной па­лочки. Чашки инкубируют при 37 °С в течение 24 ч. Зарегистрировать результа­ты проведенного опыта в таблице.

 

Таблица 2. Результаты исследования бактерицидных свойств ряда химических дезинфектантов

№	Культура бактерий	Диаметр задержки роста бактерий, мм
		этанол	перманганат калия	хлорамин
1.	E. coli
2.	S. aureus

4. Определение антимикробного действия антисептических

 и дезинфецирующих веществ

Используют два вида тест-объектов: 1) шелковые нити, смоченные Е. coli; 2) шелковые нити, обработанные В. subtilis или другой спорообразующей куль­турой. Нити помещают в растворы фенола (5 %), лизола (5 %), хлорной извести (10 %) на 5 и 60 мин, после, чего отмывают от исследуемых веществ, помещают в МПБ и инкубируют при 37 °С 24 ч. Контрольные тесты не подвергают дей­ствию химических веществ.

Зарегистрируйте результаты исследования антибактериального действия антисептических и дезинфицирующих веществ в табл. 3 (интенсивность роста на МПБ можно описать, используя следующие определения - рост отсутствует, скудный рост, рост культуры средней интенсивности, обильный рост) и сделай­те заключение.

 

Таблица 3. Результаты исследования бактерицидного действия антисептических и дезинфицирующих средств

	Контроль			Фенол		Лизол			Хлорная известь
	E. coli	В. subtilis		E. coli	В. subtilis	E. coli	В. subtilis		E. coli	В. subtilis
Экспозиция, 5 мин
Интенсивность роста
Обработка, 60 мин
Интенсивность рота

 

Заключение ________________________________________________

5. Изучение антибактериального действия высоких температур

Для проведения исследования используют три пробирки МПБ в каждой из которых помещена шелковая нить, пропитанная Е. coli и 3 пробирки с шелковой нитью, обработанные В. Subtilis (в данном методе в качестве тест-культур можно выбрать любые другие культуры не спорообразующих и спорообразующих бактерий). Первые две пробирки подвергают автоклавированию, вторые кипяче­нию, третьи (контроль) никакому воздействию не подвергают. После обработки посевы помещают в термостат и выдерживают при 37 °С 24 ч. Отметьте резуль­таты поставленного опыта в табл. 4 и сделайте заключение.

Таблица 4. Результаты исследования бактерицидного действия высоких температур

	Контроль		Обработка паром под давлением		Кипячение
	E. coli	В. subtilis	E. coli	В. subtilis	E. coli	В. subtilis
Интенсивность роста

Заключение_______________________________________________________

 

6. Проведение микробиологического контроля эффективности

дезинфекции методом смывов

 

О качестве дезинфекции после ее проведения судят по отсутствию на изделиях медицинского назначения золотистого стафилококка, синегнойной палочки и бактерий группы кишечной палочки. Контролю подлежит 1 % от одновременно обработанных изделий одного наименования, но не менее 3-5 единиц.

 Контроль качества дезинфекции осуществляют методом смывов. Взятие смывов производят с поверхностей изделий медицинского назначения до проведения дезинфекции и после нее. Взятие смывов производят стерильными марлевыми салфетками размером 5×5 см, простерилизованными в бумажных пакетах или чашках Петри.

Перед взятием смывов с объектов, в стерильные широкогорлые пробирки со стеклянными бусами стерильной пипеткой разливают по 10 мл стерильной водопроводной воды или нейтрализатора, соответствующего применяемому дезинфицирующему средству:

· для группы окислителей (хлор, йод, перекись содержащие средства) - 0,5-1 % раствор тиосульфата натрия;

· для катионных ПАВ - 0,5 % раствор сульфонола;

· для альдегид- и фенолсодержащих средств - вода;

· для композиционных средств - универсальный нейтрализатор, содержа­щий твин-80 - 3%, сапонин - 3%, гистидин - 0,1%, цистеин - 0,1%.

Салфетку захватывают стерильным пинцетом, увлажняют стерильной водопроводной во­дой из пробирки и протирают поверхность обрабатываемого изделия. После этого салфетку помещают в пробирку с водой и затем встряхивают в течение 5 мин, избегая увлажнения пробки.

У изделий, имеющих функциональные каналы, рабочий конец изделия опускают в пробирку со стерильной водопроводной водой или нейтрализато­ром и с помощью стерильного шприца или пипетки 1-2 раза промывают канал этим раствором.

Смывы по 0,1 мл наносят на поверхность желточно-солевого, кровяного агара и на среду Эндо. Посевы выдерживают в термостате при температуре 37 °С. Результаты учитывают через 48 часов.

При наличии роста микроорганизмов на агаре идентификацию выделенных микроорганизмов проводят в соответствии с действующими методическими документами. Дезинфекцию считают эффективной при отсутствии роста микроорганизмов, указанных выше.

Провести посев смывов с медицинского инструментария и мебели, обработанного перекисью водорода, хлорамином, спиртом.

 

7. Определить бактериологическим путем качество

проведения стерилизации

7.1. Проведение посева с целью проверки качества стерилизации шовно­го, перевязочного, стоматологического и хирургического инструмента

 путем прямого посева и методом смывов

 

Контроль стерильности проводят путем прямого посева (погружения) изделий в питательные среды (мелкие изделия или детали разъемных изделий -целиком, от шовного или перевязочного материала - отрезанные фрагменты). Стерильность крупных объектов изучают путем методов смывов. Материалом засевают две среды - тиогликолевую (для роста бактерий) и среду Сабуро (для роста грибов). Посевы на тиогликолевую среду выдерживают при 32 °С, на среду Сабуро - при 22 °С в течение 7 суток (для изделий после тепловой стерилизации). При отсутствии роста во всех пробирках делают заключение о стерильности изделия. Произвести, соблюдая правила асептики посев перевязочного материала на тиогликолевую среду и среду Сабуро.

7.2. Знакомство с результатами биологического теста контроля

качества стерилизации, зарегистрировать результаты

 

Бактериологический метод контроля является объективным методом оценки эффективности работы паровых, воздушных стерилизаторов и основан на выявлении гибели спор тест-культур. Осуществляется с помощью биотестов, которые представляют собой дозированное количество спор тест-культуры, помещенное в упаковку (инсулиновые флаконы, чашечки из алюминиевой фольги, диски из фильтровальной бумаги). Для контроля паровых стерилизаторов используются высушенные споры тест-культуры Bacillus stearothermophilus ВКМ В-718; для контроля воздушных стерилизаторов - Bacillus licheniformis штамм G.

Биотесты готовят бактериологические лаборатории центров дезинфекции и стерилизации или центров гигиены и эпидемиологии. После проведения стерилизации тест-культуры засевают на МПБ и инкубируют 24-48 ч. Бульон остается прозрачным, если споры погибли, т.е. если стерилизация эффективна, бульон не должен мутнеть. Ознакомьтесь с демонстрацией посевов тест-культур на МПБ, сделайте заключение об эффективности, проведенной стерилизации.

 

Контрольные вопросы

Что такое дезинфекция?

Что такое стерилизация?

Чем отличается стерилизацияот дезинфекции?

Какие методы физической дезинфекции Вам известны, механизм их дей­ствия, бактерицидная эффективность?

Какие методы используют для стерилизации?

Какие предметы лучше подвергать стерилизации сухим жаром?

Что такое пастеризация и тиндализация, в каких случаях они применяются?

Какие методы контроля качества стерилизации Вам известны?

Какова методика бактериологического контроля эффективности стерилиза­ции?

Что такое стерилизация фильтрованием?

Назовите современные методы стерилизации и дезинфекции, перечислите антисептические препараты.

Как проводят дезинфекцию лабораторной посуды и изделий медицинского назначения?

Какие методы оценки качества дезинфекции изделий медицинского назначения Вам известны?

С какой целью и как осуществляют предстерилизационную очистку лабораторной посуды и изделий медицинского назначения?

Как оценить качество предстерилизационной обработки?

 

ПРИЛОЖЕНИЕ К ЗАНЯТИЮ №15

 

1. Определение понятий: «деконтаминация», «стерилизация», «дезин­фекция», «асептика».

Деконтаминация - удаление микробного загрязнения на каких-либо объек­тах до безопасного уровня или полного уничтожения.

Стерилизация - это полное уничтожение всех форм жизни микроорганиз­мов (включая бактериальные споры) на поверхности и внутри предметов, а также в жидкостях и в воздухе.

Дезинфекция - это уничтожение патогенных микробов и снижение общей микробной обсемененности материала или объекта. Однако следует помнить, что не существует универсальных дезинфицирующих средств, которые приприменении могли бы убить все известные патогенные бактерии, т. е. дезинфектанты применяемые в «чистой клинике», малоэффективны например, в ту­беркулезном диспансере. Дезинфицирующие средства не столь универсальны в сравнении с методами стерилизации.

Асептика - система профилактических мероприятий, направленная не предотвращение попадания микроорганизмов в рану, в лекарственное веще­ство, на питательные среды, материал для исследования, чистую культуру и т.д.

 

2. Дезинфекция, стерилизация и предстерилизационная очистка в ЛПУ

 

В настоящее время действует отраслевой стандарт (ОСТ 42-21-2-85), определя­ющий методы, средства и режимы стерилизации и дезинфекции изделии медицинского назначения, который дополнен приказом № 408 и «Методическими указаниями по дез­инфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации предметов медицинского назначения», утвержденным МЗ России 30 декабря 1998 г. № МУ - 287-113. Эти до­кументы являются обязательными и определяющими для всех лечебно-профилактических учреждений и дают возможность широкого выбора средств и мето­дов, наиболее подходящих в условиях данного лечебного учреждения.

Дезинфекция, предстерилизационная очистка и стерилизация изделий медицинского назначения направлена на профилактику внутрибольничных инфекций у пациентов и персонала лечебно-профилактических учреждений (ЛПУ).

Дезинфекцию изделий проводят с целью уничтожения патогенных и условно-патогенных микроорганизмов - вирусов (в том числе возбудителей парентеральных вирусных гепатитов, ВИЧ-инфекции), бактерий (включая микобактерии туберкулеза), грибов на изделиях медицинского назначения, а также в их каналах и полостях. Дезинфекции подлежат все изделия после применения их у пациента. После дезинфекции изделия применяют по назначению или (при наличии показаний) подвергают предстерилизационной очистке и стерилизации.

Стерилизацию изделий проводят с целью умерщвления на изделиях или в изделиях микроорганизмов всех видов, в том числе споровых форм микроорганизмов. Стерилизации подлежат все изделия, соприкасающиеся с раневой поверхностью, контактирующие с кровью в организме пациента или вводимой в него, инъекционными препаратами, а также изделия, которые в процессе эксплуатации контактируют со слизистой оболочкой и могут вызвать ее повреждение.

Изделия многократного применения, подлежащие стерилизации, перед стерилизацией подвергают предстерилизационной очистке. Предстерилизационную очистку проводят с целью удаления с изделий белковых, жировых и механических загрязнений, а также остатков лекарственных препаратов.

Наиболее широко в ЛПУ используется химический метод дезинфекции способом полного погружения. Для изделий и их частей, не соприкасающихся с пациентом, используется метод двукратного протирания салфеткой из бязи, марли, смоченной в дезинфицирующем растворе во избежание попадания дезинфицирующего раствора вовнутрь изделия. После дезинфекции способом погружения изделия должны быть промыты в проточной воде до полного удаления запаха дезинфицирующего средства. Дезинфицирующий раствор должен применяться однократно. При дезинфекции кипячением и паровым методом изделия из полимерных материалов должны быть упакованы в марлю.

Нельзя использовать для протирания средства дезинфекции: сайдекс, формалин, глутарал, бианол, дезоксон-1 и др., так как они оказывают побочное токсическое действие на организм. Применять в ЛПУ можно только те дезинфицирующие средства, которые официально разрешены департаментом Госсанэпиднадзора Минздрава России, зарегистрированы в Бюро по регистрации лекарственных средств, и на которые имеются: Свидетельство о государственной регистрации, Сертификат соответствия системы ГОСТ и Методические указания по применению, утвержденные департаментом Госсанэпиднадзора Минздрава России. К химическим методам дезинфекции относятся:

• орошение;

• протирание;

• полное погружение;

• распыление.

В настоящее время существует группа дезинфицирующих средств, позволяющих провести дезинфекцию и предстерилизаиионную очистку одномоментно: «Виркон», «Дюльбан», «Пероксимед» и др.

При комбинированном методе дезинфекция осуществляется в специальных дезинфекционных камерах. Паровоздушный - увлажненным воздухом при температуре дезинфекции - 110 °С, давлении 0,5 атм., экспозиции 20 мин. Пароформалиновый: в режиме 0,5 атм., t - 90 °С, экспозиция 30 мин.

Сущность камерной дезинфекции заключается в прогревании содержимого камер горячим воздухом (паром) до определенной температуры при избыточном давлении, а при необходимости усиления воздействия пара - дополнительное введение в камеру формальдегида (формалина).

Таблица 5. Основные методы дезинфекции

№	Метод дезин­фекции	Форма (вещество), объект, режим обработки	Механизм и бакте­рицидная эффектив­ность воздействия	Контроль эффек­тивности
Физические методы
1.	Механи­ческий	Вытряхивание, проветрива­ние помещений, влажная уборка, стирка с моющими средствами, фильтрование растворов   Наиболее эффективно фильтрование через асбе­стовые и целлюлозные бактериологические фильтры	Механически удаля­ет с или в объекте микробы, не может сопровождаться обеззараживанием объекта, значительно уменьшает    число патогенных микро­бов   Эффективен против всех форм жизни, исключая вирусы, микоплазмы и фильтрующие формы некоторых видов бактерий	Бактериологиче­ский. Метод смы­вов. Исследуют 1% не менее 3-5 единиц одновре­менно обработан­ных изделий, од­ного наименова­ния. Смыв осуществляют марле­выми салфетками, по 0,1мл смыва засевают на поверхность желточно-солевого агара, кровяного arapa и среды Эндо. Среды инкубируют при 37 °С в течение 48 часов. В случае отсутствия роста S. aureus, P. aeruginosa и БГПК, проведенная дез­инфекция изделий медицинского назначения счита­ется качествен­ной.
2.	Обработка высокой температурой	Кипячение в дистиллированной воде (дезинфекция стеклянных, металлических, резиновых изделий) не менее 30 минут с момента закипания, в 2 % растворе бикарбоната натрия (соды) - 15 мин.   Пастерилизация, заключается в нагревании жидкости до 50-60 °С в течение 15-30 мин, 70 -80° С в течение 5-10 мин. Применяют для увеличения срока хранения молока, пива, вина	Вызывает денатурацию белка, что приводит к уничтожению вирусов, грибов вегетативных форм бактерий и простейших,  сохраняют жизнеспособность споры большинства бактерий, цисты не­которых простейших и резистентные ви­русы.   Частичная деконтаминация пищевых продуктов, уничтожение форм вызывающих молочно-кислое, уксусное и др. виды брожения направлены на уве­личение срока хра­нения продуктов.
3.	УФ-лучи	Проводят ртутными бакте­рицидными лампами БУВ-15, БУВ-30, длина излу­чения 253 - 265 нм, более современные ксеноновые лампы. Применяется для дезинфекции воздуха и по­верхностей в микробиоло­гических лабораториях, боксах, операционных, перевязочных и др. помеще­ниях лечебно-профилактических учре­ждений	Действует на ДНК. вызывая образование димеров тимина -летальная мутация, достаточно эффек­тивное средство для обработки поверхно­стей, воздуха, про­зрачных растворов, но в связи с низкой проникающей спо­собностью не при­годны для обработки иных объектов	Бактериологиче­ский (см. методи­ческие указания к занятию №15, пункт. 2)
Химические методы
1.	Обработ­ка хлор-содержа­щими препара­тами	Хлорная известь, хлорамин Б, гипохлорит кальция, гипохлорит натрия, исполь­зуются для хлорирования воды, обработки полов, поверхностей мебели в пала­тах, стен, для замачивания инструментов в предстерилизациониой обработке	Окисляют или гало-генизируют (йод со­единяется с остатка­ми тирозина) белки. Действует на чув­ствительные формы бактерий, грамположительных кокков и грамотрицательные бактерии, вызываю­щие кишечные инфекции	То же, что в мето­дах 1 -2
2.	Обработ­ка окис­лителями	Перекись водорода с мою­щим средством и без него, перманганат калия. Приме­няют для предстерилизационной обработки лечебного и бактериологического ин­струмента	Повреждают фер­ментные системы микроорганизмов, уничтожают вегета­тивные, а в некото­рых случаях и спо­ровые формы.
3.	Обработ­ка фено­лами	Карболовая кислота, лизол, используются для обработ­ки полов, поверхностей ме­бели в палатах, стен, для замачивания инструментов в предстерилизационной обработке. Лизол может применяться в инфекцион­ной больнице, в туберку­лезном диспансере, их нетоксичные производные, пр. гексахлорофен для ан­тисептики	Денатурируют бел­ки, повреждают кле­точные мембраны. Высокоэффективны против вегетативных форм бактерий
4.	Обработ­ка спир­тами	70% водный раствор эта­нола. Используют для дез­инфекции, в основном об­работке рук персонала мед. учреждений, рабочих по­верхностей мебели и анти­септики	Растворяет липиды, денатурирует белки. Обладает антибакте­риальной и антифун-гицидной активно­стью, но не эффек­тивен против неко­торых вирусов и спор бактерий.
5.	Обработ­ка фор­мальде­гидами	Формалин. Используется для дезинфекции при рабо­те с устойчивыми видами бактерий, в том числе воз­будителями особо опасных инфекций, туберкулеза и т.п. обладает выраженной противовирусной активностью	Денатурирует белок, является мощным мутагеном. Приме­няется в качестве дезинфектанта, вы­сокотоксичен для человека. Высоко­эффективен против всех вегетативных форм и вирусов.
6.	Примене­ние поверхност-но-активных веществ - ПАВ	Мыло и детергенты.   Катионные детергенты, в том числе четветично-аммониевые соединения ЧАС	Обеспечивают меха­ническое удаление микробов с поверх­ности кожи и объек­тов внешней среды.   Нарушают функцию фосфолипидов мем­бран

3. Предстерилизационная обработка и контроль эффективности стерилизации.

Материалы, оборудование контактировавшие с микроорганизмами, в бак­териологической лаборатории; с биологическими жидкостями и тканями паци­ента в стоматологической клинике перед стерилизацией необходимо подгото­вить. В большинстве случаев, в начале его необходимо продезинфицировать или простерилизовать, например: пробирки с культурами бактерий, затем механиче­ски или химически очистить, промыть, высушить, упаковать с помощью специ­альной бумаги, биксов, двойной мягкой упаковки из бязи, в коробках с филь­тром и т.д. Режим очистки и высушивания определяются видом изделия и ха­рактером загрязнения.

Контроль эффективности стерилизации осуществляется: во-первых, по по­казаниям приборов, контролирующих набор заданной температуры, давления и т.д.; во-вторых, с использованием физико-химических тестов, в которых ис­пользуются тест-вещества, которые в виде кристаллов в ампулах или бумаж­ных индикаторов закладываются и стерилизуются с основным объектом стери­лизации, при соответствующей обработке кристаллы спаиваются, а индикаторы меняют цвет. Например, ампулы с бензойной кислотой в которых вещество ви­де белых кристаллов с гранулами красного красителя после автоклавирования спаиваются в единый конгломерат малинового цвета; теомочевина с синими кристаллами красителя при обработке сухим жаром образует монолит цвета морской волны.

Бактериологические лаборатории осуществляют контроль качества стери­лизации бактериологическим методом. Он включает в себя несколько подхо­дов: во-первых, это прямой посев (погружение) изделия в питательные среды целиком, фрагментов шовного и перевязочного материала, стерильность круп­ных изделий контролируется методом смывов. Пробы для исследования (не ме­нее 1 % из одной упаковки) засевают на сахарный бульон, тиогликолевую сре­ду выдерживают при 32 °С, на среду Сабуро - при 22 °С в течение 7 сут. Во-вторых, используют чашки Петри с салфеткой, пропитанной для стерилизации паром под давлением - Bacillus stearotermophilus, сухим жаром - Bacillus licheniformis, после стерилизации салфетки помещают в МПБ и инкубируют при 37 °С в течение 48 ч., при качественной стерилизации бульон остается прозрачным.

Таблица 6. Основные методы стерилизации и их характеристика

№	Метод	Оборудование и материалы	Режим обработки	Материал
Физические методы
1.	Прока­ливание на пла­мени	Спиртовка	До красного каления	Бактериологические пет­ли, мелкие металлические инструменты
2.	Обжиг (объект смачи­вают 96 % спир­том и обжи­гают в пламени горелки)	Спиртовка	До окончания горе­ния спирта на объек­те	Бактериологический шпа­тель, др. мелкие стеклян­ные и более крупные пр. пинцет инструменты
3.	Сухим жаром	Сухожаровой шкаф (печь Пастера)	180 °С, 60 мин (160 °С, 150 мин)	Металлические инстру­менты, стеклянная посуда, градуированные и пасте­ровские пипетки, вату, марлю в бумажных паке­тах
4.	Паром под дав­лением	Автоклав	120 °С, 1 атм. - 45 мин; 132 °С, 2 атм. - 20 мин	Питательные среды (МПА, МПБ), заразный материал, изделия из стекла, металла, латекса, халаты, белье, перчатки, перевязочный, шовный материал, некоторые ле­карства
5.	Текучим паром (дробная стерили­зация)	Аппарат Коха или автоклав с откры­той выпускной трубкой	100 °С в течение 30 мин. с интервалом в 24 часа трехкратная обработка	Применяется для молока, желатина, питательных сред и растворов, содер­жащих витамины, некото­рые углеводы, картофель­ный крахмал, аммиачные соли
6.	Тиндализация	Водяная баня с терморегулятором	56 – 58 °С, 5 дней: 1 день 2 ч., остальные по 1 ч.	Витамины, белковые жид­кости (сыворотка, асцитическая жидкость, пита­тельные среды, содержа­щие белок)
7.	В среде горячих стеклянных шариков	Стерилизатор, за­полненный стек­лянными шарика­ми		Зубные боры, рабочие ча­сти зондов, гладилок и другие стоматологические инструменты
8.	Лучевая стерили­зация	γ - излучение или с помощью уско­ренных электро­нов в специальной бетонной камере	В промышленных масштабах в течение нескольких часов	Для стерилизации однора­зовых инструментов, хи­рургический инструмен­тарий, изделия из пласт­масс, пр. шприцы, перча­ток, белья, вакцин, иммун­ных сывороток и лекар­ственных средств.
Механические методы
1.	Филь­трова­ние	Фильтры из кол­лодия диаметр пор, которого меньше вирусов	Фильтрование про­водится или под по­вышенным давлени­ем - жидкость нагнетается в при­емник, или разре­женным давлением в приемнике вызывая всасывание жидко­сти в приемник	Сыворотка, ряд лекар­ственных веществ
Химические методы
1.	Раство­рами химиче­ских средств	6 % раствор пере­киси водорода	Экспозиция 6 ч. с полным погружением и заполнением поло­стей	Изделия из полимерных материалов, стекла, коррозионностойких метал­лов
		4,8 % раствор первомура	Экспозиция 15 мин	Лигатурный шовный ма­териал
2.	Газовая стерили­зация	Окись этилена, окись этилена с бромистым мети­лом, озон, пары раствора фор­мальдегида в этиловом спирте. Стационарные газовые стерилизаторы, портатив­ные анаэростаты (метод не безопа­сен для людей и окружающей сре­ды, т.к. стерилизующие агенты остаются на объ­екте)	При температуре от 35 до 55 °С выдер­живают от 4 - 16 ч. до 1 - 21 сут. В зави­симости от вида газа, стерилизатора, объекта стерилизации	Оптика, кардиостимуля­торы, сложной техники, наконечников турбин стоматологических уста­новок
3.	Плаз­менная стерили­зация	Плазменный стерилизатор, в ко­тором применяет­ся стримерный разряд в аргоне при атмосферном давлении	10 - 15 мин.	Для  стерилизационной обработки инструментов и стоматологических оттис­ков (слепков)

 

 

З А Н Я Т И Е 16

Дата ______________

 

Тема: Плановый бактериологический контроль в ЛПУ.

План занятия:

1. Методы планового санитарно-бактериологического контроля в ЛПУ.

1.1. Исследования бактериальной обсемененности воздушной среды.

1.2. Схема бактериологического исследования на стафилококк.

1.3. Исследования микробной обсемененности объектов внешней среды.

1.4. Бактериологический контроль эффективности обработки рук персонала.

 

Методические указания

1. Методы планового санитарно-бактериологического контроля в ЛПУ

1.1. Исследования бактериальной обсемененности воздушной среды

Исследования бактериальной обсемененности воздушной среды проводят в помещениях лечебных организаций в зависимости от их функционального назначения на санитарно-микробиологические показатели:

· общее количество микроорганизмов в 1 м³ воздуха (КОЕ/м³);

· количество колоний S. aureus в 1 м³ воздуха (КОЕ/м³);

· количество плесневых и дрожжевых грибов в 1 м³ воздуха.

Пробы воздуха отбирают аспирационным методом с помощью аппаратов и устройств, разрешенных к применению в установленном порядке. При переносе аппаратов и устройств для отбора проб воздуха из одного помещения в другое их поверхность обрабатывают раствором дезинфицирующего средства. Столик, внутренние стыки, крышку и прочие части прибора с внутренней и внешней стороны протирают спиртом (70 %). Количество пропущенного воздуха должно составлять 100 дм³ для определения общего количества микроорганизмов, дрожжевых и плесневых грибов и 250 дм³ для определения S. aureus. Исследование воздуха седиментационным методом не допускается.

Для определения общего количества микроорганизмов в 1 м³ воздуха забор проб проводят на питательный агар типа МПА, СПА, ГРМ-агар и другие, приготовленные согласно инструкций по применению. Посевы инкубируют при температуре 37 °С в течение (48 ± 2) ч, подсчитывают количество выросших колоний и производят перерасчет на 1 м³ воздуха. При наличии роста колоний дрожжевых и плесневых грибов, их подсчитывают и делают пересчет на 1 м³ воздуха. В протоколе количество дрожжевых и плесневых грибов указывают отдельно.

 

1.2. Схема бактериологического исследования на стафилококк

1. Первый день.

Для определения наличия S. aureus забор проб проводят на желточно-солевые среды на основе сред: элективно-солевой агар, стафилококк-агар, маннитолагар или среда № 10 по ГФ XII, агар Байд-Паркер. Чашки с посевами инкубируют в термостате при 37 °С (48 ± 2) ч.

2. Второй-третий день.

На вышеуказанных средах стафилококк растет в виде круглых, блестящих, маслянистых, выпуклых, пигментированных колоний. Следует учитывать, что стафилококки, выделенные от человека, дают положительную лецитовителлазную реакцию в 60-70 % случаев. Отвивка на скошенный агар для дальнейшего исследования не менее 2 колоний, подозрительных на стафилококк. Для исследования отвивают прежде всего колонии, дающие положительную лецитовителлазную реакцию (образование радужного венчика). При отсутствии на чашках таких колоний дальнейшему исследованию подвергаются пигментированные колонии, схожие по морфологии со стафилококком. При одновременном наличии на чашках колоний стафилококка, отличающихся по пигменту, следует отвивать не менее двух колоний различного вида. Пробирки с посевом помещают в термостат при 37 °С на (24 ± 2) ч.

3. Четвертый день.

После инкубации у выделенных штаммов проверяют морфологию, тинкториальные свойства (окраска по Граму) и наличие плазмокоагулирующей активности в реакции плазмокоагуляции (РПК).

Окраску по Граму проводят общепринятым методом. Под микроскопом окрашенные по Граму стафилококки имеют вид фиолетово-синих кокков, располагающихся гроздьями или небольшими кучками («кружево»).

Если культура обладает только плазмокоагулирующей или только лецитовителлазной активностью, то для окончательного ответа требуется учитывать другие признаки, позволяющие определить принадлежность штамма к виду S. aureus (ферментация маннита, гемолитическая активность).

При необходимости, после выделения чистой культуры, проводят определение чувствительности/устойчивости к антибиотикам, дезинфицирующим средствам, бактериофагам.

4. Пятый день.

Учет результатов дополнительных тестов. Окончательная выдача ответа.

1.3. Исследования микробной обсемененности объектов внешней среды

Бактериологическое исследование микробной обсемененности объектов внешней среды предусматривает определение стафилококков, бактерий группы кишечных палочек, сальмонелл, синегнойной палочки. Отбор проб с поверхностей различных объектов осуществляют методом смывов. По эпидемиологическим показаниям номенклатура исследований микробной обсемененности объектов внешней среды может быть расширена.

Взятие смывов производят стерильными ватными тампонами, вмонтированными в пробирки. Для увлажнения тампонов в пробирки наливают по 2,0 мл стерильной 0,1 % пептонной воды с добавлением нейтрализаторов дезинфицирующих средств.

При контроле мелких предметов смывы забирают с поверхности всего предмета. При контроле предметов с большой поверхностью смывы проводят в нескольких местах исследуемого предмета общей площадью примерно 100 см².

Для обнаружения стафилококков делают высев 0,2 - 0,3 мл смывной жидкости в пробирку с 5,0 мл 6,5 % солевого бульона. Засеянные пробирки инкубируют при 37 °С в течение (24 ± 2) ч, после чего делают высев на желточно-солевые среды на основе сред: элективно-солевой агар, стафилококкагар, манитолагар или среда № 10 по ГФ XII, агар Байд-Паркер. Дальнейшие исследования выделенных культур стафилококков проводят по методике описанной выше.

Для обнаружения бактерий группы кишечных палочек делают высев 0,2 - 0,3 мл смывной жидкости в пробирку с 5,0 мл среды Кесслера. Засеянные пробирки инкубируют при 37 °С в течение (24 ± 2) ч и делают пересев на среду Эндо. Выросшие колонии на среде Эндо подвергают дальнейшему изучению для установления их возможной принадлежности к патогенным энтеробактериям.

Для обнаружения сальмонелл делают высев 0,2-0,3 мл смывной жидкости в пробирку с 5,0 мл одной из сред обогащения (магниевая, селенитовая или среда Раппапорта-Вассилиадиса). Засеянные пробирки инкубируют при 37 °С в течение 18 - 20 ч, делают пересев на среду Эндо и висмут-сульфит агар с последующим отбором подозрительных колоний и их идентификацией.

Для обнаружения синегнойной палочки делают высев на среду № 8 (бульон для накопления стафилококков и синегнойной палочки) и среду № 9 (для определения синегнойной палочки по наличию пигмента пиоцианина) или питательные среды в соответствии с ГФ XII. Колонии, подозрительные на синегнойную палочку (колонии с ровными или слегка волнистыми краями, гладкой блестящей поверхностью с характерным запахом и пигментом, однако, следует учесть, что запах и пигмент могут сильно варьировать или вообще отсутствовать), пересевают на скошенный агар. P. aeruginosa - грамотрицательная, подвижная, оксидазоположительная палочка, окисляющая, но не ферментирующая глюкозу, дающая рост при 42 °С.

 

1.4. Бактериологический контроль эффективности обработки

рук персонала

Смывы с рук персонала производят стерильными марлевыми салфетками размером 5×5 см, смоченной в нейтрализаторе. Марлевой салфеткой тщательно протирают ладони, околоногтевые и межпальцевые пространства обеих рук. После отбора проб марлевую салфетку помещают в широкогорлые пробирки или колбы с физиологическим раствором и стеклянными бусами, встряхивают в течение 10 мин. Жидкость засевают глубинным способом на 2 чашки Петри с мясопептонным агаром (по 0,5 мл) и в 2 пробирки с 0,5 %-м сахарным бульоном (по 1 мл). Посевы инкубируют при температуре 37 °С в течение 48 ч. При учете результатов рост патогенных и условно патогенных бактерий должен отсутствовать.

 

Контрольные вопросы

Что выступает объектами бактериологического контроля в ЛПУ?

Какие особенности и эпидемиологические показания бактериологического контроля при плановом обследовании ЛПУ?

Как осуществляется микробиологический контроль в бактериологических боксах?

Как осуществляется контроль стерилизации питательных сред?

Какие санитарно-микробиологические учитывают при исследовании бактериальной обсемененности воздушной среды?

Каким методом отбираются пробы воздуха?

Как определяется общее количество микроорганизмов в 1м³ воздуха?

Как осуществляется схема бактериологического исследования на стафилококки?

Определение каких микроорганизмов предусматривает бактериологическое исследование микробной обсемененности объектов внешней среды?

О чем свидетельствует положительная лецитовителлазная реакция при выявлении стафилококков?

Какие среды используют для обнаружения синегнойной палочки?

Как осуществляется бактериологический контроль эффективности обработки рук персонала?

Какие питательные среды используют для выделения стафилококков из воздуха

ПРИЛОЖЕНИЕ К ЗАНЯТИЮ №16

1. Санитарно-микробиологические исследования с целью контроля санитарного состояния лечебно-профилактических учреждений (ЛПУ) проводят как специалисты бактериологических лабораторий, так и специалисты органов Роспотребнадзора. Различают плановый бактериологический контроль(кратность его проведения определяют действующие официальные документы) и обследование по эпиде­мическим показаниям(при возникновении в ЛПУ массовых инфек­ционных заболеваний).

Бактериологическому контролю подлежат отделения хирургического профиля, анестезиологии и реанимации, асептические блоки для иммунодефицитных больных, а также стерилизационные комнаты, помещения аптек и станций (отделений) переливания крови, пищеблок, буфетные и столовые.

Объектами санитарно-микробиологических исследований при проведении бактериологического контроля в ЛПУ выступают эпи­демиологически значимые предметы госпитальной среды: хирурги­ческий инструментарий, шприцы, изделия из резины и пластика, операционное бельё, шовный и перевязочный материал, кожа и сли­зистые оболочки верхних дыхательных путей медицинского персона­ла, воздух, стерилизаторы, лекарства для инъекций, грудное молоко и растворы для кормления новорождённых, кровь и её компоненты, костный мозг, кровезаменители и консервирующие растворы и др.

При плановых обследованиях ЛПУ проводят исследования только на СПМО, а при обследованиях по эпидемическим показаниям - на пато­генные и условно-патогенные возбудители. Идентификацию выделен­ных микроорганизмов осуществляют в соответствии с действующими официальными документами и методиками.

 

2. Мероприятия, обеспечивающие асептические условия при посевах

---

Дата добавления: 2018-04-05; просмотров: 867; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

---

---

Мы поможем в написании ваших работ!