Проектирование биотехнологического производства. Стадия приготовления пит. Среды.
Осуществляется в несколько стадий, число и характер, которых зависят от св-в используемого МО и св-в выпускаемого продукта, масштаба и способа производства, и от применяемого оборудования.
Центральная стадия – культивирование клеток МО продукта от исходной до конечной концентрации в заданное время при определенных оптимальных условиях. Клетки растут и размножаются, осуществляется обмен и превращения с помощью ферментов компонентов пит среды в собственную биомассу. Сама биомасса клеток, а чаще всего метаболиты, являются целевым продуктом, они могут образовываться одновременно с накоплением биомассы, или несколько позже (вторичные метаболиты), в этом случае оптимальные условия для роста клеток могут не совпадать с таковыми для биосинтеза целевого продукта тогда эти 2 стадии необходимо разделить. В крайнем случае сменяя ростовую среду на поддерживающую, которая обеспечивает высокую биосинтетическую активность. Эту стадию называют ферментацией, а аппарат – ферментатор. Получение целевого продукта так же невозможно при загрязнении посторонней микрофлоры.
Конкурируя с клетками продукта за источники питания может уменьшиться ростовая и биосинтетическая активность культуры продукта вплоть до гибели. Попадая в готовый продукт клетки посторонний культуры могут уменьшить качество продуктата.
Культивирование клеток при небольшом объеме пр-ва осущ-ся периодическим способом позволяющим в большей степени обеспечить асептическое протекание проц-са. Культивирование начинается с инокуляции (это помещение стерильной среды в стерильном аппарате посевной культуры без посторонней микрофлоры) затем продолжается на протяжении всей работы биореактора в асептических условиях для этого ап-т должен надежно герметизирован, воздух очищен, отстерилизован, подача стерильных добавок и отбор проб осущ-ся в соответствии с правилами асептики. Проблемой яв-ся очистка воздуха, подаваемого в ап-т от взвешенных, тв., и жид. частиц, особенно от МО, в 1 м3 сод-ся до 104 МО. В биореакторы на аэрацию подаются до 10 объемов воздуха на 1 объем среды в час, для поверх-ой аэрации до 120 объемов воздуха на 1 объем среды в час при барботажной аэрации. Цикл биореактора длится от 30 до 200-360 ч. Воздых на входе и на выходе должен быть очищен до приемлемых норм. Проводят в 3 этапа: 1) перед компрессором (заборный фильтр) удаляется до 50 % примесей, 2) основное фильтрование (головной фильтр), удаляется не менее 98% 3) перед биореактором (индивидуальный фильтр) окончательная очистка и стерилизация. Соблюдение асептических условий при культивировании МО способствует поддержанию в производст-ом помещении требуемого уровня чистоты. Практика показала, что при работе биореактора с надежной герметизацией с такими высокочувствительными культурами, как клетки млекопитающих вполне достаточно поддержание в рабочем помещении положительного давления с подачей стерильного воздуха, систематической обработки поверхности помещений дез. раствором, типа перекиси водорода, переодевание персонала в спец одежду, и проход в раб. помещение через воздушный шлюз, это соответствует зоне D по правилам GMP.
|
|
|
|
|
|
ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ. Все стадии производства предшествующие основному культивированию должна обеспечить это культивирование. Соответственно все стадии должны проходить асептические условия. Приговление пит. среды требует воды высокой степени очистки (удельное сопротивление не более 18 МО м /см), содержание кремния не более 0,5 мг/л, содержание ионов Ме не более 0,001 мг/л, стерильной и оперогенной. Этой же водой рекомендуют ополаскивать внутренние полости ап-та для приготовления среды и культивирования клеток, а тк же приготавливать из нее пар, для стерелизации ап-тов пит среды. Большая часть пит сред для культивированных МО – термостабильно и их можно
Дата добавления: 2015-12-17; просмотров: 14; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!