Дополнительный материал к занятию
Методы выделения чистых культур бактерий
Используют бактериологический, биологический (заражение лабораторного животного), био-бактериологический методы.
Сущность бактериологического (культурального) метода состоит в посеве исследуемого материала с использованием методов механического разобщения микробов, чтобы получить рост в виде изолированных колоний.
Методы разобщения микроорганизмов основаны на:
1) механическом разобщении бактериальных клеток на поверхности плотных питательных сред шпателем (по Дригальскому), или рассеву штрихами калиброванной петлей (по Гольду), или тампоном, после забора им исследуемого материала;
2) фильтрации исследуемого материала перед посевом (материал пропускают через специальные фильтры с определённым диаметром пор и разделяют содержащиеся в нем микроорганизмы по величине). Этот метод применяют, например, для очистки вирусов от бактерий, а также при получении бактериофагов и токсинов (в фильтрате остается фаг, или очищенный токсин, тогда как на фильтре остаются бактериальные клетки);
3) предварительном разведении в жидкой среде посевного материала с последующим высевом определённой посевной дозы на чашки с агаризованной питательной средой (метод пластинчатых разводок по Коху);
4) биологических свойствах микроорганизма, культуру которого необходимо выделить из исследуемого материала:
|
|
|
а) для получения культур психрофильныхбактерий посевы инкубируют при низких температурах для избирательного подавления размножения сопутствующей микрофлоры;
б) метод Шукевича, используемый для выделения культуры бактерий, характеризующихся «ползучим» ростом (протеи);
в) для выделения спорообразующих бактерий прогревают посевной материал на водяной бане при 800С 10-15 мин, перед высевом. При этом погибают вегетативные формы, а споры в таких условиях сохраняются и при посеве на соответствующую питательную среду прорастают;
г) метод ингибирования основан на различном действии некоторых химических веществ и антибиотиков, которые добавляют в питательную среду с целью задержки роста сопутствующих микроорганизмов. Эффект ингибирования учитывается при создании элективных питательных сред . С этой же целью может быть использована предварительная обработка исследуемого материала химическими веществами перед посевом. Например, обработка материала перед посевом серной кислотой (5% раствор) быстро убивает большинство микроорганизмов, кроме кислотоустойчивых, которые выживают в этих условиях.
Биологический метод основан на способности некоторых бактерий быстро размножаться в организме чувствительных к ним лабораторных животных (биопроба) или растений. Для заражения подбирают наиболее восприимчивые к предполагаемому возбудителю инфекции виды животных или виды растений. После появления у заражённых организмов признаков болезни их убивают. Органы исследуют гистологически, микроскопически для обнаружения в них возбудителя. В некоторых случаях производят посев органов и тканей на питательные среды с целью выделения чистой культуры возбудителя (био-бактериологический метод).
|
|
|
Техника посева микроорганизмов на питательные среды
Посев уколом осуществляется уколом микробиологической петлёй или иглойв столбик плотной или полужидкой питательной среды. Применяется для выращивания анаэробов, для выявления характера роста по ходу укола и для определения газообразования. У подвижных и неподвижных микроорганизмов характер роста будет различным. Посев уколом практикуют также для длительного хранения культур.
Посев петлей (посев штрихами) по методу Гольда. На внешней стороне дна чашки Петри с питательным агаром проводят разграничительные линии, разделяющие её на 4 сектора. Исследуемый материал вносят петлёй в первый сектор и проводят ею параллельные линии по всему сектору на расстоянии одна от другой около 5 мм. Этой же петлёй, не изменяя её положения по отношению к агару, проводят такие же линии на других секторах чашки. В том месте, где на агар попало большое количество микробных клеток, рост микроорганизмов будет в виде сплошного штриха. На секторах с небольшим количеством клеток микроорганизмы вырастают в виде отдельных колоний.
|
|
|
Посев шпателем по методу Дригальского. Используют 3 чашки Петри с питательной средой. На 1-ю чашку петлёй или пипеткой наносят каплю исследуемого материала и растирают стерильным шпателем по всей поверхности питательного агара. Затем шпатель, не обеззараживая, переносят во 2-ю чашку и втирают оставшиеся на нём микроорганизмы в поверхность питательной среды. Далее шпатель переносят в 3-ю чашку и аналогичным образом производят посев. На 1-й чашке вырастает максимальное количество колоний, на 3-й – минимальное. В зависимости от содержания микробных клеток в исследуемом материале на третьей или на второй и третьей чашках вырастают отдельные колонии, пригодные для выделения чистой культуры.
Посев по методу Шукевича . Исследуемый материал засевают в конденсационную воду свежескошенного агара. При размножении подвижные формы микробов из конденсационной воды распространяются по агару, как бы «вползают» на его поверхность. Отсевая материал из верхнего края роста культуры в конденсационную воду свежескошенного агара и повторяя это несколько раз, можно выделить чистую культуру.
Дата добавления: 2020-04-25; просмотров: 102; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!