Определение эффективности среды
Эффективность среды - выход микробных клеток с 1 мл питательной среды (в млрд./мл) и прирост числа микроорганизмов относительно засеянного (показатель эффективности).
Оценку качества накопительных питательных сред по показателю эффективности производят путем определения концентрации микробных клеток в среде после соответствующей инкубации.
Определение показателя прорастания микроорганизмов
Данный показатель определяют для плотных питательных сред.
Подготовку тест-штаммов для контроля, их посев в среду осуществляют по аналогии с методикой определения показателей чувствительности и скорости роста. Посев осуществляют параллельно на испытуемую и контрольную среду <*>, как правило из 2-х разведений, обеспечивающих формирование на чашке Петри не менее 25 и не более 150 колоний.
Показатель прорастания микробных клеток определяют как отношение среднего числа колоний, образовавшихся на испытуемой среде, к среднему числу колоний на контрольной среде, выраженное в процентах.
Определение нейтрализующих свойств среды
Нейтрализующие свойства среды - способность среды нейтрализовать действие консервантов, т.е. обеспечивать 100%-е прорастание засеянной культуры.
Данный показатель определяют для сред, используемых при контроле стерильности МИБП. Питательная среда должна нейтрализовать действие консерванта, и ее чувствительность по отношению к тест-штаммам не должна зависеть от его присутствия. К таким средам, в частности, относится тиогликолевая среда, нейтрализующая действие ртутного консерванта - мертиолята.
|
|
|
Определение содержания аминного азота формольным титрованием
Определение содержания аминного азота в питательных средах проводят методом формольного титрования. Принцип метода основан на блокировании формальдегидом при pH 7,0 свободных аминогрупп и титровании щелочью эквивалентного количества карбоксильных групп. Начало и конец титрования определяют потенциометрически.
Определение стерильности готовых к применению сред
Определение стерильности готовой питательной среды проводят визуально путем просмотра 3 - 5% каждой партии после инкубации в термостате при температуре 37 °С в течение 2 - 14 сут. в зависимости от типа среды.
Обнаружение после инкубации помутнения жидкой (полужидкой) среды или появление на чашках (пробирках) более 2 - 4 колоний свидетельствует о нестерильности среды, и вся исследуемая среда подлежит повторному контролю на удвоенном количестве образцов. При повторном подтверждении результата среда подлежит уничтожению.
Определение стерильности добавок питательных сред (кровь, сыворотка крови) проводят методом прямого посева.
|
|
|
Пробу препарата объемом 1 мл высевают в 2 пробирки, содержащие по 20,0 мл тиогликолевой среды, одну из которых инкубируют при 30 - 35 °С для выявления аэробных и анаэробных микроорганизмов, а другую при 20 - 25 °С для выявления грибов и бактерий с оптимумом роста в данном температурном режиме. Продолжительность инкубации посевов 14 сут. В течение всего срока проводится их периодический просмотр.
В случае помутнения питательной среды после внесения в нее испытуемого препарата следует в интервале от 3 до 7 сут. после посева сделать пересев приблизительно по 0,5 мл на две пробирки, содержащие 10,0 мл тиогликолевой среды. Все пробирки выдерживают после пересева при соответствующих температурах до окончания инкубации (14 сут.) со дня первичного посева.
Контрольные вопросы
Каким требованиям должны соответствовать питательные среды? Классификация питательных сред по консистенции, по целевому назначению. Основные питательные среды. Специальные питательные среды, их названия; для каких бактерий предназначены? Элективные питательные среды, состав, применение. Приведите примеры. Дифференциально-диагностические среды, их названия; для чего применяются? Оценка качества питательных сред на всхожесть. Определение концентрации и жизнеспособности бактерий. Определение аминного азота. Оценка стерильности питательных сред.
ЗАНЯТИЕ 12
«Методы выделения и культивирования чистых культур аэробов и анаэробов».
Дата добавления: 2020-04-25; просмотров: 218; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!