Методы обнаружения возбудителей гнильцовых болезней в мёде
Для исследований необходимы люминесцентный микроскоп МЛ-2 с набором прилагаемых к нему фильтров или обычный биологический микроскоп (МБИ-1, МБИ-3, мБИ-4), оборудованный специальным люминесцентным устройством; осветитель для возбуждения люминесценции препарата (источником света служит ртутная лампа СВД-250); светофильтры СС-4, СС-8, опак-иллюминатор ОИ-17 или ОИ-18, предметные и покровные обезжиренные стекла, флуоресцирующие антиларвейные и антиальвейные сыворотки и контрольная кроличья люминесцирующая сыворотка, спирт этиловый и метиловый, забуференный физиологический раствор (фосфатный буфер); забуференный глицериновый раствор, нефлуоресцирующее иммерсионное масло, иммерсионные жидкости, при отсутствии их можно использовать диметилфталат.
Глицериновый буфер готовят смешиванием девяти частей нейтрального глицерина и одной части фосфатного буфера с рН 8,0.
Препарат фиксируют этиловым или метиловым спиртом, промывают фосфатным буфером с рН 7,4. Последний готовят путем смешивания 30 мл Г/15 М раствора однозамещенного фосфорнокислого натрия или калия, 120 мл 1/15 М раствора двузамещенного фосфорнокислого натрия и 8,78 г хлористого натрия в 1 л дистиллированной воды. Жидкий мёд предварительно тщательно перемешивают и берут пробу. Пробы из засахаренного мёда отбирают щупом с разной глубины; от сотового мёда берут пробу весом 30 г и, удаляя забрус, погружают в 15—20 мл стерильного физиологического раствора для полного растворения мёда в ячейках сотов.
|
|
Навеску мёда 15—20 г помещают в стерильную колбочку и добавляют 25—30 мл стерильного физиологического раствора (температура 35—40*С). Растворенный мёд центрифугируют в течение 15 мин при 2000 об/мин. Надосадочную жидкость осторожно сливают, к центрифугату опять добавляют 25—30 мл стерильного физиологического раствора, взбалтывают и еще раз центрифугируют. Из полученного центрифугата параллельно делают два мазка, один из которых окрашивают по Граму, другой на споры—2%-ным раствором карболового фуксина. Для обнаружения Вас. larvae центрифугат высевают на мясо-пептонный сывороточный агар (среда Томашеца) и для Вас. alvei, streptoe, apis—на МПА и МПБ. Выросшую культуру возбудителя идентифицируют согласно общепринятым бактериологическим методам.
В тех случаях, когда из-за низкой плотности инфицирования мёда бактериологическим методом выделить возбудителей нельзя, можно применять метод флуоресцирующих антител с использованием антиларвейной и антиальвейной сывороток.
Для этой цели используют следующую методику: 15—20 г мёда растворяют в 25—-30 мл физиологического раствора и центрифугируют. Из центрифугатов делают мазки, фиксируют этиловым спиртом в течение 15 мин, высушивают на воздухе, затем увлажняют фосфатным буфером с рН 7,4 и опять высушивают. Препараты окрашивают прямым способом. Для этого на мазок наносят каплю соответствующей флуоресцирующей сыворотки, помещают в чашку Петри с влажным тампоном ваты и выдерживают при Температуре 37°С в точение 35—45 мин. Окрашенные мазки промывают тем же буферным раствором, дважды сменяя раствор через 20 мин, и ополаскивают дистиллированной водой. На высушенные мазки помещают каплю буферного глицерина, покрывают тонким покровным стеклом, на которое наносят нефлуоресцирующее иммерсионное масло и просматривают под люминесцентным микроскопом МЛ-2 по общепринятой методике.
|
|
Сыворотки по заявке поставляет Украинский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии.
Степень свечения микробных клеток оценивают по четырехбалльной системе:
+ + + +—сияющее золостисто-зеленоватое свечение палочек и спор Вас. larvae с ярко выраженными контурами микробных клеток;
+++—яркое зеленоватое свечение палочек и спор с четко выраженными контурами;
+ +—умеренное зеленовато-желтоватое свечение клеток
|
|
и спор с отчетливыми контурами;
+—слабое сероватое свечение микробных клеток испор с неясными контурами;
- - клетки незаметны или в виде серых теней. Оценивают степень свечения большинства клеток. В контроле с чистой культурой Вас. larvae, окрашенной флуоресцирующей антиларвейной сывороткой, свечение должно быть ( + + + + ); при окраске препаратов, приготовленных из цент, рифугатов мёда антиальвейной флуоресцирующей сывороткой, свечение должно быть (+ + ) и ( + ).
Мёд, инфицированный возбудителями гнильцовых болезней пчел, после автоклавирования при температуре 120°С в течение 20 мин может быть использован для кормления пчел или его направляют в кондитерскую промышленность.
Вопросы для самопроверки
1. Классификация мёда.
2. Материалы, используемые для фальсификации мёда.
3. Характеристики искусственного мёда.
4. Основные показатели натурального мёда (влага, кислотность, диастаза, примеси и др.).
5. Характеристика подогретого и незрелого мёда.
6. Особенности осадка при кристаллизации мёда.
7. Ветсанэкспертиза мёда.
8. Органолептические методы исследования мёда.
9. Лабораторные методы исследования мёда при подозрении на фальсификацию.
|
|
10. Ветсаноценка мёда.
ЛИТЕРАТУРА
1. Колоболотский Г. В. Справочник по ветеринарно-санитарной экспертизе продуктов на мясо-молочных и пищевых контрольных станциях.— М.: Колос, 1974.—239 с.
2. Правила ветеринарно-санитарной экспертизы меда на мясо-молочных и пищевых контрольных станциях и в ветеринарных лабораториях ГУВМСХ СССР.—М.: Колос, 1979.—12 с.
3. Пчеловодство. Термины и определения. ГОСТ ,25629-83.
4. Житенко П. В., Боровков М. В., Макаров В. А. Справочник по ветеринарно-санитарной экспертизе продуктов животноводства.—М.: Колос, 1980.—189 с.
б. Ряховский В. И. Мед, воск, прополис.—Алма-Ата: Кайнар, 1983.— 83 с.
6. Чернигов В. Д. Мед.—Минск: Урожай, 1979.—78 с.
7. Чудаков В. Г Технология продуктов пчеловодства.—М.: Колос, 1979.—49 с.
8. Касаткин В. С. Ветеринарно-санитарная экспертиза меда ГСХИ, Горький, 1985.—29 с.
Дата добавления: 2020-01-07; просмотров: 114; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!