Определение сахарозы (тростникового сахара)

⇐ ПредыдущаяСтр 7 из 8Следующая ⇒

Примесь сахарного сиропа к мёду можно определить по содержанию в последнем сахарозы, которое не должно превышать 5% в цветочном и 10^;% в падевом мёде. Количество сахарозы повышается также и в сахарном (подкормочном) мёде.

Сущность метода заключается в искусственной инверсии (превращении) содержащейся в мёде сахарозы в моносахаро-глюкозу и фруктозу. По содержанию инвертированного сахара до инверсии и после нее определяют количество сахарозы.

В колбу на 200 мл наливают 5 мл 10%-ного раствора мёда и 45 мл дистиллированной воды. Затем колбу с содержимым помещают в водяную баню (80°С). Как только температура содержимого колбы достигнет 68 — 70°С, добавляют 5 мл раствора соляной кислоты в разведении 1:5, перемешивают и при этой температуре выдерживают 5 мин. Контролируют температуру термометром, вставленным в колбу. При удалении термометра из колбы его предварительно ополаскивают дистиллированной водой. Затем к содержимому колбы добавляют 1 — 2 капли индикатора метилового оранжевого (1%-ный раствор) и нейтрализуют 10%-ным раствором едкого натрия до появления оранжево-желтого цвета.

Объем содержимого доводят до 200 мл и 3-кратным переворачиванием колбы перемешивают полученный 0,25%-ный раствор мёда. Определяют инвертированный сахар в данном растворе по указанной выше методике.

Содержание сахарозы в мёде вычисляют по формуле

С=(Х—У) * 0,95;

где С — содержание сахарозы в мёде, %;

X—содержание инвертированного сахара после инверсии, %;

У — содержание инвертированного сахара до инверсии.

Определение ядовитости мёда

Белым мышам подкожно вводят 1 мл 50%-ного раствора мёда. Если мёд токсичен, то уже в первые часы введения погибает до 75% животных, остальные—в течение суток. В качестве дополнительного метода, подтверждающего токсичность мёда, следует проводить пыльцовый анализ. Для этого необходимо знать морфологию пыльцовых зерен основных растений, из нектара которых пчелы делают ядовитый мёд.

Исследование мёда на остаточные количества антибиотиков

Исследования мёда на остаточные количества антибиотиков и обнаружение в нем возбудителей гнильцовых болезней проводят ветеринарные лаборатории, когда в ветеринарно-санитарном паспорте пасеки указано о неблагополучии ее по заразным болезням, обработке пчел антибиотиками и в случаях отравления пчел.

Исследования также необходимы при проверке кормовых запасов пчелиных семей, идущих в зимовку.

В основе определения антибиотиков (стрептомицина, хлор, тетрациклина, неомицина и эритромицина) лежит принцип диффузии в агар. Отличие в их определении состоит в использовании различных тест-культур, сред и буфера.

Для определения стрептомицина необходимы: споры культуры Вас. subtilis штамм 6633, среда (раствор панкреатического гидролизата мяса—перевар Хоттингера, содержащий 33 мг% аминного азота, двузамещенный фосфат натрия 2—3 г, arap-airap—20 г, рН 7,8—8,0) и буферный раствор (1/15 М фосфатный буфер с рН 7,8—8,0, состоящий лз 11,612г, Na₂HPO₄ и 9,073 г NaH₂PO₄). Для приготовления буферного раствора можно использовать соли калия. Каждую навеску соли отдельно растворяют в 100 мл дистиллированной воды в мерной колбе, а затем смешивают в соотношении: 9,5 части двузамещенного фосфата натрия и 0,5 части однозамещенного фосфата натрия.

Для определения хлортетрациклина необходимы: споры культуры Вас. subtilis штамм L₂ среда (раствор панкреатического гидролизата мяса—перевар Хоттингера, содержащий 100 мг % аминного азота, агар-агар—20 г, рН среды 6,1 — 6,2) и буферный раствор (цитратно-солянокислый Na, рН 5,0— 5,2). Для приготовления буфера навеску лимоннокислого трех, замещенного натрия 8,6 г растворяют в 400—500 мл дистиллированной воды. В этот же раствор добавляют 5,6 мл соляной кислоты (удельный вес 1,18—1,19) и добавляют дистиллированной воды до 1000 мл. Все перемешивают и проверяют рН.

Для определения неомицина необходимы: споры культуры Вас. mycoides штамм 537; среда (раствор панкреатического гидролизата мяса, содержащий 33 мт % аминного азота, рН среды 7,8—8,0) и фосфатый буфер 7,8—8,0.

Для определения эритромицина необходимы: споры культуры Вас. mycoi'des штамм НВ; среда (раствор панкреатического гидролизата мяса, содержащий 33 мг % аминного азота, рН 7,8—8,0).

Стерильные чашки Петри диаметром 90—100 мм с ровным плоским дном устанавливают на столе по уровню. В расплавленную затем охлажденную до 45—48°С среду вносят взвесь спор той культуры, на какой антибиотик исследуют мёд, из расчета 20—30 млн. микробных тел на 1 мл среды. Среду со взвесью спор разливают по 10 мл в каждую чашку. После застывания агара на его поверхности на расстоянии около 28 мм от центра чашки вырезают 6 луночек тонкослойной стерильной трубкой с внешним диаметром 10 мм (для этой цели можно использовать трубку для пробочников №4).

Затем от исследуемой пробы в три пробирки берут по 1 г мёда. В зависимости от того, какой антибиотик определяют, испытуемую пробу разводят соответствующим буфером в соотношении 1:5 и прогревают на водяной бане при 60°С в течение 10 мин для устранения антибактериальных свойств мёда. После остывания содержимое пробирок вносят по 0,1 мл в две луночки от каждой навески (для исследования одной пробы используют одну чашку). Чашки переносят в термостат, где выдерживают 18—20 час при 37°С. По истечении указанного времени чашки просматривают. Наличие зоны угнетения вокруг луночек указывает на присутствие в мёде антибиотика. Такой мёд не допускается в продажу, он может быть использован в кондитерской промышленности, где применяют температурные режимы от 60 до 100°С в течение 1,5 ч.

Приготовление тест-культур

Ампулу с высушенным штаммом вскрывают и в нее стерильно добавляют 0,5 мл дистиллированной воды. После полного растворения содержимое переносят пастеровской пипеткой в чашки Петри с 20%-ным мясо-пептонным агаром с рН 7,8—8,0 и 18—20 ч выращивают в термостате при температуре 37°С. Отбирают колонии с характерными признаками для необходимой культуры, высевают на скошенный в .пробирках 2%-ный мясо-пептонный агар и инкубируют 18—20 ч. Выращенную культуру смывают с поверхности агара и высевают в матрицы со средой, состоящей из 2,5% агара, приготовленного на бульоне Хоттингера, содержащего 33 мг % аминного азота. Споры выращивают 10—12 суток при температуре 37°С. После обнаружения в мазках в поле зрения микроскопа 90—95% опор проводят смыв дистиллированной водой. Взвесь спор прогревают при температуре 65--70°С в течение 30 мин и центрифугируют. Отмывание спор с последующим прогреванием 'проводя? не менее 3 раз. Из основной взвеси готовят рабочую по стандарту мутности 10.

Ампулы с высушенным штаммом тест-культур по заявкам поставляет Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов (Москва, Д-22, Звенигородское шоссе, 5).

Дата добавления: 2020-01-07; просмотров: 88; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 1 2 3 4 5 678 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!