Учесть и зарисовать раннюю реакцию торможения гемагглютинации (РТГА) в диагностике гриппа (см. механизм реакции в базовом тексте).
Метод диагностики: вирусологический
Компоненты: типоспецифические противогриппозные сыворотки (содержащие антитела к вирусам гриппа А, А1, А2 и В), исследуемый материал (вирус гриппа, культивированный в тканевых культурах), изотонический раствор хлорида натрия, 1% суспензия куриных эритроцитов.
Постановка: Разведение соответствующих типоспецифических противогриппозных сывороток в ряде лунок, используя 0,9% раствор NaCl (см. разведения на планшетке). В каждую лунку вносят по 0,2 мл исследуемого вируса. Выдерживают 60 мин. при комнатной температуре. Затем в каждую лунку вносят по 0,4 мл. 1% суспензии куриных эритроцитов. Инкубация в течение 2-х часов при температуре 37°C.
Учет: Положительная реакция «+» – осадок с ровными краями в виде красной пуговки. Отрицательная реакция «-» - осадок с неровными краями в виде красного зонтика. Титр РТГА определяют по максимальному разведению, при котором наблюдается торможение гемагглютинация (красная пуговка).
Заключение: Вирусологический материал содержит вирус гриппа А2 в титре 1/320.
Учесть и зарисовать реакцию нейтрализации в диагностике полиомиелита по цветной пробе (см. механизм реакции в базовом тексте).
Метод диагностики: вирусологический
Компоненты: типоспецифические полиомиелитные сыворотки (содержащие антитела к вирусу полиомиелита типа 1, 2, 3), исследуемый материал (вирус гриппа, культивированный в тканевых культурах), культура клеток в питательной среде №199 и индикатор pH среды.
|
|
|
Постановка: Вируссодержащий материал смешиваетсяс соответствующими типоспецифическими полиомиелитными сыворотками в 3-х пробирках. Оставляется на 1 час при комнатной температуре. Затем в каждую пробирку с культурой клеток в питательной среде №199 с индикатором pH среды вносят смесь вируса с диагностической сывороткой. Инкубация в течение 4-9 дней при температуре 37°C.
Учет: Положительная реакция «+»– пробирка с желтой средой (вирус нейтрализовался типоспецифической сывороткой, а клетки остались жизнеспособными, вырабатывающими кислые продукты метаболизма, изменяющие pH среды в кислую сторону, при этом цвет жидкости меняется с красного на желтый). Отрицательная реакция «-» - пробирка с красной средой (реакции нейтрализации не произошло).
Заключение: Вирусологический материал содержит вирус полиомиелита типа I.
Учесть и зарисовать ИФА в диагностике ВИЧ-инфекции (см. схему твердофазной ИФА в базовом тексте)
Ингредиенты реакции: исследуемая сыворотка для выявления антител 
к поверхностным антигенам (гликопротеинам) ВИЧ,лунки планшеток с сорбированным ВИЧ антигеном 
, антиглобулиновая сыворотка, меченная ферментом (пероксидазой хрена) 
и субстрат/хромоген для фермента (перекись водорода + ортофенилендиамин - ОФД)
|
|
|
Постановка ИФА: В лунки планшетокс сорбированным ВИЧ антигеном добавляют исследуемую сыворотку больного. Выдерживают 60 мин. при комнатной температуре и промывают каждую лунку буферным раствором для удаления несвязанных компонентов. В каждую лунку вносят антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом (пероксидазой хрена). Выдерживают 60 мин при комнатной температуре и промывают каждую лунку буферным раствором для удаления несвязанных компонентов. Затем добавляют субстрат/хромоген для фермента (перекись водорода + ортофенилендиамин - ОФД).
Учёт ИФА. При образовании комплекса + + , субстрат (перекись водорода) расщепляется ферментом (пероксидазой хрена) на конечные продукты кислород и воду. В присутствии кислорода индикатор (ОФД) изменяет цвет продукта реакции — с бесцветного на желто-коричневый. Интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител. Определяют оптическую плотность содержимого каждой лунки (контрольных и рабочих) с помощью фотоколориметра.
1. Определение специфичности контролей: контроли специфичны, если
|
|
|
ОП «+» контролей >1, а ОП «-»<0,2.
2. Расчет ОП критической
ОП крит. = ср. знач. ОП К- + 0,200
где ОП крит.- критическое значение оптической плотности; ср. знач. ОП К--- среднее значение оптической плотности отрицательных контролей; 0,200 – коэффициент, устанавливаемый методом статистической обработки результатов на предприятии-изготовителе тест-системы.
3. Определение результата реакции:
результат положительный, если ОП рабочей лунки > ОП крит.,
результат отрицательный, если ОП рабочей лунки < ОП крит.
Заключение: Например, контроли специфичны и результат положительный, следовательно, в исследуемой сыворотке содержатся антитела к ВИЧ.
Дата добавления: 2019-09-13; просмотров: 366; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!