Учесть и зарисовать ЦПД в клеточных культурах
Мазок №1- нормальная культура клеток. В поле зрения наблюдаются клетки с ярко выраженной цитоплазматической мембраной, цитоплазмой и находящимся в ней ядром. Клетки с неизмененной внутренней структурой равномерно распределены в мазке.
Мазок №2- цитопатическое действие вируса на клетки. В поле зрения наблюдается полная или частичная дегенерация клеток (разрыв монослоя) за счет внутриклеточной репродукции вируса, что проявляется в уменьшении количества клеток, а также изменении формы клеток, и формировании гигантских многоядерных клеток (симпластов).
Учесть и зарисовать реакцию гемадсорбции
Целый ряд вирусов (гриппа, парагриппа и др.) обладают гемадсорбирующими свойствами, что позволяет использовать реакцию гемадсорбции для индикации этих вирусов даже при отсутствии выраженного ЦПД в культуре клеток.
Дать определение гемадсорбции и используя таблицу, зарисовать эритроциты, адсорбированные на зараженных вирусом клетках.
Учесть и зарисовать реакцию образования бляшек под агаром
Культуру клеток с питательной средой №199 и агаром заражают вирусологическим материалом и инкубируют в течение нескольких суток при температуре 37ºC. Появление светлых пятен («бляшка»), видимых невооруженным глазом, на фоне окрашенного монослоя живых клеток свидетельствует о разрушенных вирусами клеток. Добавление агара в питательную среду ограничивает распространение вирусов по всему монослою после выхода их из разрушенной клетки и обеспечивает взаимодействие вирусов только с соседними клетками. Каждая «бляшка» образуется потомством одного вириона. Подсчитав количество «бляшек», можно определить концентрацию вирусов в исследуемом материале. Кроме того, «бляшки» разных групп вирусов отличаются по размеру, форме, срокам появления.
|
|
|
Используя таблицу, зарисовать реакцию образования бляшек под агаром.
Учесть и зарисовать реакцию подавления метаболической активности (цветная проба)
Представлены 3 пробирки: 1-я - рабочая, 2-я- контроль культуры клеток и 3-я- контроль среды №199
| 1-я пробирка | 2-я пробирка | 3-я пробирка | |
| Компоненты: | Культура клеток, питательная среда № 199, вирусологический материал | Культура клеток, питательная среда № 199 | питательная среда № 199 |
| pH/ цвет | Нейтральная/красный | Кислая/желтый | Нейтральная/красный |
| ЦПД | + | - | - |
Учесть реакцию гемагглютинации (РГА) с целью индикации вируса гриппа
Ряд вирусов (ортомиксовирусы, парамиксовирусы) содержат в суперкапсиде гликопротеиновые шипы, обладающие гемагглютинирующей активностью и вызывающие гемагглютинацию («склеивание» эритроцитов).
|
|
|
Метод диагностики: вирусологический
Компоненты: вирусологический материал, 0,9% р-р NaCl, 1% суспензия отмытых куриных эритроцитов.
Постановка: Разведение вирусологического материала физиологическим раствором в ряде лунок по 0,5 мл. В каждую лунку вносят суспензию эритроцитов по 0,2 мл. Выдерживают при комнатной температуре в течение 40 мин.
Учет: Положительная реакция – осадок эритроцитов с неровными краями в виде зонтика. Отрицательная реакция - осадок эритроцитов с ровными краями в виде пуговки. Титр РГА определяют по максимальному разведению, при котором наблюдается гемагглютинация (красный зонтик).
Заключение: Вирусологический материал содержит вирус гриппа в титре 1:200.
IV. Примеры ситуационных задач
Ситуационная задача № 1
При учете реакции подавления метаболической активности (цветная проба) получены следующие результаты: через 48 ч. инкубации в рабочей пробирке выявлена жидкость желтого цвета. Сформулируйте заключение по этой реакции:
- Вирусологический материал содержит вирус
- Вирусологический материал не содержит вирус
- ЦПД положительное
- ЦПД отрицательное
Ситуационная задача № 2
В результате культивирования вируса гриппа в аллантоисной жидкости куриного эмбриона необходимо убедиться, что вирус размножился в достаточном количестве. Для этого нужно:
|
|
|
1. Произвести электронную микроскопию вируссодержащего материала
2. Добавить к аллантоисной жидкости индикатор рН среды
3. Сделать мазок, окрасить по Граму и микроскопировать
4. Поставить реакцию агглютинации
5. Поставить реакцию гемагглютинации
Дата добавления: 2019-09-13; просмотров: 408; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!