Вирусологический метод. Культивирование вирусов
Лабораторные методы диагностики вирусных инфекций включают:
· вирусоскопический метод (табл. 35),
· вирусологический метод (культивирование, индикация и идентификацию возбудителя),
· серологический метод (обнаружение и определение титра противовирусных антител с помощью РТГА, РСК, ИФА и др.),
· экспресс-метод (реакция иммунофлюоресценции - РИФ, иммунная электронная микроскопия - ИЭМ, обнаружение элементарных телец, включений),
· молекулярно-генетический метод (обнаружение генетического материала вирусов с помощью ПЦР)
· биологический (применяют чувствительных лабораторных животных для культивирования, индикации и идентификации вирусов, изучение клинических симптомов и патоморфологических изменений.
Таблица 35. Особенности вирусоскопического метода диагностики
| Вирусоскопический метод (время проведения 1-2 часа) | |
| а) световая микроскопия | применяется для обнаружения крупных вирусов (оспы) в окраске по Морозову и внутриклеточных вирусных включений в окраске по Туревичу и Муромцеву. Применяется для экспресс-диагностики. |
| б) электронная микроскопия | дает возможность изучить ультраструктуру вириона |
| е) метод иммунной электронной микроскопии, в основе которого лежит взаимодействие антител с вирусами при смешивании вируссодержащего материала со специфической сывороткой | в результате реакции образуется микропреципитаты, состоящие из вирусных частиц, покрытых своеобразным «венчиком». Применяется для экспресс-диагностики. |
| г) иммунофлюоресцентный метод (прямой и непрямой) с использованием флюоресцирующих сывороток | при положительной реакции в люминесцентном микроскопе наблюдается специфическое свечение. Применяется для экспресс-диагностики. |
Вирусологический метод направлен на выделение и идентификацию вируса и является «золотым стандартом» в диагностике вирусных инфекций. Вирусы являются облигатными внутриклеточными паразитами, в связи с этим, вирусологический метод имеет ряд принципиальных особенностей. Для проведения вирусологического метода диагностики требуется от 3-5 суток до 1 месяца. Схема вирусологического метода включает ряд последовательных этапов: 1) забор, транспорт и подготовка исследуемого материала, 2) культивирование, 3) индикация и 4) идентификация вирусов (табл. 36).
При заборе материала для исследований необходимо отбирать образцы с учетом локализации первичной репликации и ритма циркуляции возбудителя. Образцы следует доставлять в лабораторию незамедлительно, при относительно кратковременной транспортировке (не более 5 суток) образцы сохраняют на льду, при более длительной – при tºC -50ºC.
Таблица 36. Схема вирусологического метода
| Подготовка исследуемого материала | Клинический материал обычно содержит смесь бактерий и вирусов, с целью их разделения проводят: · центрифугирование · антибактериальную деконтаминацию (антибиотики широкого спектра действия – бензилпенициллин, стрептомицин и др.) · фильтрацию (бактериальные фильтры) |
| Культивирование вирусов | Вирусы размножаются только в живых клетках, соответственно используются следующие способы культивирования: · куриные эмбрионы · лабораторные животные · культуры клеток (клеточные культуры) – первичные, полуперевиваемые, перевиваемые |
| Индикация вирусов | Цель данного этапа – выявление вируса. Вирусы являются ультрамикроскопическими микроорганизмами и для их визуализации используют специальные (опосредованные) методы: · цитопатогенного действия (ЦПД) вирусов (деструкция монослоя культуры клеток, формирование внутриклеточных включений, синцития и симпластов и др.) · образования бляшек · реакции гемагглютинации (РГА) · гемадсорбции · «цветной» реакции (подавление метаболической активности) |
| Идентификация вирусов | После обнаружения вируса необходимо определить вид и тип этого вируса. Существует два вида идентификации: Для сероидентификации вирусовиспользуют Культивированные вирусы в культуре клеток, аллантоисную или амниотическую жидкость заражённого куриного эмбриона, и ставят реакции: а) торможения (задержки) гемагглютинации (РТГА) б) связывания комплемента (РСК) в) нейтрализации (РН) г) иммуноферментного анализа (ИФА) д) реакция иммунофлюоресценции (РИФ) е) радиоиммунный анализ (РИА) Для генетической идентификации – ПЦР (полимеразная цепная реакция), МГ (молекулярная гибридизация) |
Дата добавления: 2019-09-13; просмотров: 738; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!