ГЛУБОКОЕ ЗАМОРАЖИВАНИЕ СПЕРМЫ 8 страница

Готовят растворы только на дистиллированной воде с рН не ниже 5, лучше нейтральной реакции. Для приготов­ления искусственных сред дистиллированную воду жела­тельно вторично перегнать в целъностеклянном дистилля-ционном аппарате.

Искусственные среды готовят с применением сухих заготовок или компонентов в день разбавления спермы, строго соблюдая условия стерильности. Используют их в течение 3...4 часов с момента приготовления. Сухие заго­товки, например лактозы, выпускаются медицинской про­мышленностью. Компоненты, входящие в состав среды, взвешивают на аналитических или технических весах.

При приготовлении сред для разбавления спермы сна­чала кипятят дистиллированную воду в течение 30 минут. В остывшую до 90 °С воду вносят по рецепту все компо­ненты за исключением санирующих препаратов и желтка куриных яиц. Приготовленный раствор охлаждают до 35...40 °С и только потом добавляют желток и в соот­ветствии с инструкцией вносят антибиотики в первую среду.

Перед использованием куриные яйца моют, высуши­вают, протирают спиртовым тампоном (96 %) и раскалывают пополам стерильным скальпелем. Из одной полови­ны скорлупы желток переносят в другую, отделяя белок в специальную чашку. Потом желток осторожно помещают на стерильный лист фильтровальной бумаги. Покатывани-ем его на листе бумаги полностью удаляют белок с обо­лочки, и, вскрыв последнюю, желток сливают в измери­тельную мензурку. Необходимый объем его вносят в колбу с другими компонентами приготовляемой среды и тща­тельно перемешивают стерильной стеклянной палочкой. Добавляют санирующие препараты, указанные в табл. 15.

Перед разбавлением спермы обязательно проводят биологический контроль качества разбавителя. На пред­метное стекло наносят каплю спермы и рядом — каплю разбавителя. Покрывают обе капли покровным стеклом 18x18 мм и соединяют. Если подвижность спермиев не снижается, среда приготовлена правильно.

Как уже упоминалось, наиболее приемлемыми являют­ся стандартные стерильные долгохранящиеся среды СДС-1, СДС-2, СДС-3.

Нами разработаны разные варианты сред (Ф. Осташко, М. Павленко, Л. Павленко, А. Соклакова и В. Канцедал), представляющие собой полностью законченные для при­менения фармакологические формы. Среда СДС-1 (среда долгохранящаяся стерильная) содержит все компоненты стандартной квалификации, в том числе и желток курино­го яйца или его заменитель, которым может служить экс­тракт бобов сои, конопляного семени и др. Среда расфа­сована в стеклянные ампулы или полимерные герметиче­ские упаковки емкостью 100 мл и простерилизована, ее можно хранить в течение нескольких лет. После вскрытия ампулы при необходимости в нее добавляют содержимое прилагаемого флакона с антибиотиками и биологически активным компонентом, при отсутствии этого флакона — антибиотик согласно инструкции (табл. 15). Среда № 1 используется в качестве первого компонента при замора­живании _спермы быков по Харьковской технологии, а также в открытых гранулах или в пайеттах. Она обес­печивает фортифика­цию мембранного аппа­рата спермиев.

Среда СДС-2 без­желточная, расфасо­вана во флаконы ем­костью 500 мл, стериль­ная, срок годности — несколько лет. Используется в качестве второго компонен­та при замораживании спермы быков по Харьковской тех­нологии или в пайеттах, а также вместо цитрата натрия для деконсервации спермы, законсервированной в открытых гранулах

Среда СДС-3 — стерильная долгохранящаяся желтоксо-держащая среда для замораживания спермы баранов — рас­фасована в стеклянные ампулы емкостью 50 мл.

 

Таблица I5. Дозы антимикробных средств, применяемых для санации спермы быков при замораживании.

Вид антибиотика	Тысяч единиц или гр. на 100 мл среды
Спермосан-3 Полимиксин-М Тетрациклин соляно­кислый Пенициллин Стрептомицин Белый стрептоцид	50...95 100 7,5. ..10 75. ..95 75. ..95 0,1... 0,2 гр.

 

Использование этих сред существенно улучшает и упрощает работу племенных предприятий и гарантирует предотвращение распространения заразных заболеваний среди осеменяемых животных.

Степень разбавления спермы определяют посредством программируемого микрокалькулятора по В.А. Коробко (1990) или по таблицам 16, 17 и 18, что существенно об­легчает работу. Разбавляют ее с помощью устройства УАР-2, позволяющего дозирование вводить среду в спермопри-емник по закрытой системе без соприкосновения с окру­жающей средой (Осташко и др., 1974).

Устройство УАР-2 (рис. 24) состоит из эластичной ем­кости для разбавителя, соединенной эластичной трубкой с патрубками цилиндра-дозатора, герметически закрытого соразмерным его объему эластичным колпаком. Соедини­тельная трубка по обе стороны от дозатора пережимается пружинными зажимами.

Емкость для разбавителя — пакет из полимерной плен­ки толщиной 120...150 микрометров, к которому термиче­ским способом приварен отрезок трубки диаметром 4...6 мм. Дозатор представляет собой мерный цилиндр с двумя пат­рубками в нижней части для соединения с трубками.

В качестве колпака используют рукав из полимерной пленки, который фиксируется резиновым кольцом на от­крытой цилиндрической части дозатора (рис. 25).

Перед работой емкости для разбавителей стерилизуют ультрафиолетовыми лучами, а дозатор с колпаком и сое­динительными трубками — путем автоклавирования при 0,25 атм. и 105 °С в течение 20 минут. При этом свобод­ные концы трубок закрывают чехлом из пергаментной бу­маги.

Для разбавления спермы используют два устройства, одно из которых заполняют средой № 1, а второе — сре­дой № 2. Устройство с первой средой помещают в УАР-2 при температуре 35 °С, а второе используют в условиях комнатной температуры.

Непосредственно после взятия сперму разбавляют тер­мостатированной при температуре 35 °С средой № 1 в со-

Таблица 16. Разбавление спермы быков-производителей, рассчитанное на получение не менее 15 млн активных спермиев в дозе после замораживания-оттаивания в облицованных упаковках объемом 0,25 мл

Активность (баллов)		Концентрация, млрд/мл
8		0,7	0,75	0,8	0,85	0,9	0,95	1,0	1,05	1,1	1,15	1,2	1,25	1,3	1,35
Объем эякуля та, мл	Коли чество среды №1	Количество среды №2, мл
1	1	2,67	3	3,3	3,6	4	4,3	4,67	5	5,33	5,67	6	6,33	6,67	7
2	2	5,34	6	6,6	7,2	8	8,6	9,34	10	10,66	11,34	12	12,66	13,34	14
3	3	8,01	9	9,9	10,8	12	12,9	14,01	15	15,99	17,01	18	18,99	20,01	21
4	4	10,68	12	13,2	14,4	16	17,2	18,68	20	21,32	22,68	24	25,32	26,68	28
5	5	13,35	15	16,5	18	20	21,5	23,35	25	26,65	28,35	30	31,65	33,35	35
6	6	16,02	18	19,8	21,6	24	25,8	28,02	30	31,98	34,02	36	37,98	40,02	42
7	7	18,69	21	23,1	25,2	28	30,1	32,69	35	37,31	39,69	42	44,31	46,69	49
8	8	21,36	24	26,4	28,8	32	34,4	37,36	40	42,64	45,36	48	50,64	53,36	56
9	9	24,03	27	29,7	32,4	36	38,7	42,03	45	47,97	51,03	54	56,97	60,03	63
10	10	26,7	30	33,0	36	40	43	46,7	50	53,3	56,7	60	63,3	66,7	70
11	11	29,37	33	36,3	39,6	44	47,3	51,37	55	58,63	62,37	66	69,63	73,37	77
12	12	32,04	36	39,6	43,2	48	51,6	56,04	60	63,96	68,04	72	75,96	80,04	84
13	13	34,71	39	42,9	46,8	52	55,9	60,71	65	69,29	73,71	78	82,29	86,71	91
14	14	37,38	42	46,2	50,4	56	60,2	65,38	70	74,62	79,38	84	88,62	93,38	98
15	15	40,05	45	49,5	54	60	64,5	70,05	75	79,95	85,05	90	94,95	100,05	105
16	16	42,72	48	52,8	57,6	64	68,8	74,72	80	85,28	90,72	96	101,28	106,72	112
17	17	45,39	51	56,1	61,2	68	73,1	79,39	85	90,61	96,39	102	107,61	113,39	119
18	18	48,06	54	59,4	64,8	72	77,4	84,06	90	95,94	102,06	108	113,94	120,06	126
19	19	50,73	57	62,7	68,4	76	81,7	88,73	95	101,27	107,73	114	120,27	126,73	133
20	20	53,4	60	66,0	72	80	86	93,4	100	106,6	113,4	120	126,6	133,4	140

 

Активность (баллов)		Концентрация, млрд/мл
8		1,4	1,45	1,5	1,55	1,6	1,65	1,7	1,75	1,8	1,85	1,9	1,95	2,0
Объем эяхуля та, мл	Коли- чество среды №1	Количество среды №2, мл
1	1	7,33	7,67	8	8,33	8,67	9	9,33	9,67	10	10,33	10,67	11	11,33
2	2	14,66	15,34	16	16,66	17,34	18	18,66	19,34	20	20,66	21,34	22	22,66
3	3	21,99	23,01	24	24,99	26,01	27	27,99	29,01	30	30,99	32,01	33	33,99
4	4	29,32	30,68	32	33,32	34,68	36	37,32	38,68	40	41,32	42,68	44	45,32
5	5	36,65	38,35	40	41,65	43,35	45	46,65	48,35	50	51,65	53,35	55	56,65
6	6	43,98	46,02	48	49,98	52,02	54	55,98	58,02	60	61,98	64,02	66	67,98
7	7	51,31	53,69	56	58,31	60,69	63	65,31	67,69	70	72,31	74,69	77	79,31
8	8	58,64	61,36	64	66,64	69,36	72	74,64	77,36	80	82,64	85,36	88	90,64
9	9	65,97	69.03	72	74,97	78.03	81	83,97	87.03	90	92,97	96,03	99	101,97
10	10	73,3	7б>	80	83,30	86,7	90	93,3	9б>	100	103,3	106,7	ПО	113,3
11	11	80,63	84,37	88	91,63	95,37	99	102,63	106,37	110	113,63	117,37	121	124,63
12	12	87,96	92,04	96	99,96	104,04	108	111,96	116,04	120	123,96	128,04	132	135,96
13	13	95,29	99,71	104	108,29	112,71	117	121,29	125,71	130	134,29	138,71	143	147,29
14	14	102,62	107,38	112	116,62	121,38	126	130,62	135,38	140	144,62	149,38	154	158,62
15	15	109,95	115,05	120	124,95	130,05	135	139,95	145,05	150	154,95	160,05	165	169,95
16	16	117,28	122,72	128	133,28	138,72	144	149,28	154,72	160	165,28	170,72	176	181,28
17	17	124,61	130,39	136	141,61	147,39	153	158,61	164,39	170	175,61	181,39	187	192,61
18	18	131,94	138,06	144	149,94	156,06	162	167,94	174,06	180	185,94	192,06	198	203,94
19	19	139.27	145,73	152	158,27	164,73	171	177.27	183,73	190	196.27	202,73	209	215.27
20	20	146,6	153,4	160	166,6	173,4	180	186,6	193,4	200	206,6	213,4	220	22б\6

Примжание. При наличии после оттаивания спермиев с активностью не ниже 40 ' движением, при 50 % — 18,75 млн; при 60 % — 22,5 млн

Таблица I8. Разбавление спермы быков-производителей, рассчитанное на получение не менее 5 млн активных спермиев в дозе ь» после замораживания-оттаивания в облицованных упаковках объемом 0,25 мл

Активность (баллов)		Концентрация, млрд/мл
8		0,7	0,75	0,8	0,85	0,9	0,95	1,0	1,05	1,1	1.15	1.2	1.25	1.3	1.35
Объем эякуля та, мл	Коли- чество среды №1	Количество среды Nb 2, мл
1	1	12	13	14	15	16	17	18	19	20	21	22	23	24	25
2	2	24	26	28	30	32	34	36	38	40	42	44	46	48	50
3	3	36	39	42	45	48	51	54	57	60	63	66	69	72	75
4	4	48	52	56	60	64	68	72	76	80	84	88	92	96	100
5	5	60	65	70	75	80	85	90	95	100	105	ПО	115	120	125
6	6	72	78	84	90	96	102	108	114	120	126	132	138	144	150
7	7	84	91	98	105	112	119	126	133	140	147	154	161	168	175
8	8	96	104	112	120	128	136	144	152	160	168	176	184	192	200
9	9	108	117	126	135	144	153	162	171	180	189	198	207	216	225
10	10	120	130	140	150	160	170	180	190	200	210	220	230	240	250
11	11	132	143	154	165	176	187	198	209	220	231	242	253	264	275
12	12	144	156	168	180	192	204	216	228	240	252	264	276	288	300
13	13	156	169	182	195	208	221	234	247	260	273	286	299	312	325
14	14	168	182	196	210	224	238	252	266	280	294	308	322	336	350
15	15	180	195	210	225	240	255	270	285	300	315	330	345	360	375
16	16	192	208	224	240	256	272	288	304	320	336	352	368	384	400
17	17	204	221	238	255	272	289	306	323	340	357	374	391	408	425
18	18	216	234	252	270	288	306	324	342	360	378	396	414	432	450
19	19	228	247	266	285	304	323	342	361	380	399	418	437	456	475
20	20	240	260	280	300	320	340	360	380	400	420	440	460	480	500

 

---

Дата добавления: 2018-11-24; просмотров: 320; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

---

---

Мы поможем в написании ваших работ!