Работа 84. Количественное определение гистамина в крови
С диазотированным n-нитроанилином
По Н.В.Климкиной и С.И.Плитману
Реактивы. Диазотированный n-нитроанилин (готовят перед употреблением из 0,1%-ного раствора n-нитроанилина в 0,1 М соляной кислоте, добавляют к 10 мл охлажденного на льду раствора n-нитроанилина 1 мл 4%-ного раствора нитрита натрия); гистамин, стандартный раствор концентрации 200 мкмоль/л; карбонат натрия, 20%-ный раствор; гидроксид натрия, 5 М раствор; трихлоруксусная кислота, 10%-ный раствор; универсальная индикаторная бумага.
Оборудование. Штатив с пробирками; воронка с бумажным фильтром; стеклянные палочки; водяная баня; пипетки вместимостью 1 и 5 мл; ФЭК.
Материал. Цельная кровь крысы или кролика, осажденная 10%-ным раствором трихлоруксусной кислоты в отношении 1:9 для экстракции гистамина (выдерживается в холодильнике в течение суток).
Метод основан на взаимодействии между гистамином и диазотированным n-нитроанилином с образованием соединения оранжево-красного цвета.
Ход определения. Трихлоруксусный экстракт крови фильтруют через бумажный фильтр. В одну пробирку отмеривают 2 мл фильтрата (опыт), в другую – 0,2 мл стандартного раствора гистамина и 1,8 мл дистиллированной воды (стандарт). В обе пробы прибавляют по 3 мл дистиллированной воды и 1 мл раствора нитрита натрия. Пробирки тщательно встряхивают и ставят на 2 мин в кипящую водяную баню.
Затем пробирки охлаждают под струей водопроводной воды и к охлажденным пробам добавляют по 1 мл диазотированного n-нитроанилина. Тщательно перемешивают пробы и доводят их рН до 10,0 по универсальной индикаторной бумаге, прибавляя сначала 1,5 мл, а затем 0,5 мл раствора карбоната натрия. Содержимое пробирок перемешивают, охлаждают под струей водопроводной воды и прибавляют 2-3 капли раствора гидроксида натрия до развития окрашивания.
|
|
|
Экстинкцию опытной и стандартной проб измеряют на ФЭКе при 520-540 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 0,5 см против контроля на реактивы (10 мл дистиллированной воды, по 2 мл растворов нитрита натрия и диазотированного n-нитроанилина, 4 мл раствора карбоната натрия перемешивают и приливают 0,6 мл раствора гидроксида натрия).
Расчет проводят по формуле
Еоп200
х = ————— ,
Ест
где х – концентрация гистамина в цельной крови, мкмоль/л;
Еоп – экстинкция опытного раствора;
Ест – экстинкция стандартного раствора;
200 – концентрация стандартного раствора гистамина, мкмоль/л.
Оформление работы. Рассчитать содержание гистамина в крови и сделать вывод о возможных причинах изменения его уровня. В выводе отразить практическое значение определения гистамина в крови.
|
|
|
Практическое значение работы. Гистамин относится к биогенным аминам. Он играет роль тканевого регулятора и медиатора в нервной системе. Гистамин усиливает проницаемость стенок кровеносных сосудов, стимулирует функцию желез желудка (выработку соляной кислоты), сократительную деятельность матки и т.д. Избыточное содержание гистамина в организме ведет к вегетативным нарушениям и аллергическим реакциям. Определение гистамина в практике используется для исследования уровня его в крови и тканях животных при действии на них аллергенных веществ. Содержание гистамина в крови имеет видовые колебания. В крови лабораторных животных (крысы, кролики) его концентрация составляет 90-220 мкмоль/л, а у здорового человека его содержится 0,02-0,04 мкмоль/л.
В контрольно-аналитических лабораториях этот метод применяется для контроля качества заводских препаратов гистамина в ампулах, выпускаемых в виде 0,1%-ного раствора.
ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЕЙ
Состояние биохимических процессов в тканях и органах оценивается прямым и косвенным способом. В первом случае для этой цели берутся на исследование кусочки ткани (биоптаты), а во втором, который более приемлемым для клиники, - биологические жидкости, главным образом кровь и моча.
|
|
|
Кровь является жидкой тканью организма, состоящей из клеток и плазмы. Обмен веществ клеток крови частично отражает общие закономерности метаболизма, по которым можно судить о его сдвигах в других тканях. Однако форменные элементы крови выполняют также специальные функции, для оценки которых изучают соответствующие биохимические показатели. Составные компоненты плазмы (белки, небелковые органические и минеральные вещества) дают необходимую информацию о функциях собственно крови (транспортной, регуляторной и т.д.) и об изменениях метаболизма, произошедших в разных тканях.
Биохимические исследования мочи позволяют судить об изменениях не только в выделительной и мочеобразовательной функциях почек, но и об обмене веществ в других органах и организме в целом.
Дата добавления: 2018-11-24; просмотров: 576; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!