Работа 77. Качественные реакции на витамины
Реактивы. Хлороформ; серная кислота, конц.; сульфаниловая кислота, 1%-ный раствор; нитрит натрия, 5%-ный раствор, свежеприготовленный; карбонат натрия, 10%-ный раствор; азотная кислота, конц.; диэтилдитиокарбамат натрия, 2%-ный спиртовой раствор; гидроксид натрия, 4%-ный спиртовой раствор; гидросульфит натрия, порошок; хлорид железа (III), кристаллический; тиомочевина, кристаллическая.
Оборудование. Штатив с пробирками; скальпель; весы аптечные с разновесами; беззольные фильтры; флуороскоп.
Материал.
1. Рыбий жир.
2. Токоферол, 0,1%-ный спиртовой раствор.
3. Витамин К, насыщенный раствор в 70%-ном этаноле.
4. Тиамин, порошок.
5. Рибофлавин, 0,002%-ный раствор.
6. Рибофлавинмононуклеотид, 0,1%-ный раствор в ампулах, из которого готовят 0,002%-ный раствор.
7. Флавинат, лекарственный препарат в ампулах, содержащий ФАД, 0,002%-ный раствор.
8. Чай сухой.
9. Витамин В12, раствор в ампулах.
а. Проба Друммонда на ретинол (витамин А). Метод основан на способности концентрированной серной кислоты отнимать воду от ретинола с образованием окрашенных продуктов.
Ход определения. В пробирку вносят 2 капли рыбьего жира, 5 капель хлороформа и 1-2 капли концентрированной серной кислоты. Появляется голубое окрашивание, переходящее в буро-красное.
б. Обнаружение кальциферола (витамин Д). Метод основан на взаимодействии кальциферола с гидрохлоридом анилина с образованием окрашенных продуктов.
|
|
Ход определения. В сухую пробирку помещают 10 капель анилинового реактива и прибавляют 5 капель рыбьего жира. Содержимое пробирки осторожно при постоянном перемешивании нагревают до кипения и кипятят в течение 30 с. В присутствии витамина Д желтая эмульсия приобретает вначале грязно-зеленое, а затем буро-красное или красное окрашивание.
в. Качественная реакция на токоферол (витамин Е). Метод основан на образовании соединений хиноидной структуры, окрашивающихся в красный цвет, при действии сильных окислителей (концентрированной азотной кислоты) на токоферол.
Ход определения. В сухую пробирку вносят 5 капель спиртового раствора токоферола и добавляют 10 капель концентрированной азотной кислоты. Встряхивают. Наблюдают за развитием красного окрашивания.
г. Качественная реакция на нафтохинон (витамин К). Метод основан на взаимодействии диэтилдитиокарбамата с витамином К в щелочной среде с образованием комплекса голубого цвета.
Ход определения. В пробирку вносят 4 капли спиртового раствора диэтилдитиокарбамата натрия и 4 капли раствора гидроксида натрия. Встряхивают и наблюдают за развитием окраски.
д. Обнаружение тиамина (витамин В1). Метод основан на способности тиамина образовывать с диазофенилсульфоновой кислотой комплекс оранжево-красного цвета в щелочной среде.
|
|
Ход определения. В пробирку вносят 5 капель раствора сульфаниловой кислоты и прибавляют 5 капель раствора нитрита натрия. К полученному диазореактиву добавляют на кончике скальпеля порошок тиамина и 5 капель раствора карбоната натрия. Встряхивают. Появляется оранжево-красное окрашивание.
е. Обнаружение рибофлавина (витамин В2 и флавиновых коферментов. Метод основан на способности окисленных форм рибофлавина и флавиновых коферментов (ФМН и ФАД) давать в ультрафиолетовом свете желто-зеленую флуоресценцию, интенсивность которой зависит от их концентрации. Восстановленные формы флавинов не флуоресцируют.
Ход определения. В одну пробирку вносят 10 капель раствора рибофлавина, в другую – рибофлавинмононуклеотида, в третью – флавината, приливают в каждую из них по 5 мл воды и перемешивают встряхиванием. Ставят пробирки в штатив флуороскопа и сравнивают интенсивность флуоресценции трех проб.
Прибавляют в каждую пробирку на кончике скальпеля порошок гидросульфита натрия (восстановитель) и наблюдают за гашением флуоресценции.
ж. Качественная реакция на рутин (витамин Р). Метод основан на взаимодействии рутина с хлоридом железа (III) с образованием комплексного соединения зеленого цвета.
|
|
Ход определения. На аптечных весах берут навеску 100 мг чая, добавляют 15 мл дистиллированной воды и кипятят в течение 3 мин. Дают остыть, отбирают в пробирку 1 мл жидкости и добавляют несколько кристалликов хлорида железа (III). Перемешивают и разводят в 2-3 раза дистиллированной водой. Развивается зеленое окрашивание.
з. Качественная реакция на цианкобаламин. Метод основан на способности кобальта, входящего в состав витамина В12, при высокой температуре взаимодействовать с тиомочевиной с образованием комплекса зеленого цвета.
Ход определения. На беззольный фильтр наносят 2-3 капли 10%-ного раствора тиомочевины, высушивают на газовой горелке, после чего наносят 1-2 капли раствора витамина В12 и снова высушивают. Образуется зеленое кольцо.
Оформление работы. Все результаты качественных реакций на витамины оформить в виде таблицы.
№ опыта | Материал | Исследуемый витамин | Реакция | Наблюдаемая окраска |
Практическое значение работы. Качественные реакции на витамины позволяют обнаружить их наличие в лекарственных препаратах и после экстракции в пищевых продуктах и лекарственных растениях. Принцип, положенный в основу качественных реакций на витамины, используется при разработке количественного определения их в различных природных объектах и лекарствах.
|
|
Работа 78. Определение содержания тиамина и рибофлавина
флуориметрическим методом в поливитаминных препаратах
Реактивы. Соляная кислота, 0,1 М раствор; окислительная смесь*; Н-бутанол; этанол, 96%-ный; тиамин, стандартный раствор концентрации 10 мкг/мл; уксусная кислота, ледяная; перманганат калия, 4%-ный раствор; гидроксид водорода, 3%-ный раствор; гидросульфит натрия, порошок; рибофлавин, стандартный раствор концентрации 0,005 мг/мл.
Оборудование. Штатив с пробирками; пенициллиновые флакончики с полиэтиленовыми пробками; пипетки вместимостью 1 и 5 мл; мерный цилиндр вместимостью 50 мл; ступка с пестиком; флуориметр ЭФ-3 или БИАН.
Материал. Драже поливитаминов.
а. Определение содержания тиамина. Метод основан на способности тиамина окисляться гексацианоферратом (III) калия в щелочной среде в тиохром, который после извлечения его из раствора бутиловым спиртом дает в ультрафиолетовом свете сине-голубую флуоресценцию:
Ход определения. Драже поливитаминов разминают в ступке, добавляя 30 мл раствора соляной кислоты, и тщательно перемешивают.
В один флакончик (контроль) вносят 5 мл соляной кислоты, во второй (опыт) – 1 мл водного экстракта драже витаминов и 4 мл дистиллированной воды, в третью (стандарт) – 5 мл раствора тиамина.
Во все флакончики приливают по 1,5 мл окислительной смеси и осторожно встряхивают их до полного перемешивания. Затем добавляют в них по 5 мл бутанола, плотно закрывают пробками и интенсивно встряхивают 5 мин. После расслоения жидкости осторожно прибавляют по 0,5 мл этанола (для просветления бутанола).
Осторожно сливают просветленный бутанольный слой в кювету флуориметра и измеряют интенсивность флуоресценции опытной и контрольной проб со стандартным раствором тиамина.
Расчет проводят по формуле
(Еоп – Ек)0,01·1·5,5
х = —————————— ,
Ест30
где х – содержание тиамина в драже, мг;
Еоп – показания флуориметра для опытной пробы;
Ек – показания флуориметра для контрольной пробы;
Ест – показания флуориметра для стандартной пробы;
0,01 – концентрация тиамина в стандартном растворе, мг/мл;
30 – объем экстракта драже, мл;
1 – объем экстракта, взятого на исследование, мл;
5,5 – объем пробы, просветленной этанолом, мл.
б. Определение содержания рибофлавина. Принцип метода см. работу 73, е.
Ход определения. Драже поливитаминов разминают в ступке, добавляя 30 мл раствора соляной кислоты, и тщательно перемешивают.
В одну пробирку вносят 7 мл дистиллированной воды, во вторую (опытную) – 2 мл экстракта драже и 5 мл дистиллированной воды, в третью (стандартная) – 1 мл стандартного раствора рибофлавина и 6 мл воды.
Во все пробирки приливают по 10 капель ледяной уксусной кислоты и по 1,5 мл раствора перманганата калия (для окисления посторонних флуоресцирующих веществ).
Содержимое пробирок встряхивают и добавляют по каплям (примерно 5 капель) гидроксид водорода при постоянном помешивании стеклянной палочкой до полного просветления жидкости. Растворы отстаивают 5 мин, до прекращения выделения пузырьков газа. Сливают жидкость в кюветы флуориметра и измеряют интенсивность флуоресценции всех проб.
Расчет проводят по формуле
(Еоп – Ек)2·0,005·7
х = —————————— ,
Ест30
где х – содержание рибофлавина в драже, мг;
Еоп – показания флуориметра для опытной пробы;
Ек – показания флуориметра для контрольной пробы;
Ест – показания флуориметра для стандартной пробы;
30 – объем экстракта драже, мл;
2 – объем экстракта драже, взятого на исследование, мл;
0,005 – концентрация рибофлавина в стандартном растворе, мг/мл;
7 – объем флуориметрируемых проб, мл.
Оформление работы. Рассчитать содержание исследуемых витаминов в драже и сделать вывод о возможности практического использования флуориметрического метода.
Практическое значение работы. Флуориметрические методы определения тиамина и рибофлавина применяются для определения этих витаминов в пищевых продуктах, лекарственных растениях и готовых лекарственных препаратах, а также для изучения обеспеченности ими организма. Обеспеченность этими витаминами может быть определена по их уровню в крови и по экскреции с мочой. Низкое содержание витаминов в организме наблюдается при гиповитаминозах, болезнях печени, сердечно-сосудистых заболеваниях, заболеваниях желудочно-кишечного тракта и других патологических состояниях.
Работа 79. Количественное определение аскорбиновой кислоты
в лекарственных растениях
Реактивы. Соляная кислота, 2%-ный раствор; 2,6-дихлорфенолиндофенол, 0,001 М раствор.
Оборудование. Пипетки вместимостью 5 и 10 мл; мерная колба вместимостью 100 мл; воронка; вата; аптечные весы с разновесами; микробюретка; скальпель; ступки с пестиком; стаканчики для титрования.
Материал.
1. Лекарственное сырье (цветы бузины и тысячелистника, лист крапивы и сенны, кора крушины, витаминный чай, плоды шиповника).
2. Таблетки из плодов аронии черноплодной.
Метод основан на способности аскорбиновой кислоты к окислительно-восстановительным превращениям. В ходе окисления аскорбиновой кислоты происходит восстановление 2,6-дихлорфенолиндофенола с образованием его лейкоформы. На полное окисление аскорбиновой кислоты в растворе указывает появление розового окрашивания при небольшом избытке 2,6-дихлорфенолиндофенола в кислой среде:
Ход определения. На аптечных весах берут навески лекарственного сырья: цветы бузины, лист крапивы, цветы тысячелистника, кора крушины, лист сенны, витаминный чай и плоды аронии черноплодной (или таблетки) по 0,5 г; шиповник, очищенный от семян, - 0,2 г. Исследуемый материал переносят в ступку, измельчают скальпелем и растирают в ступке с 5 мл раствора соляной кислоты.
Вытяжку фильтруют через тонкий слой ваты в мерную колбу, вместимостью 100 мл. Извлечение витамина С из той же навески повторяют три раза с таким же объемом соляной кислоты, фильтруя каждый раз полученную вытяжку в ту же мерную колбу. Содержимое колбочки доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают.
Для определения отбирают 10 мл вытяжки в стаканчик и титруют содержимое раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола, налитого в микробюретку, до появления розового окрашивания, не исчезающего в течение 30 с.
Расчет проводят по формуле:
0,088V100·1000
х = —————————— ,
10b
где х – содержание аскорбиновой кислоты, мг/кг;
0,088 – масса аскорбиновой кислоты, соответствующая 1 мл 0,001 М раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, мг;
100 – разведение взятой пробы;
1000 – коэффициент пересчета на 1 кг сырья;
10 – объем жидкости, взятый для титрования, мл;
V – объем 2,6-дихлорфенолиндофенола, пошедший на титрование, мл;
b – навеска исследуемого материала, г.
Оформление работы. Полученные данные оформить в виде таблицы и сделать вывод о значении исследованного растительного материала как источника аскорбиновой кислоты. Указать в выводе о целесообразности применения растительного сырья с целью профилактики С-витаминной недостаточности.
Материал | Навеска, г | Объем 2,6-дихлорфенолиндофенола, пошедшего на титрование, мл | Содержание аскорбиновой кислоты, мг/кг |
Практическое значение работы. Определение содержания аскорбиновой кислоты в пищевых продуктах и лекарственных растениях необходимо для составления правильного рациона, удовлетворяющего потребность организма в этом витамине. Богаты витамином С плоды шиповника, черной смородины, цитрусовых и т.д. Аскорбиновая кислота применяется для профилактики гиповитаминоза и простудных заболеваний, для лечения воспалительных процессов, атеросклероза. Она способствует усилению регенеративных процессов. Определение аскорбиновой кислоты в крови и моче используется для выявления состояния гиповитаминоза. Аскорбиновая кислота участвует в окислительно-восстановительных процессах при синтезе стероидных гормонов, обмене ароматических аминокислот, образовании соединительной ткани.
Дата добавления: 2018-11-24; просмотров: 538; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!