Работа 96. Определение кетоновых тел и глюкозы в моче
К кетоновым (ацетоновым) телам относятся ацетон, ацетоуксусная и β-гидроксимасляная кислоты.
Реактивы. Нитропруссид натрия, 10%-ный раствор свежеприготовленный; уксусная кислота, конц.; гидроксид натрия, 10%-ный раствор; хлорид железа (III), 10%-ный раствор.
Оборудование. Глазные пипетки; штатив с пробирками; набор «Глюкотест».
Материал. Моча, нормальная и патологическая.
а. Проба Легаля на ацетон и ацетоуксусную кислоту мочи. Метод основан на способности ацетона и ацетоуксусной кислоты в щелочной среде образовывать с нитропруссидом натрия комплексы оранжево-красного цвета, а при подкислении раствора – соединений вишнево-красного цвета.
Ход определения. В одну пробирку вносят 10 капель нормальной, в другую – 10 капель патологической мочи и добавляют в обе пробы по 2 капли раствора нитропруссида натрия и по 4 капли раствора гидроксида натрия. Появляется оранжево-красное окрашивание.
Вносят в обе пробирки по 10 капель концентрированной уксусной кислоты, при этом возникает вишнево-красное окрашивание.
Примечание . Креатинин мочи с нитропруссидом натрия также дает оранжево-красное окрашивание, но при добавлении концентрированной уксусной кислоты жидкость окрашивается в желтый цвет.
б. Проба Герхарда на ацетоуксусную кислоту мочи. Метод основан на взаимодействии железа с енольной формой ацетоуксусной кислоты с образованием комплекса красно-фиолетового цвета.
|
|
|
Ход определения. В одну пробирку вносят 20 капель нормальной, а в другую – 20 капель патологической мочи и прибавляют по 5 капель раствора хлорида железа (III) в обе пробы. Развивается красно-фиолетовое окрашивание.
в. Экспресс-тест на ацетон мочи.
Ход определения. На каждую из таблеток наносят по 2 капли нормальной и патологической мочи. Через 2 мин сравнивают окраску таблеток с цветной шкалой, приложенной к набору. При отсутствии ацетона окраска не развивается.
г. Определение глюкозы в моче с помощью набора «Глюкотест». Метод основан на визуальной оценке изменения цвета красителя (о-толидин), которым пропитана полоска бумаги «Глюкотест»; по цветной шкале устанавливают примерное содержание глюкозы в моче.
Ход определения. Одну полоску бумаги «Глюкотест» смачивают нормальной, а другую – патологической мочой. Сравнивают через несколько минут окраску полосок с цветной шкалой, имеющейся в комплекте. Содержание глюкозы в моче определяют по наиболее совпадающему со шкалой цвету полоски.
Оформление работы. Результаты занести в таблицу.
| Исследуемая моча | Название пробы | Выявляемое вещество | Результат |
|
|
|
Сделать вывод о присутствии ацетоновых тел и глюкозы в образцах нормальной и патологической мочи и указать на вероятные их причины.
Практическое значение работы. В норме пробы на ацетоновые тела и глюкозу в моче отрицательны.
Одновременное выделение ацетоновых тел и глюкозы с мочой наблюдается наиболее часто при сахарном диабете, реже при действии глюкокортикоидов (стероидный диабет), соматотропина и кортикотропина. Глюкозурия без ацетонурии имеет место при употреблении большого количества углеводов с пищей, а ацетонурия без глюкозурии – при голодании.
Работа 97. Определение белка в моче
По методу Бранденберга-Робертса-Стольникова
Реактивы. Азотная кислота, конц.
Оборудование. Штатив с пробирками; пипетка для концентрированных кислот; пипетка вместимостью 2 мл.
Материал. Моча, нормальная и патологическая*.
Метод основан на пробе Геллера, состоящей в том, что при наслаивании мочи, содержащей белок, на концентрированную азотную кислоту образуется мутное белое кольцо денатурированного белка. Экспериментально установлено, что растворы, содержащие 0,033 г/л белка, дают это кольцо между 2-й и 3-й минутами после наслаивания.
|
|
|
Ход определения. Проводят пробу Геллера с нормальной и патологической мочой, для чего вносят в пробирку 20 капель концентрированной азотной кислоты и осторожно из пипетки наслаивают мочу. Если в моче содержится белок, то через 2-4 мин образуется белая муть в виде кольца.
Мочу с положительной пробой Геллера используют для количественного определения белка, для чего готовят разведение мочи. В пять пробирок наливают по 2 мл дистиллированной воды. В первую вносят 2 мл мочи, перемешивают и отбирают 2 мл смеси и переносят во вторую и т.д. Из последней пробирки 2 мл набранной жидкости отбрасывают. Получается моча, разведенная в 2, 4, 8, 16 и 32 раза.
В другие пять пробирок отмеривают по 2 мл концентрированной азотной кислоты и осторожно с помощью пипетки наслаивают на кислоту соответствующую пробу разведенной мочи.
Отмечают максимальное разведение мочи, при котором появляется мутное колечко между второй и третьей минутами.
Расчет. Найденное разведение мочи умножить на 0,033 г/л. Например, кольцо денатурированного белка образовалось в четвертой пробирке, где разведение равно 16. Следовательно, содержание белка в исследуемой моче 0,033·16 = 0,528 г/л.
Оформление работы. Рассчитать содержание белка в патологической моче и указать на использование метода в практике.
Дата добавления: 2018-11-24; просмотров: 449; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!