Интенсивность реакции выражается следующим образом:
«++++» - все клетки осели, жидкость в пробирке совершенно прозрачна. Результат реакции резко положительный;
«+++» - осадок меньше, нет полного просветления жидкости. Результат реакции положительный;
«++» - осадок еще меньше, жидкость мутнее. Результат реакции сомнительный;
«+»- на дне пробирки незначительный осадок, жидкость мутная. Сомнительный результат реакции;
«-» - осадка нет, жидкость равномерно мутная, как в контроле антигена. Отрицательный результат реакции.
К работе № 2
Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РПГА, РНГА)
Методы постановки РНГА
| РНГА с эритроцитарным антигенным диагностикумом |
| РНГА с эритроцитарнымантительнымдиагностикумом |
| Реакция латекс-агглютинации |
| Реакция Кумбса |
| РНГА с унитиолом (выявление IgM и IgG) |
В этой реакции микробный или растворимый антиген адсорбируется на поверхности эритроцитов, которые в таком «нагруженном» состоянии приобретают способность агглютинироваться иммунной сывороткой, специфичной для микробного антигена.В лунках пластмассовых пластин готовят последовательные разведения сыворотки больного, ориентируясь на диагностический титр. Затем в каждую лунку вносят по 0,05 мл 3% суспензии нагруженных антигеном эритроцитов – соответствующего эритроцитарногодиагностикума. Через 2 ч инкубации при 370С учитывают результат, оценивая внешний вид осадка эритроцитов (без встряхивания): положительный результат реакции – характерный кружевной вид осадка эритроцитов, тонкая пленка с неровными краями («зонтик»); отрицательный результат реакции – осадок эритроцитов в виде компактного диска или колечка с ровными краями на дне лунки («пуговка»). Реакция гемагглютинации является более чувствительной, чем агглютинация бактерий, применяется для диагностики при многих инфекционных заболеваниях, особенно у детей, при необходимости выявления антител в более низких титрах. Эта реакция может быть использована и для обнаружения антигенов при применении специфических сывороток.
|
|
|
К работе № 3
Реакция преципитации (РП)
Преципитация (от лат. praecipitatio — сбрасывание, стремительное падение).Реакция преципитации (РП) - это формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде мутного «кольца» или осадка, называемого преципитатом. Он образуется в присутствии электролита при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах; избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса.
В отличие от реакции агглютинации антигеном для реакции преципитации служат растворимые соединения, величина частичек которых приближается к размерам молекул. Это могут быть белки, комплексы белков с углеводами и липидами, бактериальные экстракты, различные лизаты или экстракты бульонных культур микробов. Антитела, участвующие в реакции преципитации, называют преципитинами. Образующийсямелкодисперсный комплекс антиген — антитело выявляется при определенных методах постановки реакции преципитации.
|
|
|
РП обычно применяют для определения Аг при диагностике ряда инфекций (сибирская язва, менингит, пневмония и др.); содержания антител в сыворотке крови больных или иммунизированных животных;в судебной медицине - для определения видовой принадлежности крови, спермы и т. д.; в санитарно-гигиенических исследованиях - при установлении фальсификации продуктов; с ее помощью определяют филогенетическое родство животных и растений.
Для этой реакции необходимы следующие компоненты.
1. Антитела (преципитины) - иммунная сыворотка с высоким титром антител (не ниже 1:100000). Титр преципитирующей сыворотки устанавливают по наибольшему разведению антигена, с которым она дает реакцию. Сыворотку обычно применяют неразведенной или в разведении 1:5-1:10.
2. Антиген - растворенные вещества белковой или липоидно-полисахаридной природы (полные антигены, гаптены, экстракты или лизаты микробов или других клеток).
|
|
|
3. Изотонический раствор хлорида натрия.
Внимание! Все компоненты, участвующие в этой реакции, должны быть совершенно прозрачными.
Основные методы проведения реакции преципитации: реакция кольцепреципитации и реакция преципитации в агаре (геле).
Методика
В преципитационную пробирку с помощью пастеровской пипетки вносят 0,2-0,3 мл (5-6 капель) сыворотки. На сыворотку осторожно наслаивают антиген в таком же объеме, наливая его тонкой пастеровской пипеткой по стенке пробирки. Пробирку при этом держат в наклонном положении. При правильном наслаивании между сывороткой и антигеном должна получиться четкая граница. Осторожно, чтобы не перемешать жидкости, пробирку ставят в штатив. При положительном результате реакции на границе антигена и антитела образуется мутное «кольцо» - преципитат. Реакция сопровождается рядом контролей.
Дата добавления: 2018-10-27; просмотров: 324; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!