Работа № 2. Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА или РПГА)

Стр 1 из 4Следующая ⇒

Стоматологический факультет

ЗАНЯТИЕ № 2.1.4

ИММУНИТЕТ. ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ (РА, РП, РПГА)

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

изучить механизмы взаимодействия АГ-АТ, принципы и методы постановки: РА, РПГА, РП.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. РА. Компоненты, механизм, способы постановки, применение.

2. РПГА. Компоненты, механизм, способы постановки, применение.

3. РП. Компоненты, механизм, способы постановки, применение.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

использовать реакции иммунитета в диагностике инфекционных болезней.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ:

методами постановки и оценки результатов серологических реакций.

Теоретическая справка

Серология - раздел иммунологии, изучающий взаимодействие Аг иАт в реакциях invitro.

Серологические реакции - совокупность реакций invitro, основанных на Аг-Ат взаимодействии и направленных на выявление в сыворотке крови Ат, а также Аг в исследуемом материале.

Серологические реакции, протекающие invitro характеризуются специфичностью и чувствительностью.

Специфичность заключается в том, что детерминантные группы Аг взаимодействуют с соответствующими им по заряду, структуре и конфигурации активными центрами Ат, образуя комплекс Аг-Ат.

ПоливалентностьАг иАт обеспечивает формирование агрегатов их молекул, которые формируются в соответствии с теорией сетевых структур (Л. Поллинг). Согласно этой теории, к первоначально образовавшемуся комплексу Аг-Ат последовательно присоединяются другие молекулы Аг иАт, реагируя со свободными активными центрами и детерминантами. В результате многократного связывания формируются сетевые структуры, которые в присутствии электролита превращаются в макроагрегаты, выпадающие в осадок.Характер и выраженность реакции зависят от количественного соотношения антигенов и антител. Наиболее интенсивно реакции проявляются в том случае, если реагенты находятся в эквивалентном соотношении.

Чувствительность – это минимальное количество Аг или Ат, которое можно выявить в данной реакции.

Особенностипротекания реакцийinvitro:

1) наличие электролита;

2) обратимость: образовавшиеся комплексы могут диссоциировать на составляющие компоненты без изменения их свойств;

3) двухфазность: первая фаза – взаимодействиеАг иАт (обычно эта фаза длится несколько секунд или минут); вторая – характеризуется внешними признаками образования иммунных комплексов - видимое проявление реакции (феномен).Эта фаза может развиваться от нескольких минут до нескольких часов.Оптимальное специфическое взаимодействие антител с антигеном происходит в изотоническом растворе с рН, близким к нейтральному.

Феномены реакции: агглютинация, преципитация, лизис, свечение, изменение цвета и др. Это зависит ота) физико-химических свойств Аг (размеры, физическое состояние); б) класса и вида Ат (полные, неполные); в) условий опыта (рН, t, консистенция среды и др.)

Направления реакций (цель):

Сероиндикация- обнаружение возбудителя в исследуемом материале (определение рода возбудителя) с поливалентными сыворотками.

Сероидентификация - определение вида возбудителя или отдельных антигенов с монорецепторными сыворотками.

Серодиагностика - обнаружение антител или определение титра антител в сыворотке крови.

Схема описания реакции:

Направление (цель)

Ингредиенты (компоненты)

Механизм (схема)

Способ постановки реакции

Результат

Вывод

Работа № 1. Реакция агглютинации (РА)

Цель:

Определить родовую принадлежность выделенной чистой культуры в ориентировочной РА с поливалентными сыворотками: сальмонеллезной ABCDE, шигеллезной, иерсиниозной (сероиндикация).

Самостоятельная работа: поставить реакцию агглютинации на стекле, оценить результат, сделать вывод (см. теоретическую справку). Описать реакцию по схеме.

Направление:

Ингредиенты:

Механизм:

Постановка:

Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Цель:

Определить вид исследуемой культуры в развернутой РА на стекле смоновалент-

ными сыворотками (сероидентификация).

Направление:

Ингредиенты:

Механизм (схема см. выше)

Постановка:

Цель:

Определить титр антител в парных сыворотках пациента в РА (объемный метод) с дизентерийным диагностикумом (серодиагностика). Парные сыворотки - это сыворотки от одного и того же больного, взятые в начале болезни и через одну две недели с целью выявления нарастания титра антител.

Самостоятельная работа: учесть результат развернутой реакции агглютинации (объемный метод), сделать вывод (см. теоретическую справку). Описать реакцию по схеме.

Направление:

Ингредиенты:

Механизм (см. выше)

Постановка:

1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600 КС КД

Работа № 2. Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА или РПГА)

Цель:определить титр антител в парных сыворотках пациента с помощьюРПГА, поставленной с эритроцитарнымсальмонеллезнымдиагностикумом.

Самостоятельная работа: учесть результат реакции непрямой гемагглютинации, сделать вывод (см. теоретическую справку). Описать реакцию по схеме.

Направление:

Ингредиенты:

Механизм:

Постановка:

Дата добавления: 2018-10-27; просмотров: 324; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

12 3 4 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!