Работа № 3. Реакция преципитации (РП)

Цель:

1. Определить наличие сибиреязвенного антигена в экстракте из шерсти животного с помощью РП по Асколи (кольцепреципитация).

Самостоятельная работа:поставить реакцию преципитации с сибиреязвенной сывороткой и экстрактом из шерсти животного, оценить результат, сделать вывод (см. теоретическую справку). Описать реакцию по схеме.

Направление:

Ингредиенты:

Механизм:

Постановка:

«К» «О»

Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Цель:

2. Определить токсигенность исследуемой культуры м/о с помощью РП в геле (иммунодиффузия).

Самостоятельная работа: учесть результат реакции преципитации с противодифтерийной антитоксической сывороткой и исследуемой культурой от больного, сделать вывод (см. теоретическую справку). Описать реакцию по схеме.

Направление:

Ингредиенты:

Механизм (см. выше)

Постановка:

Подпись преподавателя ________________________________________________________

Самостоятельная работа студента во внеурочное время:

Ответить на вопросы:

I.Агглютинация-это________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Ингредиенты для постановки РА:

1.___________________________________________________________________________

2.___________________________________________________________________________

3.___________________________________________________________________________

Феномен реакции _____________________________________________________________

Что изображено на схеме?

Какой материал можно исследовать?

Описать суть метода.

Применение в медицине.

Что изображено на схеме?

Какой материал можно исследовать?

Какой метод исследования?

Описать суть метода.

Применение в медицине.

II. РПГА (расшифровать) ________________________________________________________

Особенность РПГА_____________________________________________________________

Ингредиенты для постановки РПГА:

1.___________________________________________________________________________

2.___________________________________________________________________________

3.___________________________________________________________________________

Феномен реакции_____________________________________________________________

III. Преципитация –

это____________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Реакцию преципитации ставят в том случае, если____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Ингредиенты для постановки РП:

1.___________________________________________________________________________

2.___________________________________________________________________________

3.___________________________________________________________________________

Феномен реакции _____________________________________________________________

Что изображено на схеме?

Какой материал можно исследовать?

Какой метод исследования?

Описать суть метода.

Применение в медицине.

Что изображено на схеме?

Какой материал можно исследовать?

Какой метод исследования?

Описать суть метода.

Применение в медицине.

IV. Иммунологическая память. Определение, механизм.

______________________________________________________________________________________________________________________________________

V. Иммунологическая толерантность. Определение, механизм.

__________________________________________________________________

VI. Аллергия. Определение, классификация, механизмы.

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Подпись преподавателя_________________________________________________________

Теоретическая справка

К работе № 1

Реакция агглютинации (РА)

Агглютинация - это склеивание и выпадение в осадок микробов или других клеток под действием антител в присутствии электролита (изотонического раствора хлорида натрия).Группы склеенных бактерий (клеток) называют агглютинатом. Для реакции агглютинации необходимы следующие компоненты:

1. Антитела (агглютинины), которые находятся в сыворотке больного или иммунного животного.

2. Антиген - взвесь живых или убитых микробов, эритроцитов или других клеток.

3. Изотонический (0,9%) раствор хлорида натрия.

Реакцию агглютинации для серодиагностики применяют при брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля), при бруцеллезе (реакция Райта и Хеддлсона), туляремии и т.д. Антителом при этом является сыворотка больного, а антигеном известный микроб. При идентификации микробов или других клеток антигеном служит их взвесь, а антителом - известная иммунная сыворотка. Эту реакцию широко применяют для диагностики кишечных инфекций, коклюша и др.

Методы постановки РА

Ориентировочная РА на стекле

Развернутая РА

(объемный метод)

Реакция коагглютинации

Развернутая РА на стекле (сероидентификация)

Реакция агглютинации на стекле. На обезжиренное предметное стекло наносят две капли специфической (адсорбированной) сыворотки и каплю изотонического раствора хлорида натрия. Капли на стекло необходимо наносить так, чтобы между ними было расстояние. Культуру петлёй или пипеткой тщательно растирают на стекле, а потом вносят в каплю изотонического раствора хлорида натрия и в одну из капель сыворотки, размешивая в каждой до образования гомогенной взвеси. Капля сыворотки, в которую не внесена культура, является контролем сыворотки.

Внимание! Нельзя переносить культуру из сыворотки в каплю изотонического раствора хлорида натрия, которая является контролем антигена. Реакция протекает при комнатной температуре в течение 1-3 мин. Если контроль сыворотки остаётся прозрачным, в контроле антигена наблюдается равномерная муть, а в капле, где культура смешана с сывороткой, появляются хлопья агглютината на фоне прозрачной жидкости, результат реакции считается положительным.

«О»

«К»

«О» - диагностическая сыворотка +культура

«К» - физиологическийраствор + культура

Развёрнутая реакция агглютинации (объемный метод). Готовят последовательные, чаще всего двукратные, разведения сыворотки. Метод называют объёмным. Для определения титра антител в сыворотке крови берут 6 пробирок. В первую пробирку наливают 1 мл исходного разведения сыворотки 1:50 и во все 6 пробирок градуированной пипеткой вносят по 1 мл физиологического раствора. В первой пробирке получится разведение сыворотки 1:100 при объёме 2 мл. Из первой пробирки 1 мл переносят во вторую пробирку, где разведение станет 1:200. Делают ряд последовательных разведений сыворотки в 5 первых пробирках (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600). Из пятой пробирки 1 мл выливают в дезинфицирующий раствор. Во все 6 пробирок добавляют по 2 капли диагностикума. Шестая пробирка является контролем культуры, так как содержит только физиологический раствор и диагностикум.

Ингредиенты	номер пробирки
	1	2	3	4	5	6 контроль сыворотки	7 контроль диагностикума
Физиологический	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0
раствор
Сыворотка больного в	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	-
разведении 1:50
Диагностикум (капли)	2	2	2	2	2	-	2
Разведение сыворотки	1:100	1:200	1:400	1:800	1:1600	1:100	-

Такой контроль необходим для исключения спонтанной агглютинации культуры. Пробирки встряхивают и помещают в термостат при температуре 37°С на 2 часа, а затем оставляют на сутки при комнатной температуре, после чего производят учёт результатов реакции агглютинации.

При постановке реакции агглютинации с сыворотками детей первых месяцев жизни в связи с функциональной неполноценностью антителообразования необходимо выявление более низких титров антител, что учитывается при разведении сыворотки. Исходное разведение сыворотки берут 1:25. В первой пробирке получают разведение 1:50, затем 1:100 и т.д.

При положительном результате реакции в пробирках видны склеившиеся клетки в виде зерен или хлопьев на фоне прозрачной жидкости.Агглютинат постепенно оседает на дно в виде «зонтика», а жидкость над осадком просветляется. Контроль антигена равномерно мутный.

По характеру осадка различают мелко- и крупнозернистую (хлопьевидную) агглютинацию. Мелкозернистая агглютинация получается при работе с О-сыворотками. Крупнозернистая - при взаимодействии подвижных микробов со жгутиковыми Н-сыворотками. Она наступает быстрее мелкозернистой, образующийся при этом осадок очень рыхлый и легко разбивается.

Дата добавления: 2018-10-27; просмотров: 202; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 123 4 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!