Определение каталазной активности в интактных эритроцитах по методу Крайнева.
Об активности каталазы можно судить либо по количеству перекиси водорода, разложившейся под влиянием этого фермента, либо по количеству выделившегося при этом кислорода. По методу Крайнева активность каталазы выражают в микромолях перекиси водорода, разложенной 1 мл крови в течение минуты. Каталаза крови содержится почти исключительно в эритроцитах. Активность этого фермента снижается при некоторых заболеваниях, например анемии, туберкулезе, раке и др.
Ход работы:
1. Приготовить суспензию эритроцитов: отмерить в пробирку 5 мл 0,85% раствора хлористого натрия и добавляют туда 0,1 мл крови, тщательно перемешивая.
2. Отмерить в две пробирки по 5 мл 10% раствора серной кислоты.
3. Отмерить в два тигля по 2 мл 0,5 М раствора перекиси водорода.
4. Отмерить в два стакана по 6 мл 0,85% раствора хлористого натрия и по 2 мл суспензии эритроцитов.
5. С помощью пинцета поместить на дно каждого стакана тигель с перекисью водорода.
6. В первый стакан (контроль) влить из пробирки 5 мл 10% раствора серной кислоты и перемешать содержимое (инактивация каталазы).
7. Второй стакан с тиглем (опыт) вращают до перемешивания содержимого, каталаза эритроцитов начинает разлагать перекись водорода. Перемешивание продолжают в течение 30 секунд, после чего вливают в него 5 мл 10% раствора серной кислоты из пробирки. Реакция приостанавливается. Избыток перекиси водорода в обоих стаканах (опыт и контроль) титруют 0,1N раствором перманганата калия до появления розовой окраски, не исчезающей в течение 30 секунд.
|
|
|
Вычисление производят по формуле:
(А - В) ´ 1,7 ´ 2
0,04 ´ 34
1 мл 0,1N раствора KMnO4 эквивалентен 1,7 мг перекиси водорода
0,04 – количество крови в стакане
А – количество миллилитров 0,1N раствора KMnO4 , пошедшего на титрование контрольного стакана,
В – количество миллилитров 0,1N раствора KMnO4 , пошедшего на титрование опытного стакана,
В норме активность каталазы равна 12-20 ммоль/мл/мин.
Контрольная работа № 5.
Тема: ЭНЕРГЕТИЧЕСКИЙ ОБМЕН.
Цель: контроль приобретенных знаний.
Основные вопросы темы.
1. Понятие об обмене веществ. Анаболические и катаболические процессы и их взаимосвязь. Экзерганические, эндерганические реакции.
2. Макроэргические соединения. АТФ – универсальный аккумулятор и источник энергии в организме. Цикл АТФ-АДФ. Энергетический заряд клетки.
3. Этапы обмена веществ. Биологическое окисление (тканевое дыхание). Особенности биологического окисления.
4. Первичные акцепторы протонов водорода и электронов.
5. Организация дыхательной цепи. Переносчики в дыхательной цепи (ЦПЭ).
6. Окислительное фосфорилирование АДФ. Механизм сопряжения окисления и фосфорилирования. Коэффициент окислительного фосфорилирования (Р/О).
|
|
|
7. Дыхательный контроль. Разобщение дыхания (окисления) и фосфорилирования (свободное окисление).
8. Образование токсичных форм кислорода в ЦПЭ и их обезвреживание.
9. Терморегуляторная функция ЦПЭ.
10.Короткие пути окисления.
11.Общий путь катаболизма – цикл трикарбоновых кислот (ЦТК), химизм процесса.
12.Функции ЦТК
13.Энергетический баланс ЦТК.
14.Гипоэнергетические состояния, причины.
15.Микросомальное окисление, биологическая роль.
Литература:
1. Материалы лекций.
2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. - М.: Медицина, 2004.
3. Биохимия под ред. Е.С. Северина, А.Я. Николаева М.: ГЭОТАР-МЕД, 2011г.
Дата добавления: 2018-10-26; просмотров: 269; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!