Методика определения активности сукцинатдегидрогеназы в мышечной ткани.
В ступке растереть мышечную ткань с добавлением 2-3 мл дистиллированной воды. Содержимое ступки разделить на две пробирки. В первую пробирку добавить 10 капель 5% раствора янтарной кислоты, во вторую-10 капель дистиллированной воды. В каждую пробирку отмерить по 20 капель 0,001Н 2,6дихлорфенолиндофенола. Через 2-3 минуты в первой пробирке 0,001Н 2,6-дихлорфенолиндофенол обесцвечивается, во второй – остается синего цвета.
В выводе объясните, почему это происходит.
Занятие № 2.
Учебные и воспитательные цели:
Общая цель занятия: привить знания о терморегуляторной функции ЦПЭ, общем пути катаболизма (ЦТК), причинах
гипоэнергетических состояний, о функциях микросомального окисления, а также об обезврежива
нии активных форм кислорода и использовать эти знания в практической деятельности.
Частная цель: уметь определять каталазную активность в интактных эритроцитах по методу Крайнева.
1. Входной контроль знаний:
1.1. Тесты.
1.2. Устный опрос.
2. Основные вопросы темы:
2.1. Терморегуляторная функция ЦПЭ.
2.2. Общий путь катаболизма – цикл трикарбоновых кислот (ЦТК).
2.3. Функции ЦТК
2.4. Энергетический баланс ЦТК.
2.5. Гипоэнергетические состояния, причины.
2.6. Микросомальное окисление, биологическая роль.
2.7. Обезвреживание перекиси водорода ферментом каталазой.
|
|
|
Лабораторно-практические работы.
3.1. Определение каталазной активности в интактных эритроцитах по методу Крайнева.
4. Выходной контроль:
4.1. Тесты.
4.2. Ситуационные задачи.
5. Литература:
5.1. Материалы лекций.
5.2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. - М.: Медицина, 2004. С. 305-316.
5.3. Биохимия под ред. Е.С. Северина, А.Я. Николаева М.: ГЭОТАР-МЕД, 2011г.
Основные вопросы темы.
Терморегуляторная функция ЦПЭ.
На синтез молекулы АТФ расходуется примерно 40-45% всей энергии электронов, переносимых по ЦПЭ, 25% тратится на работу по переносу веществ через мембрану. Остальная часть энергии рассеивается в виде теплоты и используется на поддержание температуры тела. Дополнительное образование теплоты происходит при разобщении дыхания и фосфорилирования, которое может быть биологически полезным. Оно позволяет генерировать тепло для поддержания температуры у новорожденных, у зимнеспящих животных и у всех млекопитающих в процессе адаптации к холоду. У них существует бурый жир – особая ткань, специализирующаяся на теплопродукции посредством разобщения дыхания и фосфорилирования. Бурый жир содержит много митохондрий. Около 10% всех белков приходится на так называемый разобщающий белок (РБ-1) – термогенин.
|
|
|
Общий путь катаболизма – цикл трикарбоновых кислот (ЦТК).
Цикл Кребса открыт Гансом Кребсом в 1937г. (цикл трикарбоновых кислот), за открытие этого цикла Кребс в 1953г. получил Нобелевскую премию.
В ЦТК включается ацетил-КоА, который образуется в результате окисления жирных кислот, отдельных аминокислот и др. Некоторые метаболиты (глюкоза, глицерин и др.) превращаются в ПВК, из которой образуется ацетил-КоА в процессе окислительного декарбоксилирования:
пируватдегидрогеназный
комплекс
ПВК ацетил-КоА
НАД (РР), ФАД (В2), ТДФ (В1),
HS- КоА (В3), липоевая кислота
Функции ЦТК.
• Интегративная функция (объединяющая обмен белков, жиров и углеводов через образование ацетил-КоА).
• Водородгенерирующая функция – образуется 4 пары протонов Н+.
• Энергетическая функция – образуется 1 молекула АТФ между сукцинил-КоА и сукцинат (субстратное фосфорилирование).
• Анаболическая (пластическая) – метаболиты ЦТК используются для синтеза других веществ:
- ацетил-КоА – в синтезе холестерина и его производных (желчных кислот, стероидных гормонов, провитамина Д3), высших жирных кислот, кетоновых тел, ацетилхолина и др;
|
|
|
- α-кетоглутаровая кислота – глутаминовая, глутамин, ГАМК, пролин, аргинин;
- сукцинил-КоА – гем;
- СО2 – глюкоза, высшие жирные кислоты, пуриновые и пиримидиновые нуклеотиды;
- фумаровая кислота – в синтезе мочевины;
- ЩУК – аспарагиновая кислота, аспарагин, глюкоза, метионин, треонин.
Энергетический баланс ЦТК.
Субстраты ЦТК: изоцитрат, α-кетоглутарат и малат отдают протоны и электроны на НАД-зависимые дегидрогеназы, которые транспортируют протоны и электроны в ЦПЭ на I комплекс, следовательно протоны и электроны проходят все три пункта сопряжения (I, III, IV комплексы). Коэффициент окислительного фосфорилирования для:
- изоцитрат – 3/1=3АТФ;
- α-кетоглутарат – 3/1=3АТФ; 9АТФ в ЦПЭ
- малат – 3/1=3АТФ
Субстрат ЦТК: сукцинат отдает протоны и электроны на сукцинат-фумарат-дегидрогеназу (II комплекс), которая переносит протоны и электроны на убихинон, минуя I комплекс ЦПЭ, следовательно, электроны проходят два пункта сопряжения (III, IV комплексы).
Коэффициент окислительного фосфорилирования для сукцинат – 2/1=2АТФ.
Между сукцинил-КоА и сукцинат образуется 1 молекула АТФ (субстратное фосфорилирование).
|
|
|
Энергетический баланс ЦТК= 9АТФ (ЦПЭ) + 2АТФ (ЦПЭ) + 1АТФ (субстратное фосфорилирование) = 12 молекул АТФ.
Дата добавления: 2018-10-26; просмотров: 518; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!