Лекарственная устойчивость бактерий.
Лекарственная устойчивость – способность микроорганизмов осуществлять жизнедеятельность в присутствии лекарственных препаратов.
У бактерий приобретение лекарственной устойчивости происходит 2мя путями:
1) мутации в геноме
2) приобретение чужеродного гена.
Наиболее устойчивы к воздействию лекарств: туберкулёз, стрептококки, сепсис.
Формы лекарственной устойчивости:
- мутации в геноме, бактерия синтезирует вещества, которые действуют на антибиотик и делают его неактивным
- изменяется проницаемость клеточной мембраны
- изменяются бактериальные компоненты клетки (РНК-синтетаза), изменения структур рибосом
Лекарственная устойчивость вирусов
У вирусов приобретение лекарственной устойчивости происходит 2мя путями:
1) мутации в геноме
2) изменение конформации белков
Наиболее устойчивы к воздействию лекарств: вирусные гепатиты С и В, вирус гриппа, ВИЧ
Первичные мутации обеспечивают устойчивость к лекарственному препарату ( структурные участки белков, активный центр фермента, изменения конформоции белка)
Вторичные мутации не оказывают влияние на препарат (изменение конформации фермента, мутации возникают случайно)
Гепатиты: препараты направлены на этап обратной транскрипции, происходят изменения в ферменте обратная транскриптаза.
Грипп: происходят изменения в нейраминидазе, который по своей природе часто подвергается мутациям (отсюда большое разнообразие штаммов) – это оболочечный белок. Мишень для Терафлю
Белок H2 – структурный белок. Мишень для препаратов римантадинового ряда
|
|
|
ВИЧ – обратная транскриптаза, интеграза, белки слияния и проникновения, протеаза
Генетический порог лекарственной устойчивости – то количество генов, которое должно накопиться для снижения лекарственного действия препарата.
видос по теме : https://postnauka.ru/video/73748
ПЦР, принцип реакции, основные этапы и компоненты
Полимера́зная цепна́я реа́кция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе).
Что требуется:
1) матрица
2) полимераза (Tag-полимераза)
3) трифосфаты
4) праймеры
5) буфер
6) вода (деоинизированная)
Стадии
1)денатурация (94—96 °C)
2)отжиг (60—72 °C.)
3)элонгация (72 °C.)
Множество разновидностей. Например,
Real-time PCR – одновременно амплификация и измерение количества данной молекулы ДНК. Нужны метки, например ДНК метят флуоресцентным красителем syberGreen.
Вложенная ПЦР (Nested PCR (англ.)) — применяется для уменьшения числа побочных продуктов реакции. Используют две пары праймеров и проводят две последовательные реакции. Вторая пара праймеров амплифицирует участок ДНК внутри продукта первой реакции
|
|
|
ПЦР в капле – метод используется для выявления конкретных небольших участков генома. Идет точечно по пришитой молекуле.
Вообще разновидностей много, но эти мы обсуждали. Больше – в википедии:
10. Модификации ПЦР
11. Использование ПЦР в диагностических и научных целях
12. Секвенирование по Сэнгеру, принцип реакции, основные этапы и компоненты
Современные методы секвенирования – NGS
Секвенирование нового поколения — техника определения нуклеотидной последовательности ДНК и РНК для получения формального описания её первичной структуры. Технология методов секвенирования нового поколения (СНП) позволяет «прочитать» единовременно сразу несколько участков генома, что является главным отличием от более ранних методов секвенирования.
Более того, появилась реальная возможность единовременно оценивать экспрессию (работу) тысяч генов в организмах, тканях и единичных клетках (секвенирование транскриптомов), а также анализировать регуляцию их активности (анализ экспрессии микроРНК и метилирования генома). В настоящее время на рынке представлено сразу несколько разработок, позволяющих определять последовательность полных геномов организмов, проводить анализ экспрессии генов и метилирования генома.
|
|
|
Секвенирование «нового поколения» применяется как для анализа геномов организмов, для которых уже доступен референсный геном (ресеквенирование), так и для того, чтобы впервые расшифровать геном организма (секвенирование de novo).
Пиросеквенирование
Одним из первых методов глубокого секвенирования, предложенным на суд научного сообщества, было пиросеквенирование, подразумевающее «секвенирование путем синтеза». Основной смысл этого типа секвенирования заключается в последовательном синтезе ДНК на ДНК-фрагментах изучаемого организма в специальных пиколитровых «реакторах». Принцип пиросеквенирования. При включении нуклеотида в синтезируемую цепочку ДНК происходит регистрация высвобождающихся пирофосфатов — побочного продукта реакции полимеризации нуклеотидов в ДНК.
Дата добавления: 2018-09-20; просмотров: 234; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!