Задача 2. ОХАРАКТЕРИЗОВАТЬ СТРОЕНИЕ И ЗНАЧЕНИЕ ВОРСИНОК И ВКЛЮЧЕНИЙ.
Для этого надо знать:
1. Ворсинки или фимбрии (пили) – нитевидные поверхностные образования белковой природы, более тонкие и короткие, чем жгутики (3-20 нм х 0,3-10 мкм). Они состоят из белка пилина.
2. Выделяют фимбрии разного типа. Фимбрии общего типа многочисленны (100-200) и покрывают всю поверхность клетки; они ответственны за адгезию, т.е. прикрепление бактерий к субстрату, в том числе к поражаемым клеткам человека и животных, что имеет значение в проявлении патогенного действия. Имеются фимбрии, ответственные за питание, водно-солевой обмен. Термин "пили" применяется чаще для обозначения особых фимбрий – половых или конъюгационных пилей (F-пилей). Эти пили образуются у мужских половых клеток-доноров, которые содержат трансмиссивные плазмиды (F-плазмиды) и участвуют в конъюгации.
3. В цитоплазме бактериальной клетки могут быть различные включения: полисахариды (гликоген, гранулеза), поли-b-оксимасляная кислота, полифосфаты (волютин), кристаллы солей щавелевой кислоты, углекислой извести; у серобактерий обнаруживаются капельки серы. Включения накапливаются при избытке питательных веществ в окружающей среде и выполняют роль запасных веществ для питания и энергетических потребностей.
Включения имеют отличающийся от цитоплазмы химический состав и окрашиваются в иную окраску. Благодаря разнице в плотности они видны и при микроскопии неокрашенных клеток: жир виден в клетках в виде блестящих ярких капелек.
|
|
|
4. Волютин –полиметафосфат, запасное питательное вещество азотистого обмена. Содержится в виде зерен или капель (в дисперсном состоянии). Волютин встречается в клетках многих бактерий и большинства дрожжей.
Зерна волютина окрашиваются темнее цитоплазмы или избирательно принимают иную окраску, чем цитоплазма (явление метахромазии). На этом основана окраска метиленовым синим: зерна волютина – красно-фиолетовые; цитоплазма – голубая.
Выявление зерен волютина, расположенных на концах клетки у дифтерийных палочек, используется как важный дифференциально-диагностический признак. Они выявляются при окраске по методу Нейссера. Зерна имеют щелочную реакцию, избирательно воспринимают ацетат синьки и окрашиваются в темно-синий, почти черный цвет, а цитоплазма – в желтый цвет.
5. Гликоген (полимер глюкозы) и гранулеза (крахмалоподобный полисахарид) являются резервом углеводного питания клетки, энергетическим материалом для его развития. Включения гликогена чаще всего обнаруживаются в клетках дрожжей и спорообразующих бактерий, а гранулеза – в клетках маслянокислых бактерий. "Глыбки" гликогена окрашиваются раствором Люголя в красно-бурый цвет, а гранулеза – серо-синий цвет.
|
|
|
6. Химический состав липидов и их комплексов весьма сложный и многообразный, широко варьирует в зависимости от видовой специфичности, условий питания и возраста микробной культуры. Обилие жировых веществ характерно для старых форм, для культур, поврежденных различными физико-химическими факторами или развивающихся в неблагоприятных условиях.
Свободные жиры содержатся в клетке в виде жировых капель или липидных гранул из нейтральных жиров и поли-b-оксимасляной кислоты. Они окрашиваются растворами судана III в красно-оранжевый цвет. Пары осмиевой кислоты окрашивают жировые капли в черный цвет, цитоплазма остается бесцветной.
Задача 3. ОБЪЯСНИТЬ СУЩНОСТЬ, ЗНАЧЕНИЕ И ТЕХНИКУ ОКРАСКИ ПО ЦИЛЮ-НИЛЬСЕНУ.
Для этого надо знать:
1. Бактерии, содержащие большое количество жиро- и воскоподобных веществ, а также миколовую кислоту в клеточной стенке и цитоплазме (туберкулезные и лепрозные палочки), являются кислотоустойчивыми и не могут быть окрашены простыми методами. Их окрашивают по методу Циля-Нильсена.
2. При окраске бактерий по методу Циля-Нильсена используют концентрированные растворы, содержащие протравы (5 % карболовый фуксин Циля) и ведут окраску при подогревании. Карболовая кислота разрыхляет клеточную стенку и повышает ее тинкториальные свойства. Высокая концентрация красителя и нагревание усиливают реакцию его взаимодействия с миколовой кислотой. Затем препарат обесцвечивают 5 % раствором серной кислоты и докрашивают метиленовым синим по Леффлеру. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет (цвет фуксина), т.к. миколовая кислота вступает во взаимодействие с карболовым фуксином. В результате краска фиксируется в микробной клетке, поэтому кислотоустойчивые палочки не обесцвечиваются серной кислотой. Остальные бактерии обесцвечиваются и докрашиваются в синий цвет метиленовым синим. Благодаря этому кислотоустойчивые бактерии могут быть дифференцированы от других.
|
|
|
3. Техника окраски по Цилю-Нильсену. Фиксированный мазок покрывают фильтровальной бумагой, на которую наливают карболовый фуксин Циля. Затем мазок подогревают над пламенем горелки до появления паров. Добавляют новую порцию красителя и повторяют манипуляцию в течение 3-5 минут. Снимают бумажку пинцетом и после охлаждения до комнатной температуры тщательно промывают мазок водой. Обесцвечивают мазок 5 % раствором серной кислоты, опуская в него предметное стекло на 20-30 минут. Затем препарат тщательно промывают водой. В течение 5 минут окрашивают раствором метиленового синего по Леффлеру, промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой.
Дата добавления: 2018-05-09; просмотров: 373; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!