Задача 7. ОБЪЯСНИТЬ СУЩНОСТЬ МЕТОДА И ТЕХНИКУ ОКРАСКИ ПО ГРАМУ.
Для этого надо знать:
1. Окраска по Граму имеет важное дифференциально-диагностическое значение при исследовании бактерий и широко используется в микробиологии. Различают грамположительные и грамотрицательные бактерии.
2. Сущность окраски по Граму. Различное отношение бактерий к окраске по Граму определяется различным строением и химическим составом клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий.
Т.к. грамположительные бактерии содержат в клеточной стенке мало липидов, красители хорошо впитываются клеточной стенкой, при этом комплекс генцианового фиолетового и йода прочно связывается с большим количеством пептидогликана и присутствующими тейхоевыми кислотами. После обработки спиртом поры в клеточной стенке суживаются, что задерживает красители, и клеточная стенка приобретает сине-фиолетовую окраску.
К грамположительным бактериям относятся стафилококки, стрептококки, коринебактерии дифтерии, микобактерии туберкулеза, бациллы сибирской язвы, клостридии столбняка, ботулизма, газовой гангрены, актиномицеты.
Из-за большого содержания липидов в клеточной стенке грамотрицательных бактерий, она менее проницаема для красителей, а вследствие меньшего содержания пептидогликана и отсутствия тейхоевых кислот образуется менее прочный комплекс этих соединений с генциановым фиолетовым и йодом. После же обработки спиртом поры в клеточной стенке остаются широкими, и комплекс генцианового фиолетового с йодом вымывается, а при последующей окраске фуксином клеточная стенка приобретает красный цвет.
|
|
|
К грамотрицательным бактериям относятся гонококки, менингококки, кишечная палочка, сальмонеллы, шигеллы, холерный вибрион, спирохеты, риккетсии, хламидии.
3. Способность окрашиваться по Граму – достаточно постоянный видовой признак, но некоторые виды бактерий окрашиваются по Граму вариабельно, что зависит от возраста, особенностей культивирования и др. факторов, изменяющих структуру клеточной стенки.
4. Техника окраски по Граму.На фиксированный мазок накладывают бумажки, пропитанные генциановым фиолетовым, и заливают небольшим количеством воды. Окраску проводят 2 мин., затем бумажку удаляют пинцетом. Не промывая препарат водой, сливают краску и наносят раствор Люголя на 30-60 с. до почернения препарата, затем раствор Люголя сливают. Не промывая водой, погружают препарат в 96 % этанол на 20-30 с. до отхождения фиолетовых струй краски. Препарат тщательно промывают водой для удаления спирта. Окрашивают мазок водным фуксином 2 мин. Промывают водой до тех пор, пока струи воды не станут бесцветными. Высушивают препарат фильтровальной бумагой.
|
|
|
Задача 8. ОХАРАКТЕРИЗОВАТЬ СТРОЕНИЕ И ЗНАЧЕНИЕ КАПСУЛ У БАКТЕРИЙ, МЕТОДЫ ИХ ОКРАСКИ.
Для этого надо знать:
1. Некоторые бактерии (как сапрофиты, так и паразиты) способны создавать снаружи клеточной стенки скопление слизистого вещества.
2. Если слизистый слой достаточно толст, имеет определенную форму и четко очерченные границы, то его называют капсулой. Капсула прочно связана с клеточной стенкой и имеет упорядоченное фибриллярное строение.
3. Многие бактерии образуют микрокапсулу – слизистое образование, выявляемое при электронной микроскопии.
4. От капсулы следует отличать слизь – малоструктурное слизистое образование, не имеющее четких внешних границ. Слизь состоит из мукоидных экзополисахаридов, их еще называют гликокаликсом; он участвует в прилипании к субстрату.
5. У большинства бактерий капсула состоит из гомо- или гетерополисахаридов, а у некоторых – из полипептидов, образованных Д-глутаминовой кислотой (бациллы сибирской язвы, возбудители чумы).
6. Полисахариды капсулы синтезируются бактериями при действии внеклеточных ферментов на дисахариды, или их компоненты образуются внутри клетки, а затем секретируются на поверхность клетки.
|
|
|
7. Капсула – это необязательная структура, ее образование происходит при определенных условиях среды. Патогенные бактерии образуют капсулу внутри организма хозяина (например, пневмококки, бациллы сибирской язвы) и утрачивают это свойство при культивировании на питательных средах. Бактерии кишечно-тифозной группы образуют капсулу при низкой температуре (10-20° С) и при наличии сбраживаемых углеводов.
Для некоторых бактерий образование капсулы является постоянным признаком (группа "капсульных бактерий").
8. Капсулы для бактерий являются полезным образованием. Они предохраняют от повреждений, высыхания, т.к. гидрофильны и хорошо связывают воду. Благодаря своей гидрофильности капсула препятствует фагоцитозу патогенных бактерий в макроорганизме. Образование капсулы – есть признак вирулентности этих бактерий.
Капсулы бактерий не нарушают их обмена веществ, т.к. капсульный слой не препятствует проникновению веществ из внешней среды и обратно.
9. Капсулы выявляются при специальных методах окраски. Для этого используются методы Бурри и Бурри-Гинса, создающие негативное контрастирование вещества капсулы. На край предметного стекла помещают каплю разбавленного водой (1:1) карболового фуксина Циля, в которую вносят петлей исследуемую культуру. Через 2-3 мин. к ней добавляют каплю туши, тщательно перемешивают и готовят препарат "мазка крови". Мазок полностью высушивают на воздухе и микроскопируют в иммерсионной системе. Клетки окрашиваются в красный цвет, капсулы бесцветные, тушь создает темный фон.
|
|
|
ЗАНЯТИЕ № 2. ТЕМА: СТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ (ПРОДОЛЖЕНИЕ). характеристика необязательных структур бактериальной клетки. СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ: МЕТОД ЦИЛЯ-НИЛЬСЕНА, МЕТОД ОЖЕШКИ. ВЫЯВЛЕНИЕ ЖГУТИКОВ.
Дата добавления: 2018-05-09; просмотров: 1156; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!