Задача 5. ОБЪЯСНИТЬ ПОНЯТИЯ ПРОТОПЛАСТЫ, СФЕРОПЛАСТЫ И L-ФОРМЫ.

L-формы получены у многих разнообразных бактерий – палочек, кокков и др. При этом они становятся морфологически неразличимыми, их внешний вид одинаков – шаровидные клетки разной величины, в том числе и проходящие через бактериальные фильтры, осмотически чувствительные, у крупных клеток часто имеются вакуоли.

Нестабильные L-формы сохраняют некоторые элементы клеточной стенки и способны к реверсии в исходный вид. Стабильные L-формы не способны к реверсии.

Задача 6. ОХАРАКТЕРИЗОВАТЬ ПРОСТЫЕ И СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ МИКРООРГАНИЗМОВ.

Для этого надо знать:

1. Изучение микроорганизмов в окрашенном состоянии является наиболее распространенным методом в микробиологии. Этот метод позволяет изучить морфологию микробов (форму клетки, иногда и детали ее структуры), дает возможность найти морфологические различия между ними, а иногда даже точно определить вид микроорганизма (возбудители гонореи, дифтерии, возвратного тифа, сифилиса).

2. Окрашивание микробов – это не простой механический процесс проникновения краски в микробную клетку, а сложный физико-химиче­ский процесс взаимодействия красителя с составными компонентами клетки, поэтому соединение микроба с краской не поддается разрушению или простому вымыванию водой, т.е. в большинстве случаев является весьма стойким.

Различные виды микробов (а в ряде случае и различные части микробной клетки) по-разному реагируют с одними и теми же красителями, что зависит от химического состава клетки, рН сос­тавных частей клетки, от свойств красителя и т.д.

Отношение микробов к красителям называют их тинкториальными свойствами.

3. Для окраски микробов чаще всего используются анилиновые красители. Красители делят на основные, кислые и нейтральные. Это деление определяется способностью краски взаимодействовать с определенными частями клетки (основными или кислыми). Если красящий ион (хромофор) – катион, то краситель обладает основными свойствами; если хромофор – анион, то краситель имеет кислые свойства. К основным красителям относятся генциановый фиолетовый, метиловый фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин (красный цвет). К кислым красителям относятся кислый фуксин (красный), эритрозин, эозин (розовый). К нейтральным – нейтральный красный.

Преимущественно используются основные красители, которые более интенсивно связываются кислыми компонентами клеток. Основными красками хорошо окрашиваются микробные клетки и ядерный хроматин.

Кислые краски окрашивают микробные клетки слабее. Они употребляются для некоторых специальных целей (например, при окраске тканей они окрашивают протоплазму клетки).

4. Анилиновые красители поступают в лабораторию в виде сухих порошков. Из них приготавливают впрок насыщенные спиртовые или феноловые растворы, сами по себе не пригодные для окраски. Из них для окрашивания готовят разведенные водно-спиртовые и водно-феноловые растворы для повседневной практики. Наиболее часто употребляются следующие растворы: карболовый фуксин (фуксин Циля), разведенный фуксин (водный фуксин Пфейффера), щелочной метиленовый синий (синька Леффлера), раствор Люголя, карболовый генциановый фиолетовый (вместо него применяют кусочки фильтровальной бумаги, предварительно пропитанные спиртовым раствором краски и высушенные – бумажки по Синеву). Иногда при окраске используют концентрированные растворы.

5. Применяют прижизненную (витальную) окраску, когда во взвесь микробов вносят 0,001 %-ный раствор метиленового синего или нейтрального красного. Но значительно легче производить исследование, пользуясь убитыми микробами, чем живыми, поэтому чаще производят окраску высушенных и фиксированных препаратов.

6. В лабораторной технике пользуются простыми и сложными методами окраски.

Простые методы – это те, при которых используется какой-либо один краситель. Для простой окраски используется водный фуксин Пфейффера (1-2 мин.) или щелочной метиленовый синий по Леффлеру (3-5 мин.). Простая окраска позволяет быстро и хорошо ознакомиться с общей морфологией микробов, поэтому этот способ применяется в лабораториях наиболее часто.

Сложные методы – это те, при которых на один и тот же препарат воздействуют несколькими разными по химическому составу и цвету красителями, а также могут использоваться протравы и дифференци­рующие вещества. Сложные методы позволяют выявить определенные структуры клеток и дифференцировать один вид микроорганизмов от другого, а также окрасить микробы, не красящиеся простыми методами. К сложным методам относятся следующие: метод Грама, Циля-Нильсе­на, Бурри-Гинса, Нейссера, Ожешки, Романовского-Гимзы.

Мы поможем в написании ваших работ!