Методология и методы исследования.
На правах рукописи
Плотников Игорь Аркадьевич
Биологические и технологические особенности разведения степного (Marmota bobak Müller, 1776) и черношапочного (M. camtschatica Pallas, 1811) сурков
06.02.09 – Звероводство и охотоведение
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени доктора
биологических наук
Киров – 2018
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Всероссийский научно-исследовательский институт охотничьего хозяйства и звероводства имени профессора Б.М. Житкова»
| Научный консультант: | доктор сельскохозяйственных наук, профессор, академик РАН Балакирев Николай Александрович |
| Официальные оппоненты: | Бекетов Сергей Валериевич,доктор биологических наук, Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт пушного звероводства и кролиководства имени В.А. Афанасьева», заведующий отделом звероводства и кролиководства Илюха Виктор Александрович,доктор биологических наук, доцент, Институт биологии – обособленное подразделение Федерального государственного бюджетного учреждения науки Федерального исследовательского центра «Карельский научный центр Российской академии наук», врио директора, г.н.с. лаборатории экологической физиологии животных Якимов Олег Алексеевич, доктор биологических наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана», профессор кафедры технологии производства и переработки сельскохозяйственной продукции |
| Ведущая организация: | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук», г. Новосибирск |
|
|
|
Защита состоится «29» мая 2018 года в «___» часов на заседании диссертационного совета Д 006.024.02 на базе Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Всероссийский научно-исследовательский институт охотничьего хозяйства и звероводства имени профессора Б.М. Житкова» по адресу: 610000, г. Киров, ул. Преображенская, 79, тел./(факс): (8332) 64-72-26, e-mail: vniioz43@mail.ru
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБНУ ВНИИОЗ им. проф. Б.М. Житкова» и на сайте института: http://www.vniioz-kirov.ru
Автореферат разослан «___» апреля 2018 года и размещен на сайтах: http://www.vniioz-kirov.ru и http://www.vak.ed.gov.ru
Ученый секретарь
диссертационного совета,
кандидат биологических наук Соловьев Вячеслав Альбертович
|
|
|
Общая характеристика работы
Актуальность темы исследования. С 80-х годов прошлого столетия интенсивно обсуждается вопрос о введении сурков в зоокультуру. Освоение разведения рода сурков (Marmota) и разработка технологии клеточного содержания различных видов этих зверей обоснованы необходимостью расширения перспективных объектов клеточного звероводства и сохранения исчезающих видов (Машкин В.И., 1982, 1983; Евреинов А.Г., Рымалов И.В., 1986; Бибиков Д.И., 1989; Сыроечковский Е.Е. и др., 1989; Федосеева Г.А., 2012; Балакирев Н.А., Плотников И.А., 2015). Вопрос о важности такой работы поднимался неоднократно и отражен в резолюциях различных научно-производственных форумов и международных совещаний по суркам. В резолюции последнего международного совещания по суркам, которое проходило в ФГБНУ НИИПЗК им. В.А. Афанасьева в марте 2015 года, указано о необходимости признать одним из возможных средств поддержания генетического разнообразия рода Marmota сохранение ex situ различных видов сурков на базе питомников, зоопарков, вивариев и т. п.
От сурков получают различную продукцию: шкурки для пошива верхней одежды, пищевое мясо и субпродукты, жир с целебными свойствами. Вся продукция сурководства пользуется спросом. Единственная ферма в России по массовому клеточному разведению сурков находится в ФГУП «Русский соболь», Пушкинский район, Московская область. Весь получаемый на ферме молодняк сурков раскупают по ценам до 20000 рублей. Потребность в молодняке сурков неуклонно растет (Федосеева, Г.А., 2012; Балакирев Н.А., Плотников И.А., 2015).
|
|
|
Период зимней спячки сурков продолжается 5-8 месяцев. В этот период они не потребляют корм, не пьют, не требуют ухода или вмешательства человека. В период активности основу рациона составляют дешевые растительные корма. Разведение их в искусственных условиях может способствовать как интенсификации хозяйственного использования этих зверей без нанесения ущерба природным популяциям, так и сохранению генофонда уникальных видов и популяций сурков (Бибиков Д.И., 1989; Барабаш Б., Плотников И.А., 2008; Машкин В.И. и др., 2010; Федосеева Г.А., Плотников И.А., 2012).
Степень разработанности темы. Способ "жесткого" массового отбора степных сурков на клеточное содержание в шедах и кормление исключительно гранулированным комбикормом (Рымалов И.В., 1995) практически неприменим для разведения редких видов сурков, по причине их малой численности. К ним относится черношапочный сурок, существенно отличающийся биологией и обладающий шкуркой с более высокими товарными качествами, чем у сурков других видов. До 1940 года заготавливалось от 1,5 до 3 тыс. шкурок черношапочных сурков на Камчатке. С 1951 до 1980 года официальные годовые заготовки составляли десяти сурков, а в 90-е годы единицы (Валенцев А.С., 1997). Даже небольшое антропогенное воздействие отрицательно сказывается на жизнеспособности колоний зверьков, потому запасы вида повсеместно снижаются (Машкин В.И., 2015).
|
|
|
Для того, чтобы успешно разработать систему и способы рационального разведения разных видов сурков в зоопитомниках, для создания промышленной технологии клеточного и полувольного сурководства важно расширить и углубить знания по специфическим биологическим особенностям сурков, решить вопросы адаптации к новым условиям обитания, кормам, которые несвойственны этим зверям в естественной среде. Актуально провести зоогигиеническую и технологическую оценки вариантов летнего содержания, а также помещений с различным клеточным оборудованием для успешного проведения зимней спячки сурков. Нужна разработка и обоснование норм кормления, составление технологичных рационов с учетом переваримости и усвояемости питательных веществ.
Работа выполнена в соответствии с планом ВНИИОЗ им. проф. Б.М. Житкова, утвержденным Центросоюзом СССР, государственным заданием и планом Россельхозакадемии (регистрационный номер НИИОКР 01.9.50 002738 во ВНТЦентре).
Цель и задачи исследования. Цель исследования заключалась в изучении биологических особенностей и адаптационных возможностей степных и черношапочных сурков к среде искусственного обитания для разработки технологических приемов их содержания, разведения и кормления при введении в зоокультуру.
Основные задачи нашей работы:
- рассмотреть и изучить видовые и индивидуальные особенности адаптации диких степных и черношапочных сурков к искусственной среде обитания;
- установить реакцию отловленных в природе сурков на содержание в клеточных условиях, выявить особенности содержания сурков на фермах с загонным содержанием;
- провести зоогигиеническую и технологическую оценку различных вариантов клеток и сооружений для содержания сурков, определить реакцию организма сурков на создаваемые условия зимней спячки;
- изучить особенности размножения сурков в искусственной среде обитания, исследовать половой цикл самок, разработать методику получения генетического материала самцов сурков;
- разработать методику взятия крови от сурков, установить действие условий содержания и кормления при различном физиологическом состоянии зверей на показатели крови;
- исследовать видовые, возрастные и сезонные особенности поедаемости кормов, переваримости питательных веществ рационов, обмена веществ и энергии; на основе балансовых опытов установить биологические потребности сурков в питательных веществах;
- разработать и апробировать кормушки, рационы и способы кормления, изучить влияние различных рационов на рост сурков и качество волосяного покрова;
- определить содержание микро- и макроэлементов в кормах, органах и тканях диких и клеточных сурков, использовать полученные данные для составления сбалансированных и безопасных рационов;
- разработать биологически и зоотехнически обоснованные рекомендации по содержанию, кормлению, разведению сурков в искусственной среде обитания и технологию их разведения в условиях клеточного содержания.
Научная новизна. Впервые в различных климатических условиях центра и востока европейской территории России изучены возможности и видовые особенности адаптации степных и черношапочных сурков к искусственной среде обитания, в том числе к клеточным условиям и содержанию в загонах. Разработаны технологические и зоогигиенические элементы содержания и кормления сурков этих видов. Определено влияние фактов среды на гибернацию сурков и регуляцию её сроков. Разработана методика взятия крови у сурков из медиальной вены сафена в активном состоянии и в период гибернации, изучены морфологические и биохимические показатели крови в зависимости от условий содержания и кормления. Выявлены особенности воспроизводства сурков в искусственной среде обитания. Разработана методика получения генетического материала от самцов сурков. Определены видовые отличия в коэффициентах переваримости питательных веществ, балансе и использовании организмом сухого и органического вещества, протеина, жира, клетчатки, безазотистых экстрактивных и минеральных веществ различных по составу рационов у степных и черношапочных сурков. Установлена потребность этих видов сурков в основных питательных веществах и обменной энергии.
Теоретическая и практическая значимость работы. По материалам исследований разработаны:
1. СЭ 92-2. Проект шеда и технологического оборудования для содержания сурков / Плотников И.А. Киров: ВНИИОЗ, 1992. 33 с.
2. Плотников И.А., Заболотских Ю.С., Газизов В.З. Методические рекомендации по содержанию и разведению различных видов сурков. М.: РАСХН, ВНИИОЗ, 1998. 79 с. (Утверждены Секцией пушного звероводства и кролиководства РАСХН 20.05.98, протокол № 3).
3. Плотников И.А., Евенко О.Е., Беспятых О.Ю. Методика оценки поведения клеточных пушных зверей. Киров: ГНУ ВНИИОЗ, РАСХН, 2006. 23 с. (Утверждена Секцией пушного звероводства и кролиководства Россельхозакадемии 14.02.06, протокол № 1).
4. Технология разведения степного сурка (Marmota bobak) в условиях клеточного содержания / Тинаева Е.А., Федосеева Г.А., Балакирев Н.А., Тинаев Н.И., Федорова О.И., Плотников И.А. Россельхозакадемия, ГНУ НИИПЗК, 2009. 46 с. (Утверждена на Ученом совете ГНУ НИИПЗК 29.09.09, протокол № 9. Одобрена на секции «Пушное звероводство и кролиководство» Отделения зоотехнии Россельхозакадемии 14.10.09, протокол № 4).
На внедрение методических рекомендаций по содержанию и разведению различных видов сурков получен положительный отзыв от госплемзавода «Пушкинский» Московской области (в настоящее время ФГУП «Русский соболь»), где продолжается разведение сурков в клетках. Использование рекомендаций зверохозяйствами, фермерами и звероводами-любителями послужит освоению технологии разведения сурков разных видов и дальнейшему развитию клеточного сурководства.
Разработки по оборудованию для кормления сурков были внедрены и в нутриеводстве с получением Свидетельства РФ на полезную модель № 19446 RU, МКИ 7 А 01 К 5/00. Зарегистрировано в Государственном реестре полезных моделей РФ 10.09.2001 г.
Результаты научных исследований по диссертации используются в учебном процессе при чтении курса лекций и проведении лабораторно-практических занятий, составлении учебно-методических разработок, пособий по дисциплине «Звероводство» в ФГБОУ ВО «Вятская государственная сельскохозяйственная академия».
За разработку новых технологических элементов клеточного сурководства автор награжден золотой медалью «Лауреат ВВЦ» (2004) и дипломом XIII Российской агропромышленной выставки «Золотая осень» (ВВЦ, 2011).
Методология и методы исследования.
Программа подготовки, проведения и анализа результатов исследования основана на естественно-научном подходе. Методологической основой исследования явились труды и разработки признанных в научном сообществе ученых и специалистов в области естествознания. В исследованиях применены методические программы, которые используются в науках: зоология, экология, физиология, морфология, этология, цитология, гистология и др. Использованы методы, апробированные и широко применяемые в кормлении, разведении животных, зоогигиене, биохимии, звероводстве, ветеринарии, вариационной статистике.
Методология исследования определяет целесообразность использования комплексного методического подхода, включающего: изучение особенностей адаптации сурков; обмена, переваримости, баланса и использования организмом питательных веществ; морфометрию животных; морфо-биохимические показатели крови; зоогигиеническую оценку вариантов содержания и кормления; изучение особенностей размножения с целью получения знаний для успешного введения сурков в зоокультуру.
Положения, выносимые на защиту:
1. Видовые и индивидуальные особенности адаптаций диких степных и черношапочных сурков к искусственной среде обитания.
2. Разработка и обоснование технологических решений и зоогигиенических условий, оптимальных для летнего содержания и зимней спячки сурков.
3. Особенности воспроизводства сурков, получение и оценка генетического материала самцов сурков.
4. Видовые отличия в обмене и переваримости веществ, потребности сурков в основных питательных веществах и энергии.
Степень достоверности и апробация результатов. В исследованиях использовались приборы и инструменты, прошедшие метрологическую поверку. Цифровые материалы опытов обработаны методом вариационной статистики (Плохинский Н.А., 1969; Ивантер Э.В., 1979) на персональном компьютере IBM с использованием пакета статистических программ для обработки результатов биологических и медицинских исследований с учетом критерия Стьюдента (Menu 5, Biostatistica, Excel). Вычисляли среднее арифметическое значение, ошибку репрезентативности M±m. Достоверным (статистически значимым) считали результат при р≤0,05. Измеренные и рассчитанные величины даны в соответствии с Международной системой единиц (СИ). В некоторых случаях дублировали их широко применяемыми в нашей стране единицами.
Результаты исследований доложены и обсуждены на: IV всесоюзном совещании по суркам «Биология, экология, охрана и рациональное использование сурков» (Суздаль, 1991); международном (V) совещании по суркам стран СНГ (Гайдары, Украина, 1993), на II международном (VI) совещании по суркам стран СНГ «Сурки Северной Евразии: сохранение биологического разнообразия» (Чебоксары, 1996); III международной конференции по суркам «Сурки Голарктики как фактор биоразнообразия» (Чебоксары, 1997); научно-практической конференции ученых и специалистов АПК (Пермь, 1998); заседаниях Секции пушного звероводства и кролиководства РАСХН (Москва, 1998, 2006); III международном (VII) совещании по суркам стран СНГ «Сурки Палеарктики: биология и управление популяциями» (Бузулук, 1999); научной конференции, посвященной 70-летию Вятской ГСХА (Киров, 2000); международной конференции по этологии (Прага, Чехия, 2002); международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию ВНИИОЗ им. проф. Б.М. Житкова «Современные проблемы природопользования, охотоведения и звероводства» (Киров, 2002); международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию ГНУ НИИПЗК «Проблемы восстановления и дальнейшего развития клеточного пушного звероводства и кролиководства России» (Родники, 2002); VII съезде Териологического общества «Териофауна России и сопредельных территорий» (Москва, 2003); международной конференции «Роль и значение метода искусственного осеменения сельскохозяйственных животных в прогрессе животноводства XX и XXI веков» (ВИЖ, Дубровицы, 2004); VIII международном конгрессе по пушному звероводству (Нидерланды, 2004); III международном симпозиуме «Физиологические основы повышения продуктивности млекопитающих, введенных в зоокультуру» (Петрозаводск, 2005); VIII съезде Териологического общества «Териофауна России и сопредельных территорий» (Москва, 2007); международной научно-практической конференции, посвященной 85-летию ВНИИОЗ им. проф. Б.М. Житкова «Современные проблемы природопользования, охотоведения и звероводства» (Киров, 2007); II международной научно-практической конференции «Вопросы физиологии содержания, кормопроизводства и кормления, селекции сельскохозяйственных животных» (ВГСХА, Киров, 2008); VI международной конференции по суркам (Когне, Италия, 2008); всероссийской конференции, посвященной 100-летию Е.Д. Ильиной «Достижения науки и практики в клеточном звероводстве» (МГАВМиБ, Москва, 2009); XXI съезде Физиологического общества им. И.П. Павлова (Калуга, 2010); международной научно-практической конференции, посвященной 50-летию ВНИИФБиП «Актуальные проблемы физиологии в животноводстве» (Боровск, 2010); III российском форуме «Российским инновациям – российский капитал» (Ижевск, 2010); XI международном совещании по суркам специалистов стран бывшего Советского Союза «Сурки Евразии: экология и практическое значение» (НИИПЗК, Родники, 2015); научно-практической конференции с международным участием «Зоотехническая наука в условиях современных вызовов», посвященной 85-летию Л.К. Эрнста (Вятская ГСХА, Киров, 2015); международной научно-практической конференции, посвященной 95-летию ВНИИОЗ им. проф. Б.М. Житкова «Современные проблемы природопользования, охотоведения и звероводства» (Киров, 2017); заседаниях ученого совета ФГБНУ ВНИИОЗ им. проф. Б.М. Житкова (1989-2017 гг.).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 67 печатных работ, в том числе 17 работ в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК РФ.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 225 страницах и состоит из введения, обзора литературы, материала и методики, результатов исследований, заключения, списка литературы и приложения. Список литературы включает 256 источников, в том числе 65 на иностранных языках. Работа иллюстрирована 31 таблицей и 49 рисунками.
В проведении исследований содействовали и принимали участие акад. РАН, докт. с.-х. наук, проф. Н.А. Балакирев, докт. вет. наук, проф. И.А. Домский, докт. биол. наук Ю.С. Заболотских, докт. с.-х. наук М.М. Мухамедянов, докт. вет. наук, проф. В.З. Газизов, докт. биол. наук Г.А. Федосеева, докт. биол. наук, проф. Н.А. Сунцова, докт. биол. наук О.Ю. Беспятых, канд. хим. наук П.П. Орлов, канд. биол. наук И.Е. Чернова, науч. сотрудник Р.Д. Мамаева. Выдержки из совместных публикаций с ними использованы в диссертации.
Также соавторами работ, выдержки из которых использованы в диссертации, являются: О.Е. Евенко, Е.А. Тинаева, Н.Н. Шевлюк, Е.С. Соломина, О. Щелещук, Н.И. Тинаев, Б. Барабаш, О.И. Федорова, А.А. Поршнев. Всем им выражаю искреннюю благодарность за совместную работу!
Помощь в проведении химического анализа кормов и проб с балансовых опытов оказали сотрудники Кировской областной проектно-изыскательской станции химизации животноводства. В исследовании крови зверьков принимали участие сотрудники отдела ветеринарии ВНИИОЗ им. проф. Б.М. Житкова канд. вет. наук З.Н. Бельтюкова, Н.А. Кононова, в исследованиях химического состава органов и тканей – Н.А. Шулятьева. Проведение и апробация исследований в ГПЗ «Пушкинский» (ФГУП «Русский соболь») стало возможным благодаря содействию акад. РАСХН Е.Е. Сыроечковского, директора ГПЗ «Пушкинский» Е.Н. Казакова, канд. биол. наук И.В. Рымалова, канд. с.-х. наук Т.И. Казаковой. Всем им выражаю свою признательность и благодарность!
Основное содержание работы
Обзор литературы
Первая глава диссертации является обзором литературы по особенностям сурков и состоит из разделов, содержащих сведения об отличительных биологических особенностях видов сурков, о накопленном опыте содержания сурков в неволе, об устройстве нор и факторах влияющих на благополучие спячки, об особенностях питания сурков в природе и кормления в искусственной среде обитания.
Материал и методика
Исследования проводили с 1988 по 2017 гг. в ФГБНУ Всероссийский научно-исследовательский институт охотничьего хозяйства и звероводства имени профессора Б.М. Житкова.
Объекты исследований - сурки степные европейского подвида (Marmota bobak bobak Müller, 1776) и сурки черношапочные камчатского подвида (Marmota camtschatica camtschatica Pallas, 1811).
Основные экспериментальные исследования проведены на биологической станции ФГБНУ ВНИИОЗ им. проф. Б.М. Житкова, в ООО «Зверохозяйство «Вятка» и фермерских хозяйствах Кировской области, в ФГУП «Русский соболь» (бывший зверосовхоз «Пушкинский») Московской области.
На биологическую станцию ВНИИОЗ и в зверохозяйство «Вятка» в 1989 и 1990 годах было завезено 280 степных сурков из Азнакаевского района республики Татарстан и 20 черношапочных сурков из Камчатской области. Для зверосовхоза «Пушкинский» в 1989 году было отловлено 1500 сурков в Ростовской области.
Испытывали четыре варианта помещений для содержания сурков: открытый с продольных сторон двухрядный звероводческий шед, закрытый со всех боковых сторон четырехрядный шед-сарай (оба помещения были реконструированы в соответствии с нашим проектом СЭ 92-2), брусковый сарай с электрическим подогревом и кирпичный виварий с регулируемым микроклиматом, где были установлены клетки для балансовых опытов. Кроме того, часть подопытных зверей размещали в клетках под навесом и на открытой площадке, а другую часть зверей содержали в загонах, где сурки устраивали норы в грунте. При клеточном содержании испытывали разные варианты конструкций домиков и утеплительных материалов при проведении зимней спячки сурков.
Оценку условий содержания сурков проводили методами гигиенических исследований (Минх А.А., 1961; Волков Г.К. и др., 1986). Температуру воздуха в помещениях, домиках и наружную определяли ртутным и электрическим термометром ТПЭВ-1, недельным термографом М-16А. Температуру тела зверей измеряли ртутным термометром ТМ 6 – ректально с выдержкой в течение пяти минут. Относительную влажность воздуха измеряли аспирационным психрометром МВ-4М и недельным гигрографом М-21Н. Освещенность определяли люксметром Ю-116. Скорость движения воздуха измеряли кататермометром и крыльчатым анемометром. Всего проведено около 2700 замеров микроклиматических и физиологических показателей.
Научно-хозяйственный опыт по кормлению проводили и анализировали в соответствии с основами опытного дела в животноводстве (Овсянников А.И., 1976) и методическими указаниями постановки научно-хозяйственных опытов по кормлению пушных зверей (Юдин В.К., 1973; Балакирев Н.А., Юдин В.К., 1994). Общая продолжительность опыта составила 495 дней. Для проведения опыта сформировали три группы по 30 голов годовалого молодняка. Рацион первой группы включал 76 % (по содержанию энергии) гранулированного комбикорма ПК-90-1 + 24 % зеленой массы трав, второй группы - 100 % гранулированного комбикорма ПК-90-1, третьей группы - 76 % гранулированный комбикорм ПК-90-1 + 16 % зеленой массы трав + 8 % овощей.
Балансовые (обменные) опыты проводили с учетом методических указаний по изучению переваримости питательных веществ корма, баланса азота и энергии у пушных зверей (Кладовщиков В.Ф., Самков Ю.А., 1975). Проведено 3 серии балансовых опытов на 12 группах сурков. Химический анализ кормов и экскрементов в балансовых опытах проводили совместно с Кировской областной проектно-изыскательской станцией химизации животноводства по широко распространенным методикам (Петухова Е.А. и др., 1989). Во всех средних пробах определяли: первоначальную и гигроскопическую влагу, азот - методом Кьельдаля, жир - на аппарате Сокслета, золу - сжиганием в муфельной печи, клетчатку - по Геннебергу и Штоману в модификации ЦИНАО, безазотистые экстрактивные вещества - расчетным способом.
При экстерьерной оценке учитывали упитанность, ход линьки, наличие изреженных и безволосых участков, общее качество волосяного покрова. Длину тела измеряли рулеткой от кончика носа до корня хвоста с точностью до 0,5 см. Массу тела сурков (около 5600 замеров) определяли утром перед кормлением с точностью до 10 г на весах РН-10Ц 13У. По результатам взвешиваний рассчитывали абсолютный, среднесуточный и относительный прирост или снижение массы.
Для наблюдения за развитием эстрального цикла (стадиями охоты и овуляции), наряду с оценкой внешнего изменения петли и поведения зверей, использовали метод влагалищных мазков. Мазок брали из бокового свода верхней трети влагалища с помощью ватного тампона на спичке. После фиксации метиловым спиртом мазок окрашивали синькой Лефлера и краской Романовского-Гимза, что улучшало его видимость под микроскопом. По изменению мазка определяли объективные критерии оценки клеточных элементов и соотношение между ними (индекс созревания). Индекс созревания выражает соотношение между базальными, поверхностными и промежуточными клетками. Микроскопию влагалищных мазков проводили с помощью бинокулярной лупы МБС-1 и микроскопа АУ-12 под увеличением окуляра - 7, объективов - 10 и 40. Исследовано около 1200 мазков.
Для гематологических исследований было взято 84 пробы крови. Для взятия крови использовали оригинальную методику. Сурка для получения крови фиксировали в станке за шею при помощи металлической дуги. В полевых условиях сурка помещали в трубу из органического стекла. В области бедра накладывали жгут или пережимали тазовую конечность кольцевым захватом большого и указательного пальцев руки. Место укола выбирали в проксимальной части голени. Кровь брали иглой с копьевидной заточкой из медиальной вены сафены (vena saphena medialis). Во избежание гемолиза свободно вытекающую из иглы кровь собирали в пробирку без использования шприца. По этой методике успешно брали кровь у сурков, как в активном состоянии, так и в период гибернации при температуре тела +7 оС.
Концентрацию гемоглобина определяли гемометром Сали, количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывали в камере Горяева, анализировали лейкограмму (Берестов В.А., 1981). Содержание общего белка в сыворотке крови определяли на рефрактометре РПЛ-3, белковых фракций – нефелометрическим методом по Олли и Маккорди в модификации Карпюка (Карпюк С.А., 1962). Активность щелочной фосфатазы, аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрансферазы, лактатдегидрогеназы, гаммаглютаминтрансферазы исследовали в клинико-диагностической лаборатории Кировской областной больницы на финском биохимическом анализаторе ФП-901 М. Результаты анализировали в соответствии с рекомендациями и нормативными показателями (Берестов В.А. и др., 1986; Берестов В.А., 2005).
Макро- и микро-морфологические особенности брыжеечных лимфатических узлов у степных сурков клеточного содержания исследовали у 18 самок степных сурков в возрасте 1,5 и 8-12 лет. Из стенки кишечника изготовляли препараты по методу Гельмана.
Для гистологических исследований материал заливали в парафин по общепринятой методике, срезы толщиной 4 – 5 микрометров изготовляли на микротоме. Полученные срезы окрашивали метиловым зеленым – пиронином по Унна, а также гематоксилином Гарриса. Подсчет количества клеток осуществляли на микроскопе МБИ-3У42 со специализированной, усовершенствованной сеткой. Использовали методику гистологических исследований, апробированную на клеточных пушных зверях (Сунцова Н.А. 2009).
Для химического анализа после убоя сурков отбирали пробы внутренних органов и тканей: печень, почки, сердце, легкие, мускулатура (мышцы диафрагмы, языка, брюшные, позвоночные, межреберные), костная ткань (бедро, лопатка, ребро), жир подкожный и внутренний, спинной мозг, кожа с волосом. Также были взяты пробы комбикорма, который использовали в кормлении сурков при содержании их в клетках.
Образцы органов и тканей освобождали от примесей и на электронных весах ВЛК 500 определяли массу с точностью до 0,1 г. Далее образцы высушивали до постоянной массы при температуре 65 ºС. Навеску 0,2 - 5,0 г (в зависимости от определяемого элемента) гомогенизированной пробы подвергали сухому озолению при максимальной температуре 450 °С, с использованием в качестве ускорителей минерализации этилового спирта и органических кислот. Процесс минерализации проходил до постоянной массы.
Содержание микро и макроэлементов (медь, марганец, цинк, железо, кобальт, никель, свинец, кадмий, хром, натрий, калий, магний, мышьяк) определяли методом атомно-абсорбционной спектрометрии на спектрофотометре «Спектр 5-3», в эмиссионном и абсорбционном режиме, используя метод добавок. Общее содержание ртути измеряли по ГОСТ 28612-90, используя прибор «Юлия-2», методом «холодного пара», стронций-90 и цезий-137 определяли радиохимическим методом. Аналитические работы и пересчет значений концентрации на натуральное вещество производили по общепринятым методикам.
Дата добавления: 2018-05-12; просмотров: 309; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!