Схема лабораторной диагностики полиомиелита.
Материал исследования: отделяемое носоглотки, испражнения, спинномозговая жидкость, кал.
Методы исследования:
-вирусоскопический, - биологический,
-вирусологический, - серологический.
Вирусологическое исследование:
Готовят 10% взвесь испражнений в физиологическом растворе (0,9%), фильтруют, добавляют антибиотики.
1 день: Заражение нескольких типов клеточно-тканевых культур (выдерживать в термостате при +370С, 1-3 суток). | Заражение однодневных мышат. Наблюдение за их состоянием. При гибели – вскрытие. |
3-7 дни: Доказательства присутствия вируса в заражённых объектах:
Цитопатогенное действие (ЦПД) энтеровирусного типа (округление клеток тканевого пласта). | Изучение патолого-анатомических изменений в органах. |
Дни: Идентификация выделенного вируса эталонными диагностическими сыворотками.
Реакция нейтрализации ЦПД, РИФ с типовыми сыворотками, РСК с культуральной жидкостью | Реакция нейтрализации вируса на мышах с типовыми сыворотками. |
Заключение.
Приложение 7
Дополнение к диагностике полиомиелита в культуре ткани.
I. Для культивирования вирусов полиомиелита чаще используют:
Первично трипсинизированные почки обезьяны,
Первично трипсинизированные клетки почек эмбриона человека.
Перевиваемые культуры клеток Нер-2, Детройт (первые-злокачественные клетки рака гортани человека).
|
|
О размножении вируса в культуре клеток свидетельствуют:
ЦПД энтеровирусного типа (округление клеток).
Отсутствие феномена гемадсорбции (вирусы полиомиелита не имеют антигена-гемагглютиногена),
Отсутствие феномена гемагглютинации с культуральной жидкостью и взвесью эритроцитов,
При прямой люминесцентной микроскопии клеточного пласта, обработанного только флюорохромом, включений вируса ни в протоплазме, ни в ядре обнаружить не удается.
- При иммунофлюоресцентном методе исследования –РИФ – то есть его комплексной обработке иммунной сывороткой с меченными антителами , вирусные включения хорошо видны.
II. цветная проба:
В культуре ткани, не зараженной вирусом, под влиянием продуктов ее метаболизма рН среды меняется в кислую сторону. Поэтому и цвет индикатора (фенолрот) в питательной среде меняется с красного на желтый.
В культуре клеток, зараженных вирусом, клетки гибнут, рН среды практически не меняется, цвет среды остается обычным - красным.
Тип вируса устанавливают по реакции нейтрализации цветной пробы с помощью специфических антител иммунной сыворотки.
|
|
III. метод бляшек.
- Выращивают однослойную культуру клеток.
- Удаляют питательную среду (культуральный субстрат).
- Вносят вируссодержащий материал, встряхивают осторожно.
- Заливают инфицированный монослой клеток расплавленным агаром с индикатором (нейтральным красным), помещают в термостат на 24 – 72 часа.
- Там, где клетки растут, рН над ними изменяется в кислую сторону и среда, т. е. слой агара в этой зоне, становится розовым.
- Тип вируса устанавливают по реакции нейтрализации феномена бляшкообразования путём обработки вирусосодержащего материала специфической иммунной сывороткой.
Приложение 8
Иммунологические методы диагностики:
Раннее применение иммунологической диагностики используют для идентификации выделенных от больного вирусов с помощью известных специфических противовирусных иммунных сывороток. По сути все эти реакции демонстрируют разные варианты биологической нейтрализации действия вирусов:
Соединив вирусосодержащий материал с иммунной сывороткой, помещают взвесь в термостат при температуре +4,+18,+370С (в зависимости от вида вируса) на 1 час. Предполагаем, что антитела при этом взаимодействуют с вирионами и лишают их инфекционности;
|
|
Далее эту смесь можно ввести чувствительным животным и не наблюдать симптомов, присущих активности данного возбудителя, в связи с его нейтрализацией антителами;
Её можно ввести в культуру ткани и наблюдать феномен подавления ЦПД, цветной пробы, бляшкообразования. На том же основании эту смесь можно ввести в развивающиеся куриные эмбрионы (если изучаемый вирус способен развиваться в них) не причиняя им при этом вреда. На этом же основании поиск вирусного антигена в организме больного или вирусоносителя.
II. Методы поздней и ретроспективной диагностики – основан на поиске антител в сыворотках крови больных и переболевших. Они выполняются с помощью эталонных вирусных диагностикумов. При этом можно использовать разные реакции.
-РСК с парными сыворотками по общим правилам, с учётом нарастания их титра и интенсивности.
Реакцию иммунодиффузии (РИД) – взаимодействие (с предполагаемыми антителами) сыворотки крови больного и антигена (известного, приготовленного на биофабрике) наблюдают в полужидкой агарозной среде и оценивают по появлению линий преципитации.
Различные варианты реакций иммунобиологической нейтрализации (см. выше).
|
|
Иммуноферментный метод и многие другие.
Приложение 9.
Этапы патогенеза прионных инфекций:
На нормальных нейронах экспрессируется клеточный гомолог PrP, по своим свойствам мало отличающийся от инфекционной формы. Он содержит резистентную к протеазам сердцевину, гомологичную инфекционному прионозу (PrPsc).
PrPsc локализуется внутриклеточно, полимеризуясь в амилоидные полочковидные структуры. Внутриклеточная локализация прионов и резистентность его к действию протеаз обуславливает отсутствие у него иммуногенных свойств.
Проникновение инфекционного агента в клетку изменяет ход структуры PrP и приводит к развитию дегенеративных процессов в нейроне.
Клиническиприонные инфекции протекают по типу спонгиоформных энцефалопатий с постепенным расстройством рефлексов с конечностей, гипотонией, нарушением глотания и деменцией. Процесс медленно прогрессирует и заканчивается гибелью пациента. Поэтому прионозы называются медленными инфекциями.
В группу возбудителей медленных (неконвенционных) инфекций включены агенты, способные вызвать развитие подострых, но прогрессирующих поражений ЦНС. Среди болезней человека наиболее изучены Куру, болезнь Крайтцефельда-Якоба, синдром Рерсимана-Страуселера-Шайкера, амнотрофическийлейкоспондгиоз, спогиоформная энцефалопатия крупного рогатого скота. Особенность этих заболеваний – практически полное отсутствие значимых иммунных реакций. Гистологически в тканях мозга выявляют амилоидные скопления, генерализованную гипертрофию астроцитов и выраженную губчатую дегенерацию.
Дата добавления: 2018-05-02; просмотров: 417; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!