Общая схема лабораторной диагностики клещевого и комариного энцефалитов.
Материал: кровь, спинномозговая жидкость, секционный материал (мозг).
I. Овокультура– заражение куриных эмбрионов:
8-9-дневных - в желудочный мешок;
10-12-дневных - на хорионаллантоисную оболочку;
инкубация 72 часа при +370 С.
II. Биопроба на мышах – сочетанное заражение белых мышей 0,03 мл в мозг и 0,25 мл внутрибрюшинно:
визуальный контроль за состоянием животных;
смерть животных;
вскрытие, вирусоскопия.
III. Заражение культуры клеток:
почек эмбриона (ПЭ);
фибробластов куриных эмбрионов (КЭ);
почек свиньи СПЭВ;
почек сирийского хомяка (ВНК);
контроль ЦПЭ, цветной пробы, их нейтрализации.
внутриклеточные включения.
IV. Идентификация выделенного вируса: ПЦР, ИФА, РИФ, РНИФ, а также
4.1 Положительная реакция гемагглютинации (РГА) с алантоисной жидкостью – индикатор наличия вируса.
4.2 Ежедневное наблюдение за животными в положительных случаях отмечает:
повышение чувствительности к внешним раздражителям;
параличи, конвульсии;
часто уже в первые сутки животные гибнут.
4.3 Активно размножающиеся вирусы стимулируют продукцию интерферона, препятствующего развитию ЦПД. При его отсутствии:
иногда на 4-6 день появляется круглоклеточная дегенерация (ЦПД)
положительная РГА с культуральной жидкостью
положительная РИФ (через 24 – 48 часов).
4.4 Используя типоспецифические эталонные иммунные сыворотки, можно поставить РТГА.
4.5 Можно поставить с вирусным антигеном-взвесью из мозга зараженных мышей и известной иммунной сывороткой;
|
|
|
РТГА;
РСК, РТСК;
Реакция нейтрализации (на мышах, в культуре клеток).
4.6 С культуральной жидкостью и иммунными сыворотками выполняют:
РТГА;
РСК, РТСК;
Реакция нейтрализации (на мышах, в культуре клеток).
V. Для ретроспективной диагностики используют эталонные антигены, которые готовят из мозга мышей (лучше новорожденных), зараженных вирусом энцефалита интрацеребрально. Музейные штаммы вирусов сохраняют в замороженном виде, а перед изготовлением антигена проводят в 1-2 пассажа на мышах. С указанным препаратом и сыворотками больных, реконвалесцентов выполняют РСК, РНГА, РТГА.
VI. диагностика клещевого энцефалита (переносчик):
- вначале изучают клеща на наличие в нем вируса- используется ПЦР или ИФА в модификации поиска антигена вируса,
- в конце первой недели инфицирования в организме появляются иммуноглобулины класса М, позже – иммуноглобулины класса G. Методом ИФА определяют наличие антител, что говорит о развитии заболевания у инфицированного.
Приложение 5
Схема лабораторной диагностики бешенства.
Прижизненных методов диагностики бешенства у человека и животных, кроме клинического и опосредованного эпидемиологического, пока нет.
|
|
|
Материал для посмертного исследования:
Головной мозг (срезы, эмульсия ) погибших больных и животных, покусавших или ослюнивших человека;
подчелюстные, слюнные железы, слюна;
спинно–мозговая жидкость.
Методы исследования:
Вирусоскопия:
1) - Мазки отпечатки из мозга (аммонов рог, мозжечок);
- Гистологические срезы мозга головы;
2) – Оба препарата окрасить по Туревичу;
3) – Мазок из эмульсии загнивающего мозга окрашивают по Муромцеву;
4) – Мазок- отпечаток, обработанный ФИТЦ-антителами (антирабический лошадиный гамма- глобулин с изотиционатом-флюоресцеином);
5) - Микроскопия в МЛ-1, МЛ-2.x 90, x10, x40, х7.
6) – Обнаружение телец Бабеш-Негри (красные), Муромцева (фиолетовые).
Вирусологические исследования:
1) – Внутримозговое заражение белых мышей (8-12 г веса).
2) – При наличии вируса мыши гибнут через 7-9 дней.
3) – Присутствие вируса у мышей подтверждают:
- Обнаружение телец Бабеша-Негри в мазках-отпечатках и срезах головного мозга;
- При иммуно-флюоресцентной обработке мазков-отпечатков ФИТЦ-препаратом;
- При постановке реакции нейтрализации: взвесь мозга погибших мышей соединяют с иммунной антирабической сывороткой на 1 час, а затем вводят в мозг новой партии мышей. Они должны остаться живыми;
|
|
|
4) Воспроизведение внутриклеточных телец Гварнери на роговице кроликов. Окраска по Романовскому-Гимзе.
Методы окраски мазков из разного материала.
I. Гистологические срезы мозга свежего трупа и окраска их по Туревичу.
1. Железистый гемазоксименВейгерта – 1-2 мин.
2. Смыть водой.
3. 1% водный раствор
4. Насыщенный водный раствор пикриновой кислоты с этанолом (1:1) – 10-20 мин.
Фиксация препаратов – в жидком фиксаторе.
Под микроскопом в нервных клетках – красные тельца Бабиш-Негри.
II. Мазки из эмульсии загнивающего мозга трупа и окраска их по
Муромцеву.
Гистологическая структура мозга нарушена. Готовят взвесь из ткани, а затем мазки. Фиксируют в жидком фиксаторе, затем красят.
1. Синька Мансона (метилен. синька – 2 г, бура – 3 г, дистиллированная вода – 100 мл) – 10 мин.
2. 10% водный раствор до появления голубого цвета.
3. Смыть водой.
Под микроскопом вишнёво-фиолетовые тельца на синем фоне.
Приложение 6
Дата добавления: 2018-05-02; просмотров: 209; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!