Определение количества сперматозоидов в 1 мл и во всем эякуляте

Подсчет обездвиженных сперматозоидов осуществляется в камере Горяева.

Реактивы для обездвиживания сперматозоидов.

1. 1,0 мл 40% нейтрального формалина и 100 мл дистиллированной воды.

2. 1,0 мл формалина, 5,0 г бикарбоната натрия, вода до 100 мл.

3. Жидкость Рубенкова: 0,1 г основного фуксина, 0,02 мл краски Романовского, 0,2 мл концентрированной карболовой кислоты, 0,1 мл глицерина, 2 мл 96° этанола, 100 мл 9 г/л хлорида натрия. Эта жидкость окрашивает сперматозоиды, что позволяет наряду с подсчетом общего количества сперматозоидов изучить их морфологию.

Эякулят после перемешивания разводят в 20 раз раствором для обездвиживания сперматозоидов в пробирке. Сперму набирают в пипетку от гемометра Сали до метки и вводят в 0,4 мл разводящей жидкости. Тщательно перемешивают и заполняют заранее подготовленную счетную камеру Горяева так же, как для подсчета форменных элементов крови. Через несколько минут производят подсчет сперматозоидов в пяти больших разграфленных квадратах, расположенных по диагонали при увеличении: окуляр 7, объектив 40 с опущенным конденсором. Подсчитывают только те сперматозоиды, головки которых лежат внутри квадратов. Полученное число умножают на 10⁶, в результате получают количество сперматозоидов в 1 мл эякулята, а затем умножают на объем эякулята и получают общее количество сперматозоидов. В норме в 1 мл спермы содержится 60—120 х 10^бсперматозоидов, во всем эякуляте количество сперматозоидов превышает 120 х 10⁶, в среднем 150—450 х 10⁶.

Определение числа неподвижных сперматозоидов в счетной камере

Сперма разводится теплым изотоническим раствором хлорида натрия в 20 раз. Заполняют камеру Горяева и подсчитывают количество неподвижных сперматозоидов так же, как описано выше. Расчет процентного содержания неподвижных сперматозоидов производят следующим образом, исходя из пропорции: „ а х 100

X = _______ ,где а — количество неподвижных сперматозоидов,

б — общее количество сперматозоидов. Результат выражают в процентах.

Пример. Содержание сперматозоидов в 1 мл равно 80 х 10⁶, из них неподвижных 16 х 10⁶. Отсюда количество неподвижных , 16x100

форм X = _______ =20%

У здоровых людей неподвижные спер- 80

матозоиды составляют 10—20%.

Кинезисграмма — это процентное соотношение сперматозоидов с различной подвижностью. Количество подвижных сперматозоидов является главным критерием при оценке их полноценности. Активноподвижные сперматозоиды обладают быстрым поступательным целесообразным вращательным движением с перемещением в поле зрения. Малоподвижные сперматозоиды двигаются медленно, совершая колебательное, манежное движение или подергивание на месте. Исследование проводят с использованием «окошечка Фонио» для ограничения поля зрения. Исследование проводят при температуре 20—25 °С. На сухое предметное стекло наносят каплю перемешанного эякулята, покрывают покровным стеклом, избегая попадания пузырьков воздуха. Подсчитывают в нескольких полях зрения не менее 100 клеток, отмечая количество активноподвижных, малоподвижных и неподвижных. Рассчитывают процентное соотношение сперматозоидов с различной подвижностью.

Для общей визуальной оценки можно использовать шкалу в баллах: 4 — активная подвижность (все сперматозоиды обладают прямолинейной подвижностью со значительной скоростью), 3 — хорошая подвижность (большинство сперматозоидов обладает прямолинейной подвижностью, но она несколько снижена), 2 — посредственная подвижность (небольшое количество двигается поступательно), 1 — плохая подвижность (поступательное движение сперматозоидов отсутствует), 0 — полное отсутствие движения сперматозоидов. Определение мертвых и живых сперматозоидов: окрашивание по Блуму. На предметное стекло наносят каплю спермы, рядом две капли водного раствора кислого (50 г/л) эозина, капли смешивают, через несколько секунд добавляют каплю водного раствора нигрозина (100 г/л), перемешивают и через несколько секунд делают тонкий мазок при помощи шлифованного стекла. Мазок высушивают и исследуют с помощью иммерсионного объектива. Подсчитывают не менее 200 клеток, выделяя отдельно живые и мертвые сперматозоиды. Мертвые сперматозоиды окрашены в красно-фиолетовый цвет, живые — бесцветные. Можно окрашивать одним эозином без нигрозина, однако при окраске с нигрозином сперматозоиды выглядят более контрастно. В нормальном эякуляте живые сперматозоиды составляют 90—95% от общего количества.

МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ОКРАШЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

(Окраска по Паппенгейму)

На мазок наносят раствор краски-фиксатора Май — Грюнвальда на 3 мин. Затем препарат ополаскивают водой и заливают на 5—10 мин рабочим раствором краски Романовского, который готовят перед употреблением из расчета 1 капля краски Романовского на 1 мл дистиллированной воды. Препарат промывают проточной водой, высушивают и исследуют с использованием иммерсионной системы. Время окраски может быть изменено в зависимости от качества красителя.

В окрашенном препарате подсчитывают не менее 200 сперматозоидов и выражают в процентах количество нормальных и патологических форм, количество клеток сперматогенеза. Молодые или незрелые формы сперматозоидов имеют вокруг головки и шейки остаток цитоплазмы («воротничок» или «капюшон»), наблюдаются при частых половых сношениях и неспособны к оплодотворению. В норме составляют не более 2%.

Старые формы сперматозоидов с гиперхромией, ахромией, вакуолизацией головки появляются в семенной жидкости после продолжительного полового воздержания и непригодны для оплодотворения. В нормальном эякуляте их не более 4%.

К патологическим формам относят сперматозоиды: макро-, микро-, конические головки, клювовидные, двуглавые с одной шейкой и хвостом, с раздвоенными головками, без шейки, с утолщенной, изогнутой шейкой, с несколькими хвостами, без акросомы или без ядра и др. У здоровых мужчин с нормальной спермой патологические формы сперматозоидов обычно не встречаются, но их количество при нормоспермии может достигать не более 20%. Среди патологических форм нормального эякулята 10—15% приходитс на патологию головки, 2—5% — тела, 2—9% — хвоста. При секреторной форме бесплодия выявляются сперматозоиды с патологией головки и тела. Патология хвоста обычно экскреторного происхождения возникает при прохождении сперматозоида по семявыносящим путям.

Клетки сперматогенеза в нормальной сперме составляют 0,5—2% по отношению к количеству сперматозоидов. Сперматогонии в норме не обнаруживаются, встречаются обычно сперматиды. При бесплодии секреторного типа процент их значительно повышается, появляются более молодые клетки сперматогенеза. Микроскопическое исследование спермы выявляет следующие состояния: аспермия — отсутствие в сперме сперматозоидов и клеток сперматогенеза; азооспермия — отсутствие сперматозоидов при наличии клеток сперматогенеза; астеноспермия — характеризуется снижением процента активноподвиж- ных сперматозоидов; олигозооспермия — уменьшение количества сперматозоидов в 1 мл эякулята; тератоспермия — увеличение процента патологических форм сперматозоидов; некроспермия — увеличение количества мертвых сперматозоидов; акинезис — состояние, при котором неподвижные сперматозоиды после «оживления» начинают двигаться.

ИССЛЕДОВАНИЕ СЕКРЕТА ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Предстательная железа расположена у места выхода мочеиспускательного канала из мочевого пузыря между лонным сочленением и прямой кишкой. Она состоит из 30—50 трубчато-альвеолярных железок. Выводные протоки простаты открываются в мочеиспускательный канал на перекрестке мочевыделительного и семявыносящего трактов, поэтому предстательная железа легко вовлекается в воспалительные процессы.

Основной функцией предстательной железы является выработка секрета, необходимого для поддержания жизнедеятельности сперматозоидов после эякуляции. У мужчин зрелого возраста простата продуцирует за сутки от 0,1 до 3 мл секрета. Отделяемое простаты получают путем массажа железы после 4—5-дневного полового воздержания, после предварительного мочеиспускания, которое предупреждает присоединение к секрету простаты отделяемого уретры.

Можно исследовать осадок мочи, полученной после массажа простаты, так как часто секрет затекает в мочевой пузырь.

Нормальный секрет предстательной железы — это густая вязкая мутная жидкость со специфическим запахом цветов каштана, обусловленным спермином. Химический состав секрета простаты весьма сложен. Реакция его слабощелочная (рН = 7,6—8,4).

Приготовление препаратов. Полученный секрет предварительно просматривают в нативном препарате, для чего каплю жидкости помещают на предметное стекло и покрывают покровным. Мочу, полученную после массажа простаты с целью исследования на элементы секрета простаты, центрифугируют, препараты готовят из осадка. По необходимости готовят мазки и окрашивают их по Романовскому, метиленовым синим, по Граму и др.

Микроскопическое исследование. В нативном препарате в норме выявляется от 0 до 10 лейкоцитов в поле зрения. Количество их увеличивается при воспалительных процессах. Однако есть указания, что на их увеличение влияет ряд факторов (техника массажа, примесь содержимого уретры, сексуальная активность и др.), что нужно учитывать при оценке количества лейкоцитов.

Эритроциты в нормальном секрете единичные, попадают при энергичном массаже предстательной железы. Увеличение количества эритроцитов наблюдается при воспалительных процессах, новообразованиях.

Эпителиальные клетки в норме встречаются редко. Выводные протоки предстательной железы выстланы цилиндрическим и частично переходным эпителием. Десквамация эпителия резко увеличивается при воспалительных процессах и опухолях. Эпителиоциты имеют вид круглых клеток с признаками жировой дистрофии, встречаются вместе с лейкоцитами.

Амилоидные конкременты (тельца) представляют собой сгущенный секрет железы, имеют овальную или округлую форду, слоистое строение, желтоватого цвета с концентрической исчерченностью. Наличие их указывает на застой секрета в железе, что может иметь место при хронических воспалительных процессах, аденомах, гипертрофии предстательной железы у лиц пожилого возраста.

Липоидные тельца (лецитиновые зерна) — мелкие белесоватые преломляющие свет образования, специфический продукт секреции эпителия предстательной железы. Они придают секрету молочный вид. В нормальном секрете находятся в большом количестве. Уменьшение их количества наблюдается при простатитах. При злокачественных опухолях число их резко уменьшается вплоть до полного исчезновения.

Кристаллы Бетхера напоминают по форме кристаллы Шарко — Лейдена. Окрашиваются в синий цвет при добавлении раствора Люголя. Появляются в секрете при простаторее.

При аденоме предстательной железы наблюдается ретенционный синдром (застой). В застоявшемся секрете выявляются макрофаги, многоядерные клетки типа инородных тел и амилоидные тельца, кристаллы холестерина.

При распаде опухоли простаты можно обнаружить элементы злокачественного новообразования, которые дифференцируются по характерным морфологическим признакам злокачественности. Клетки чаще встречаются в виде комплексов. Исследуются препараты, окрашенные по Романовскому.

Дата добавления: 2018-05-02; просмотров: 1059; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 1 234 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!