Обнаружение влагалищных трихомонад в нативном материале.
Лекция №33 Нормальная микробная флора влагалища: виды, морфология, причины ее изменения. Бактериальный вагиноз: лабораторная диагностика.
Гонорея
Гонорея Neisseria gonorrhoeae — инфекционное заболевание с преимущественным поражением слизистых оболочек мочеполовых органов. Наиболее часто гонококки поражают органы, выстланные цилиндрическим эпителием (уретра, цервикальный канал, конъюнктива глаза и др.). Гонококки, попадая на цилиндрический эпителий, быстро проникают в подслизистую ткань и вызывают воспалительную реакцию. При длительном течении воспалительный инфильтрат постепенно замещается соединительной тканью. В дальнейшем, при отсутствии лечения, возможно рубцевание с последующим нарушением функции органов (рубцовые сужения уретры и др.). Без лечения гонорея переходит за внутренний зев, при этом поражаются эндометрий, придатки матки.
Наиболее распространенным, но менее чувствительным методом лабораторной диагностики гонореи является бактериоскопическое исследование, особенно при хронической торпидно протекающей гонорее. Однако при правильном заборе материала, квалифицированном изучении препаратов, использовании провокации возможно успешное выявление гонококков.
При подозрении на гонококковую инфекцию у мужчин исследуют отделяемое мочеиспускательного канала, которое берут до мочеиспускания, парауретральных ходов, промывные воды прямой кишки, секрет предстательной железы, мазки из ротоглотки (по показаниям).
|
|
|
У женщин материал берут из уретры, цервикального канала, после протирания его ватным тампоном, парауретральных ходов, бартолиниевых желез, прямой кишки, по показаниям из ротоглотки. Лабораторная диагностика гонореи ротоглотки возможна лишь при посеве и выделении чистой культуры на питательных средах.
Из каждого очага берут по 2 препарата: один окрашивают 10 г/л водным раствором метиленового синего для ориентировочной микроскопии; другой препарат окрашивают по Граму.
Обнаружение гонококков в исследуемом материале, окрашенном метиленовым синим
Реактивы.
1. Водный раствор метиленового синего (10 г/л): 1 г метиленового синего растворяют в 100 мл дистиллированной воды, фильтруют через бумажный фильтр.
2. 96° этиловый спирт.
Ход определения. Материал наносят на стекло равномерным слоем и высушивают на воздухе. Препарат фиксируют 3 мин в 96° этиловом спирте, высушивают, затем наносят на него раствор метиленового синего на 1 мин, тщательно смывают оставшийся краситель под струей холодной воды, высушивают в штативе.
Микроскопическое исследование проводят под микроскопом с естественным или искусственным освещением: объектив 90 иммерсионный, окуляр 7 или 10. Ядра клеток окрашены в синий цвет, цитоплазма — в голубой цвет разной интенсивности, до бесцветной. Бактериальная флора окрашивается в синий цвет разной интенсивности. Диплококки (гонококки) темно-синего цвета, резко очерчены, бобовидной формы, сложены попарно вогнутыми сторонами друг к другу; располагаются внутриклеточно, в слизи и на эпителиальных клетках.
|
|
|
Обнаружение гонококков в исследуемом материале, окрашенном по модифицированному способу Грама
Принцип. Метод основан на свойстве гонококков и других грамотрицательных микроорганизмов при обесцвечивании их в этиловом спирте отдавать основной фиолетовый краситель и докрашиваться в дальнейшем дополнительным оранжево-красным.
Реактивы.
1. Водный раствор кристаллвиолета (10 г/л): 1 г кристалл - виолета растворяют в 100 мл кипящей дистиллированной воды, раствор фильтруют в горячем виде через бумажный фильтр.
2. Водный раствор Люголя: 2 г йодида калия растворяют в 300 мл дистиллированной воды, в полученном растворе растворяют 1 г чистого йода, фильтруют через бумажный фильтр.
3. 96° этиловый спирт.
4. Водный раствор нейтрального красного (10 г/л): 1 г нейтрального красного растворяют в 100 мл дистиллированной воды и фильтруют через бумажный фильтр.
|
|
|
Ход определения. Препарат покрывают полоской фильтровальной бумаги и заливают водным раствором кристаллвиолета на 1 мин. Следят, чтобы между фильтровальной бумагой и стеклом не было пузырьков воздуха, их удаляют, придавливая полоску бумаги стеклянной палочкой или пипеткой. Через 1 мин бумагу снимают, препарат промывают водопроводной водой и заливают раствором Люголя, который выдерживают в течение нескольких секунд до почернения мазка. Затем остаток раствора Люголя смывают и приступают к обесцвечиванию препарата в 96° этиловом спирте. Обесцвечивание проводят под визуальным контролем, поочередно погружая и вынимая препарат из спирта, находящегося в стаканчике. Обесцвечивают препарат до тех пор, пока фиолетовые струйки красителя, стекающие с его тонких участков, не станут бледно-серого цвета. Препарат быстро промывают под струей водопроводной воды, а затем докрашивают в течение 3 мин водным раствором нейтрального красного. Препарат тщательно промывают, пока струя воды, стекающая с него, не станет прозрачной, высушивают.
При правильной окраске препарат оранжево-красного цвета на тонких участках, лилово-фиолетового на толстых. Ядра клеточных элементов (лейкоцитов, эпителиальных клеток) должны частично удерживать основную фиолетовую окраску, т. е. в центре они должны быть окрашены в фиолетовый цвет, по периферии в оранжево-красный, а гонококки, расположенные в лейкоцитах и на эпителиальных клетках, будут оранжево-красные. Хорошее качество окраски обеспечивается своевременным прекращением обесцвечивания препарата.
|
|
|
При недообесцвечивании, когда ядра клеток интенсивно окрашены в фиолетовый цвет, гонококки могут сохранять фиолетовую окраску. В переобесцвеченных препаратах стафилококки и стрептококки могут быть окрашены в оранжево-красный цвет и приняты за гонококки.
При бактериоскопическом исследовании идентификация гонококков производится на основании их морфологии, расположения и отношения к окраске по способу Грама. Гонококк — это парный кокк, по форме имею- щий сходство с кофейными зернами, сложенными вогнутыми сторонами друг к другу. Длина его 1,8 мкм, ширина 0,7—0,8 мкм, между половинками диплококка имеется щель, равная половине одного кокка. Размножаясь делением в разных плоскостях, гонококки не образуют цепочки. При нахождении гонококка внутри лейкоцита характерно их расположение парами или группами под углом друг к другу. Часто гонококки лежат на клетках плоского эпителия рядами, располагаясь перпендикулярно друг другу внутри ряда. Частота внутри- и внеклеточного расположения гонококков зависит от периода заболевания, активности фагоцитоза, от методики взятия материала. При идентификации гонококка необходимо учитывать все три его основных признака. Положительный ответ нужно давать при обнаружении только типичных форм гонококков. Следует учитывать, что при приеме антибиотиков и сульфаниламидов гонококки могут становиться грамположительными, приобретать округлую или неправильную форму, неравномерную величину.
При хронически текущей, леченной гонорее, при подтверждении гонорейного процесса у детей и женщин в менопаузе, при установлении излеченности гонореи используется культуральный метод диагностики.
Трихомониаз
Трихомониаз — инфекционное заболевание, вызываемое влагалищной трихомонадой. Трихомонада Trichomonas vaginalis — простейшее грушевидной или овальной формы величиной от 8—11 до 18—20 мкм, содержит овальное ядро, четыре жгутика, ундулирующую мембрану. Осевой стержень (аксостиль) проходит через все тело, выступая на заднем конце в виде шипа. Размножается в основном путем продольного деления. Питается преимущественно путем осмоса, иногда фагоцитоза. Паразитирует чаще во влагалище, может поражать мочеиспускательный канал, мочевой пузырь и прямую кишку. Клинически заболевание проявляется кольпитом, уретритом, вульвовагинитом.
Наиболее распространенным методом выявления трихомонад является микроскопия нативных и окрашенных мазков. Материал для исследования берут из очага поражения, чаще из заднего свода влагалища.
Обнаружение влагалищных трихомонад в нативном материале.
Принцип. Возбудителя обнаруживают по его характерному движению среди клеточных элементов в препарате, приготовленном сразу после взятия материала.
Реактив. Изотонический раствор хлорида натрия: 0,9 г хлорида натрия растворяют в 100 мл дистиллированной воды.
Ход определения. На предметное стекло наносят каплю теплого изотонического раствора хлорида натрия и добавляют исследуемое отделяемое из очага заболевания. Взвесь накрывают покровным стеклом и микроскопируют (объектив 40, окуляр 7 или 10) (препараты исследуют по методу “раздавленной” или “висячей” капли). Исследование проводят немедленно после приготовления препарата. Влагалищная трихомонада имеет грушевидную, округлую или овальную форму тела, величину немного больше лейкоцита, обладает характерным толчкообразным движением ундулирующей мембраны и жгутиков. К ошибкам может привести наличие в препарате подвижных бактерий, которые, прикрепляясь к лейкоцитам, создают впечатление подвижных трихомонад. При длительном пребывании при комнатной температуре трихомонады довольно быстро теряют свою подвижность, поэтому метод исследования окрашенных препаратов является более точным и удобным.
Дата добавления: 2018-05-02; просмотров: 607; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!