Микроскоп и правила работы с ним
Nbsp;
Рабочая тетрадь
По дисциплине «Цитология и гистология», разделу «Цитология»
Студента Северо-Казахстанского Государственного Университета им. М. Козыбаева
Факультет естественных и сельскохозяйственных наук
Специальности 5В011300 «Биология»
_____________________________________________________________
(ФИО)
Инструкции к выполнению рисунков
Гистологический рисунок – необходимый и основной этап изучения препарата.
Зарисовка препарата имеет исключительно важное значение в процессе его изучения: при зарисовке студент более внимательно рассматривает препарат и обращает внимание на детали, подчас очень важные, но которые могут остаться незамеченными при одном только просмотре препарата.
Процесс зарисовки учит студента «читать» препарат, понимать своеобразие и общность различных клеток и тканей, глубже осмысливать их морфологические, генетические и функциональные особенности. Наконец, препарат лучше запоминается, закрепляется его значительное представление. Зарисовку надо проводить непосредственно с самого препарата, сразу в тетрадь без черновика. Нельзя при этом пользоваться готовыми рисунками и таблицами: их механическое копирование с атласа, практикума или учебника полностью исключает дидактическое значение процесса воспроизведения препарата на бумаге. В рисунке необходимо отразить по возможности правдиво то, что наблюдается.
|
|
|
Изучение любого гистологического препарата обязательно нужно начать с малого увеличения, при котором легче рассмотреть весь срез и выбрать в нём такие места, где видны типичные детали. Лучше сделать рисунок при большом увеличении.
На лабораторном занятии каждый студент должен иметь с собой:
· Простой карандаш (остро заточенный);
· Набор цветных карандашей (12 цветов);
· Ластик;
· Точилку;
· Марлевые салфетки или носовой платок
· Халат
Список сокращений
Г. – окраска гематоксилином
Г.-Э. – окраска гематоксилином-эозином
Ж.Г. – окраска железным гематоксилином
Г.-П. – окраска гематоксилином – пикрофуксином.
Рекомендуемая литература:
Учебники:
1.Соколов В.И., Чумасов Е.И. Цитология, гистология, эмбриология. – М.: «КолосС», 2004
2.Антипчук Ю.П. Гистология с основами эмбриологии. - М.: «Просвещение», 1983 г.
3.Мануилова Н.А. Гистология с основами эмбриологии. - М.: «Просещение», 1964 г.
4.Ченцов Ю.С. Общая цитология. - М.: МГУ, 1978 г.
5.Трошин А.С., Браун А.Д., Вахтин Ю.Б., Жинкин Л.Н., Суханова К.М. Цитология. Учебник для педагогических институтов. – М.: «Просвещение», 1970
Методические руководства:
1.Андрес А.Г. Пособие для практических занятий по гистологии и общей эмбриологии. – М.: «Просвещение», 1969
|
|
|
2.Новиков А.И., Святенко Е.С. Руководство к лабораторным занятиям по гистологии с основами эмбриологии. – М.: «Просвещение», 1984
3.Кожевникова Л.Н., Пашкова Е.И. Руководство к практическим занятиям по цитологии и гистологии. – Петропавловск, 2005
Атласы
1.Фалин Л.И. Атлас микрофотографий по нормальной гистологии и эмбриологии. - М.: «Медгиз», 1957
2.Елисеев В.Г., Афанасьев Ю.И., Котовский Е.Ф. Атлас микроскопического строения тканей и органов. М.: «Медгиз», 1961
1.Ролан Ж.К., Селоши А., Селоши Д. Атлас по биологии клетки. - М.: Мир, 1978 г.
Лабораторная работа №1
Тема: Общее представление о гистологической технике. Микроскоп. Правила работы с ним.
Цель:Познакомиться с основами гистологической техники, повторить правила работы с микроскопом.
Материалы и оборудование: микроскопы, готовые гистологические микропрепараты.
Содержание:
1.Познакомиться с основными этапами изготовления гистологического препарата.
2.Изучить устройство светового микроскопа.
3.Повторить правила работы с микроскопом.
4.Ответить на контрольные вопросы.
Основным объектом исследования в гистологии является гистологический препарат, поэтому целесообразно иметь представление о его изготовлении. За отведенное время можно познакомиться только с общими принципами и основными методами изготовления препарата, хотя этот вопрос, безусловно, заслуживает большего внимания. Мы рассмотрим только технику изготовления гистологических препаратов из фиксированных (мертвых) тканей и органов.
|
|
|
Гистологические препараты представляют собой срезы (толщиной от 5 до 10 мкм) органов, окрашенные (контрастированные) специальными красителями.
Основные этапы приготовления гистопрепарата:
1) взятие и фиксация материала:
2) уплотнение материала;
3) изготовление срезов;
4) окрашивание срезов;
5) заключение срезов в консервирующую среду.
Фиксация вызывает процесс необратимой коагуляции белков, прекращение процессов жизнедеятельности и стабилизацию живой системы. Фиксаторы могут быть простыми (10—15% формалин, метиловый спирт, 1-2% тетраоксид осмия) или сложными, из нескольких компонентов (соли тяжелых металлов, слабые кислоты, формалин). Выбор фиксатора зависит от задач исследования и особенностей объекта.
Уплотнение - доведение исследуемого материала до плотности, позволяющей изготовлять из него срезы определенной толщины. Перед светооптическим исследованием для уплотнения объект либо замораживают, - и тогда срезы готовят на специальном замораживающем микротоме, - или уплотняют в специальных уплотняющих средах (парафин, целлоидин). Предварительно проводят дегидратацию объекта, выдержав его в спиртах возрастающей крепости (70, 80, 90, 96 и 100% этиловый спирт).
|
|
|
При уплотнении парафином объект после дегидратации погружают в ксилол (толуол, бензол, хлороформ), смесь ксилола с парафином при 37°С и затем в чистый расплавленный парафин. После застывания объект вырезают, наклеивают на деревянный кубик, и он готов к изготовлению тонких срезов.
При уплотнении целлоидином (раствор целлюлозы в смеси абсолютного спирта и эфира) объект из 100% спирта переносят в смесь спирта с эфиром, затем последовательно в 2, 4 и 8% целлоидин, выдерживая по несколько суток в каждом, и затем объект в густом целлоидине уплотняют в парах хлороформа. Из затвердевшего целлоидина объект вырезают, наклеивают на деревянный кубик - и из него можно делать срезы. (Хранят целлоидиновые блоки в 70% спирте).
Для получения срезов используют специальный прибор - микротом (санного или роторного типа). Замораживающие микротомы снабжены специальными охладительными столиками. В любом микротоме можно выделить 3 основные части: объектодержатель; микрометрическую механическую систему для подачи объекта на заданную величину; держатель микротомного ножа.
Окрашивание срезов, повышая контрастность, позволяет выявить разнообразные структуры. Красители подразделяются на основные (красящие соли оснований - гематоксилин, азур и др.), кислые (эозин, оранж и др.) и нейтральные, а также специальные. Гистологические структуры, избирательно окрашивающиеся основными красителями, называются базофильными, кислыми - оксифильными (ацидофильными), нейтральными - нейтрофильными.
Специальные красители избирательно окрашивают определенные вещества, так как обладают способностью связываться с химическими компонентами.
Для заключения срезов в качестве консервирующих средств используют смолы хвойных деревьев (растворенные в ксилоле) или синтетические смолы с коэффициентом преломления, близким к таковому у стекла.
Микроскоп и правила работы с ним
Подготовленные объекты пригодны для светооптического исследования - они пропускают свет (тонкие срезы), а их структуры контрастны (по-разному поглощают свет в связи с разными тинкториальными свойствами).
В световом микроскопе различают оптическую и механическую части (рис. 1). Оптическая часть включает в себя объектив /, устанавливаемый в гнезда револьверного устройства 2, тубус 3, окуляр 4 и осветительное устройство. Объектив даст непосредственное первичное увеличение объекта, а окуляр увеличивает изображение, данное объективом. Основной технической характеристикой объектива является разрешающая способность - наименьшее расстояние, на котором две близлежащие точки объекта воспринимаются раздельно. Разрешающая способность тем выше, чем меньше длина волны и больше апертура объектива. Связанное с оптической частью осветительное устройство включает в себя: зеркало 5, конденсор 6 для фокусировки пучка света на препарате, ирисдиафрагму 7 для изменения степени освещенности.
Механическая часть включает в себя штатив S, колонку 9 с микровинтом 10 и макровинтом // и тубус 3.
Увеличение, получаемое в микроскопе, определяют произведением увеличений объектива и окуляра. Микроскоп типа МБИ-1, изображенный на рис. 1, дает увеличение до 2 000 раз.
Приступая к работе с микроскопом, ставят вогнутое зеркало и слабый объектив (8х) в револьвере, который обязательно замыкают на засечку. Далее проводят работу в такой последовательности:
1. Удобно разместить микроскоп у края стола.
2. Установить равномерное яркое освещение поля зрения микроскопа вогнутым зеркалом при малом увеличении.
3. Положить гистологический препарат на предметный столик покровным стеклом кверху.
4. Макровинтом найти фокус малого увеличения (около 1 см). Перемещая препарат на предметном столике, рассмотреть его детали по всей площади объекта. Участок препарата, который следует изучить при большом увеличении микроскопа, поставить в центр поля зрения.
5. Не меняя фокуса, повернуть револьвер на сильный объектив, замкнув засечку револьвера. Установку резкости производить с помощью микровинта, плавно вращая его на пол-оборота вперед или назад. При использовании иммерсионного объектива (90x) на покровное стекло нанести каплю кедрового масла.
Окончив изучение и зарисовку препарата, следует поднят тубус (удалить кедровое масло с покровного стекла и объектива), перенести револьвер на малое увеличение и СНЯТЬ препарат со столика микроскопа.
При работе с сильным объективом (40х) конденсор должен быть полностью поднят, а со слабым (8х) - несколько опущен.
Дата добавления: 2018-04-05; просмотров: 1392; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!