Методы микробиологической диагностики
Для микробиологической диагностики бактериальных инфекций используют различные методы. Часто один из этих методов является основным, а другие — вспомогательными.
Материалом для проведения микробиологической диагностики могут быть мокрота, кровь, кал, рвотные массы, моча, желчь, кусочки поражённых тканей, пробы абиотической природы (вода, почва, воздух), пищевые продукты, фармацевтические препараты и др.
·Бактериоскопический (микроскопический) метод
Основан на изучении морфологических признаков возбудителя (определяют вид возбудителя по его форме, взаиморасположению клеток и способности окрашиваться определёнными красителями); различные микроскопические приёмы направлены на обнаружение микроорганизмов в нативных или окрашенных препаратах.
·Бактериологический метод
Основан на выделении чистой культуры возбудителя и его идентификации. Проводится изучение культуральных и других физиологических свойств возбудителя, на основании чего проводят идентификацию и типирование возбудителей, а также изучают чувствительность к антибиотикам (антибиотикограмму).
·Биологический (экспериментальный) метод
Основан на изучении особенностей взаимодействия микроба с организмом экспериментальных животных в модельных опытах. Данную группу методов используют с целью:
- изучения патогенности и вирулентности микроорганизмов;
|
|
|
- выделения чистой культуры возбудителя из различных материалов (метод биопробы);
- воспроизведение экспериментальной инфекции с целью выявления особенностей инфекционного процесса (создание модельных систем);
- для испытания лечебных эффектов антибиотиков и других лекарственных препаратов.
·Серологический метод
Основан на определении в крови (сыворотке- serum) больных или переболевших специфических антител к соответствующим возбудителям с помощью различных реакций. Основной принцип серологических реакций заключается в строго комплементарном взаимодействии АГ (антигена) с АТ (антителом). Серологические реакции могут быть использованы и для непосредственного обнаружения АГ возбудителя в исследуемом материале и изучения реакций макроорганизма на эти АГ (серологическая и аллергологическая диагностика инфекционного заболевания; антигенная идентификация микроорганизмов или их компонентов). В серологических реакциях один из компонентов всегда выступает в роли диагностикума (либо диагностическая сыворотка с АТ, либо диагностический АГ).
·Кожно-аллергический метод
Используют для выявления повышенной чувствительности (сенсибилизации) макроорганизма к определённым возбудителям или продуктам их жизнедеятельности (например, проба Манту с туберкулином на туберкулёз; проба с бруцеллином на бруцеллёз и т.д.) Положительные пробы не свидетельствуют о наличии самого возбудителя и собственно заболевания. Они лишь являются свидетельством недавнего контакта с больным человеком, возможной инфицированности (носительстве) или о болезни в прошлом.
|
|
|
·Молекулярно-генетический метод
Основан на обнаружении фрагментов генома возбудителя в биологическом материале при помощи молекулярной гибридизации ДНК или РНК, а также ПЦР. Этот метод позволяет обнаружить возбудителя по нескольким молекулам ДНК, содержащихся в крови или поражённых клетках хозяина. Их проводят в случаях, если:
- трудно выделить чистую культуру возбудителя из-за сложности его культивирования;
- возбудитель характеризуется высокой антигенной изменчивостью;
- в исследуемом материале имеется крайне низкая концентрация возбудителя или наблюдается длительная его персистенция в организме человека.
Этапы приготовления мазков-препаратов
Приготовление состоит из нескольких последовательных операций:
1. Подготовка мазка
2. Высушивание
3. Фиксация
|
|
|
4. Окраска
Техника приготовления мазка из бактериальной культуры:
- исследуемый материал наносят на чистое обезжиренное предметное стекло, очертив предварительно с обратной стороны стекла восковым карандашом границы препарата.
- если препарат готовят из бактериальной культуры, выращенной на плотной среде, то на предметное стекло предварительно наносят каплю стерильного физиологического раствора;
- нагревают до покраснения бактериальную петлю в пламени горелки;
- берут пробирку с исследуемой культурой в левую руку так, чтобы видеть поверхность среды; вращательным движением вынимают пробку из пробирки, прижимая ее мизинцем и безымянным пальцами правой руки к ладони;
- обжигают край пробирки, осторожно вводят петлю (петлю остужают о внутреннюю стенку пробирки) и берут исследуемый материал;
- вынимают петлю, обжигают край пробирки и закрывают пробкой;
- микробиологический материал осторожно распределяют по предметному стеклу тонким слоем, после чего бактериальную петлю стерилизуют в пламени спиртовки.
Дата добавления: 2018-04-05; просмотров: 651; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!