Правила работы в микробиологических лабораториях
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА 1
Тема:МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРИЯ. МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ. МОРФОЛОГИЯ МИКРОБОВ.СТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ И МЕТОДЫ ЕЕ ИЗУЧЕНИЯ. ПРОСТЫЕ И СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ.
Цель занятия:ознакомиться с правилами работы в микробиологической лаборатории, с методами изучения микроорганизмов; освоить технику иммерсионной микроскопии; технику приготовления мазков из культур микроорганизмов и окраски мазков-препаратовпростыми методами.
Изучить структурные особенности прокариотических микроорганизмов, овладеть сложными методами окраски для выявления структурных компонентов бактериальной клетки.
Вопросы для подготовки к занятию
1. Микробиологическая лаборатория. Оборудование, правила работы, организация рабочего места.
2. Методы изучения микроорганизмов (микроскопический, бактериологический, экспериментально-биологический, серологический, кожно-аллергический, молекулярно-генетический).
3. Микроскопический метод исследования. Виды современных микроскопов. Иммерсионная микроскопия.
4. Принципы классификации микробов. Классификация бактерий по Берджи. Современные подходы к систематике микроорганизмов. Таксономические категории: царство, отдел, семейство, род, вид. Популяция, культура, штамм, клон. Определение, применение в теоретической и прикладной микробиологии.
5. Морфология бактерий. Классификация бактерий по морфологии (кокковидные, палочковидные, извитые, ветвящиеся), размер и взаимное расположение бактерий.
|
|
6. Тинкториальные свойства бактерий. Этапы приготовления мазков-препаратов.
7. Простые (метиленовой синькой и фуксином)методы окраски
8. Особенности строения бактериальной клетки (см. Атлас А.А.Воробьевастр 28, рис 3,4) и ее отличия от клеток высших организмов.
9. Основные структуры: клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана, цитоплазма, нуклеоид (строение и химический состав).
10. Понятие о сложных методах окраски.
11. Особенности строения клеточной стенки бактерий. Грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы. Окраска по Граму, принцип и этапы окраски, значение для классификации бактерий
12. Механизм, этапы и результат окраски кислотоустойчивых бактерий по методу Циля-Нильсена. Механизм, этапы и результат окраски по Нейссеру, Бурри-Гинсу, Ожешке (Ауески), Романовскому-Гимзе
13. Капсула бактерий, ее назначение, методы выявления.
14. Жгутики, строение, функции, методы выявления Исследование микробов в живом состоянии. Характеристика методов «висячей» и «раздавленной» капли.
15. Включения у бактерий, их выявление.
16. Споры бактерий, функции, методы выявления.
|
|
17. Бактериоскопический метод диагностики.
Оформление протокола лабораторных занятий (выполнить дома)
1. Записать в тетрадь для лабораторных работ:
- номер занятия, тему и цель занятия.
- определение понятий: семейство, род, вид, чистая культура, штамм, клон.
- виды микроскопии (принцип, назначение)
- значение и способы фиксации мазков.
2. Вклеить таблицу «Основные формы бактерий» (см. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологииБыков А.С.Воробьев А.А.Зверев В.В. рис. 3.2).
3. Нарисовать схематическое строение клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий (см. Атлас А.А.Воробьева, рис. 3.5).
Заполнить в тетради таблицы 2.1.Отличительные признакиграмположительных и грамотрицательных микроорганизмов(см. Атлас А.А.Воробьевастр 20)и 2.2.(см. Атлас А.А.Воробьева 2008 год).
Задания для выполнения лабораторной работы
1. Для допуска к выполнению лабораторной работы индивидуально под подпись ответить «Правил работы в микробиологической лаборатории».
2. Ознакомиться с оборудованием микробиологической лаборатории кафедры МВИ.
3. Приготовить мазок из кисломолочного продукта, окрасить метиленовым синим или фуксином Пфейффера, изучить под микроскопом.
|
|
4. Приготовить мазок из материала, окрасить по методу Грама, изучить под микроскопом.
5. Приготовить мазок из материала, окрасить по методу Бурри-Гинса, изучить под микроскопом
6. Записать ход работы по приготовлению и микроскопии выполненных мазков, зарисовать препараты (или цветные фото) и сделать заключение.
Дополнительный материал
ЧАСТЬ 1
СП1.3.2322-08. Требования к помещениям и оборудованию микробиологические лаборатории, где проводят работы с ПБА III - IV групп(некоторые пункты).
1. Микробиологические лаборатории, где проводят работы с ПБА III - IV групп, должны размещаться в отдельно стоящем здании или в изолированной части здания. На входной двери лаборатории должны быть обозначены название (номер) лаборатории и международный знак "Биологическая опасность". Размещение лабораторий в жилых зданиях не допускается.
2. Производственные лаборатории, проводящие работу с ПБА III группы, должны располагаться в отдельно стоящих зданиях или изолированном блоке здания, имеющем отдельный вход, а производственные лаборатории, работающие с ПБА IV группы, могут располагаться в изолированном блоке производственного корпуса.
|
|
3. Лаборатория должна быть обеспечена холодным и горячим водоснабжением, канализацией, электричеством, отоплением и вентиляцией. Все помещения лаборатории должны иметь естественное и искусственное освещение в соответствии с требованиями действующих нормативных документов.
4. Объемно-планировочные решения и размещение оборудования должны обеспечивать поточность движения ПБА III - IV групп, персонала и выполнение требований санитарных правил (СП1.3.2322-08).
5. Помещения лабораторий разделяют на "заразную" зону, где осуществляются манипуляции с ПБА III - IV групп и их хранение, и "чистую" зону, где не проводят работы с микроорганизмами и их хранение.
В "чистой" зоне лабораторий должны располагаться следующие помещения:
- гардероб для верхней одежды;
- помещения для проведения подготовительных работ (препараторская, моечная, приготовление и разлив питательных сред и др.);
- помещение для стерилизации питательных сред и лабораторной посуды (стерилизационная);
- помещение с холодильной камерой или холодильниками для хранения питательных сред и диагностических препаратов;
- помещение для работы с документами и литературой;
- помещение отдыха и приема пищи;
- кабинет заведующего;
- помещение для хранения и одевания рабочей одежды;
- подсобные помещения;
- туалет.
Для работы с ПБА III - IV групп в "заразной" зоне должны размещаться:
- помещение для приема и регистрации материала (проб);
- боксированные помещения с предбоксами или помещения, оснащенные боксами биологической безопасности:
для проведения бактериологических (вирусологичеких) исследований;
для проведения иммунологических исследований;
- помещение для люминесцентной микроскопии;
- помещение для проведения зооэнтомологических работ;
- помещение для гельминтологических исследований;
- помещение для работы с лабораторными животными (заражение, вскрытие);
- помещение для содержания инфицированных лабораторных животных;
- помещения для ПЦР-диагностики;
- термостатная комната;
- помещение для обеззараживания (автоклавная).
6. На границе "чистой" и "заразной" зон должен располагаться санитарный пропускник.
7. При расположении в одном блоке нескольких микробиологических лабораторий общими для них могут быть: блок для работы с инфицированными животными, автоклавные для обеззараживания, моечные, комнаты для приготовления питательных сред и другие вспомогательные помещения.
8. Внутренняя отделка помещений должна быть выполнена в соответствии с их функциональным назначением и гигиеническими нормативами. Поверхность пола, стен, потолка в лабораторных помещениях "заразной" зоны должна быть гладкой, без щелей, устойчивой к многократному действию моющих и дезинфицирующих средств. Полы должны быть не скользкими, иметь гидроизоляцию.
9. Окна и двери помещений "заразной" зоны лаборатории должны быть герметичными. Допускается заполнение оконных проемов стеклоблоками. Окна цокольного и первого этажей независимо от наличия охранной сигнализации должны быть оснащены металлическими решетками, не нарушающими правил пожарной безопасности. Двери должны иметь запирающие устройства.
10. Приборы, оборудование и средства измерений, используемые в работе лаборатории, должны быть аттестованы, технически исправны, иметь технический паспорт и рабочую инструкцию по эксплуатации с учетом требований биологической безопасности. Средства измерения подвергают метрологическому контролю в установленные сроки.
11. Лабораторное оборудование и мебель (столы, стеллажи для содержания животных, стулья и т.д.) должны быть гладкими, без острых краев и шероховатостей и иметь покрытие, устойчивое к действию моющих и дезинфицирующих средств. Поверхность столов не должна иметь швов и трещин. В помещениях "заразной" зоны не допускается использование мебели из древесины и с мягким покрытием.
12. Помещения "заразной" зоны должны быть оборудованы бактерицидными облучателями для обеззараживания воздуха и поверхностей в соответствии с нормативами.
13. В лабораторных помещениях должна быть предусмотрена защита рабочих столов от попадания прямого солнечного света. Для этих целей могут быть использованы светозащитная пленка, жалюзи из материала, устойчивого к воздействию дезинфицирующих растворов.
14. Все жидкие отходы, образующиеся в процессе работы в "заразной" зоне, перед сбросом в канализационную систему подлежат обязательному химическому или термическому обеззараживанию.
15. Помещения блока для работы и содержания инфицированных животных, бокси-рованные помещения, микробиологические комнаты, помещения с аэрозольными камерами (установками) должны быть оборудованы автономными системами приточно-вытяжной вентиляции с механическим побуждением. Указанные системы оснащаются фильтрами тонкой очистки на выходе, проверяемыми на защитную эффективность. В отдельных случаях для создания асептических условий в помещениях фильтрами тонкой очистки могут оснащаться и приточные системы вентиляции.
16. Не допускается подводка систем горячего и холодного водоснабжения и канализации в микробиологические боксы.
17. Для обеспечения физической защиты работающего персонала, воздуха и поверхностей рабочей зоны, окружающей среды от исследуемых микроорганизмов должны использоваться боксы биологической безопасности.
18. Для работы с ПБА должны применяться боксы биологической безопасности II класса. Все работы в боксах биологической безопасности проводят на поддонах с салфетками, смоченными дезинфицирующим раствором.
19. Боксы биологической безопасности должны проверяться на защитную эффективность. При проверке должна определяться эффективность работы фильтров очистки воздуха, скорость воздушного потока в рабочем проеме бокса.
Правила работы в микробиологических лабораториях.
Работу в микробиологической лаборатории медицинского учреждения проводят с возбудителями инфекционных заболеваний — патогенными микроорганизмами. Поэтому для предохранения от заражения персонал обязан строго соблюдать правила внутреннего распорядка.
1. Все сотрудники должны работать в медицинских халатах, шапочках и сменной обуви. Вход в лабораторию без халата категорически воспрещен. В необходимых случаях работающие надевают на лицо маску. Работа с особо опасными микробами регламентируется специальной инструкцией и проводится в режимных лабораториях.
2. В лаборатории, на рабочем месте, запрещается принимать пищу, пользоваться косметикой, курить.
3. Рабочее место должно содержаться в образцовом порядке. Личные вещи сотрудников следует хранить в специально отведенном месте.
4. Любой поступивший в лабораторию материал рассматривается как потенциально инфицированный патогенной микрофлорой.
5. Весь поступивший материал регистрируется в специальном журнале, где ему присваивается порядковый номер, которым маркируются соответствующие пробирки и чашки Петри на всем протяжении исследования в лаборатории.
6. Материал высевают в пробирки и чашки Петри вблизи пламени горелки с обязательным обжиганием бактериологической петли и краев пробирки во избежание бактериологической обсеменённости воздуха в рабочем помещении.
7. С поступившим в лабораторию материалом работают только с помощью инструментов (бактериологические петли, пинцеты, шпатели, пипетки и др.)
8. Загрязненный инструментарий (пипетки, стеклянные палочки, шпатели) сразу после использования погружается в емкости с дез. раствором.
9. Бактериальная петля после использования сразу же обеззараживается путем фламбирования (прожигания) в пламени спиртовки и ставится в штатив.
10. Прикасаться руками к исследуемому материалу запрещается.
11. При случайном попадании инфицированного материала на стол, пол и другие поверхности это место необходимо тщательно обработать дезинфицирующим раствором.
12. Хранение, наблюдение за культурами микробов и их уничтожение должны производиться согласно специальной инструкции. Культуры патогенных микробов регистрируют в специальном журнале.
13. По окончании работы рабочий стол и руки следует обработать дезинфицирующим раствором (70% этиловый спирт) затем руки тщательно вымыть мылом.
Используемые методы дезинфекции:
· Руки (а также рабочие поверхности, контактировавшие с исследуемым материалом) обрабатывают дезинфицирующим раствором (70% этиловым спиртом или 0,5% раствором хлорамина), а затем моют с мылом.
· Помещение дезинфицируют с помощью бактериологических ламп и путём обработки поверхностей лабораторной мебели дезинфицирующим раствором.
Дата добавления: 2018-04-05; просмотров: 1469; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!