II. МАТЕРИАЛЫ ДЛЯ САМОПОДГОТОВКИ



Занятие 1

Тема: Лекарственные растения и лекарственное растительное сырье, содержащие ПОЛИСАХАРИДЫ

Цель:сформировать умения и практические навыки в определении подлинности и доброкачественности лекарственного растительного сырья, содержащего полисахариды.

 

I. ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ЗАНЯТИЯ

Полисахариды (гликаны) — природные высокомолекулярные биологически активные вещества, состоящие из остатков моносахаров и их производных (уроновых кислот), связанных О-гликозидными связями.

Полисахариды делятся на две группы: гомополисахариды и гетерополисахариды (схема 1). Гомополисахариды — это полисахариды, которые при гидролизе образуют только один моносахар (например, крахмал, целлюлоза). Гетерополисахариды — это полисахариды, которые при гидролизе образуют разные и продукты их окисления (уроновые кислоты). К ним относятся слизи, камеди и пектиновые вещества.

Схема 1. Классификация полисахаридов (по В.Н. Ковалеву, 2003)

 

Физико-химические свойства полисахаридов.В чистом виде это аморфные, редко кристаллические, высокомолекулярные вещества. Полисахариды имеют большое количество свободных гидроксильных групп, поэтому они полярны и нерастворимы в спирте и органических растворителях. Растворимость полисахаридов в воде различная: некоторые линейные гомогликаны (целлюлоза, хитин, ксиланы, маннаны) в воде не растворяются вследствие прочных межмолекулярных связей; сложные и разветвленные полисахариды растворяются в воде (гликоген, декстраны) или образуют студни (пектины, агар, кислоты альгиновые и т. п.). В растворах гликаны иногда образуют структурированные системы и могут выпадать в осадок.

Выделение полисахаридов. Для извлечения полисахаридов из природного сырья используют горячую или холодную воду (слизи, некоторые полисахариды бактерий, сульфированные галактаны, фруктаны и т. п.), растворы кислот или щелочей. Для очистки экстракта от белков, минеральных солей, водорастворимых красителей используют диализ, дробное осаждение спиртом или четвертичными аммониевыми основаниями, ультрафильтрацию, ферментолиз и пр. Очистить полисахариды от белков можно денатурацией или избирательной сорбцией на кальция фосфате, бентоните и пр.

Вещества, которые сопровождают клетчатку (гемицеллюлозы, лигнин, минеральные соли), растворяют при нагревании в растворе щелочи, кислот сернистой или азотной. После этого остается чистая целлюлоза.

Качественные реакции.Многообразие полисахаридов, их способность образовывать гомологические ряды гликанов с разной молекулярной массой не позволяют использовать для их обнаружения единую реакцию. Реакции, которые воспроизводятся на лабораторном занятии, подразделяются на:

а) реакции непосредственно на полисахариды;

б) реакции на продукты их гидролиза — восстанавливающие моносахариды и кислоты уроновые.

Качественные реакции

Качественные реакции на полисахариды могут проводиться как непосредственно на сухом сырье, так и с водными извлечениями из сырья.

Реакции, проводимые с водными извлечениями из сырья:

1. Реакция 1 - осаждение этанолом из водного извлечения (листья подорожника большого, слоевища ламинарии, трава череды). 10 г измельченного сырья помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 100 мл воды и нагревают с обратным холодильником на электрической плитке в течение 30 мин, поддерживая слабое кипение. Извлечение процеживают через 5 слоев марли, вложенных в стеклянную воронку диаметром 55 мм. К 10 мл раствора прибавляют 10-30 мл 95% спирта, перемешивают; появляются хлопьевидные сгустки, выпадающие в осадок при стоянии (полисахариды).

2. Реакция с реактивом Фелинга (слоевища ламинарии, трава череды). Раствор с осадком (см. реакцию 1) фильтруют через стеклянный фильтр ПОР-16, осадок с фильтра переносят в пробирку, прибавляют 2 мл разведенной хлористоводородной кислоты, нагревают, затем прибавляют 10 мл реактива Фелинга и снова нагревают; появляется оранжево-красный осадок (восстанавливающие сахара).

3. Реакция с карбазолом (листья подорожника большого). Раствор с осадком (см. реакцию 1) фильтруют через стеклянный фильтр ПОР-16, осадок с фильтра переносят в колбу вместимостью 50 мл раствором натра едкого (0,1 моль/л). К 1 мл полученного раствора прибавляют 0,25 мл 0,5% раствора карбазола и 5 мл концентрированной серной кислоты, перемешивают и нагревают на кипящей водяной бане в течение 10 мин; появляется красно-фиолетовое окрашивание (галактуроновая кислота).

Гистохимические и микрохимические реакции:

 Обнаружение крахмала под микроскопом. Крахмальные зерна хорошо видны в воде и глицерине. Яркая картина наблюдается в поляризованном свете; в результате двойного лучепреломления крахмальные зерна дают черный крест, полосы которого пересекаются в центре наслоений зерна.

 Реакция с йодом на крахмал. Применяется раствор йода в йодиде калия (раствор Люголя), раствор йода в спирте или в какой-либо просветляющей жидкости. Крахмал, смоченный водой, при нанесении реактива окрашивается в синий или в сине-фиолетовый цвет, сухой - в темно-бурый. Присутствие продуктов частичного гидролиза крахмала - декстринов - обнаруживается по красному или красно-фиолетовому окрашиванию. Реакция является специфической на крахмал. Исследуемый объект (порошок или поперечный срез) помещают в каплю реактива, накрывают покровным стеклом и наблюдают под микроскопом. Крахмальные зерна приобретают синее или сине-фиолетовое окрашивание. Следует помнить, что окраска исчезает при нагревании. Приготовленный препарат надо исследовать тотчас, так как окраска держится недолго. Если в объекте крахмала мало, то лучше использовать раствор йода в хлоралгидрате: к готовому раствору хлоралгидрата прибавляют (в избытке) кристаллический йод и взбалтывают. Реактив хранят в темном месте. Хлоралгидрат просветляет объект и вызывает клейстеризацию крахмальных зерен, что улучшает результаты реакции.

 Реакция осаждения инулина спиртом. Инулин обнаруживается в растительном материале, фиксированном в спирте, в виде слоистых сферокристаллов. В горячей воде сферокристаллы инулина растворяются. Кусочки свежего растительного материала помещают на несколько дней в 70% спирт. Приготовленные из него срезы наблюдают в спирте или в глицерине. Инулин имеет форму сферокристаллов, состоящих из тончайших иголочек. При добавлении воды и последующем нагревании кристаллы инулина растворяются.

ÂРеакция Молиша на углеводы. Положительные результаты дают все углеводы: сахара, крахмал, инулин. Реактивы: а) 10-20% спиртовой раствор тимола или α-нафтола; б) концентрированная серная кислота. Срез помещают в раствор тимола (или α-нафтола), прибавляют каплю концентрированной серной кислоты и накрывают покровным стеклом. При наличии углеводов появляется оранжево-красное (тимол) или красно-фиолетовое (α-нафтол) окрашивание. С порошком или соскобом сухого растительного материала реакцию можно проводить на часовом стекле. Результаты реакции хорошо фиксируются невооруженным глазом на белом фоне.

 Реакция с метиленовым синим. Используется спиртовой раствор метиленового синего (1:5000). Срез помещают на несколько минут в реактив, затем переносят в глицерин. Слизь окрашивается в голубой цвет.

 Реакция с сульфатом меди в щелочи. Срез помещают на 5-10 мин в концентрированный раствор сульфата меди, промывают водой и переносят в 50% раствор едкого кали. Слизь окрашивается в синий цвет (растения семейства мальвовых, орхидных) или в зеленый цвет (растения семейства лилейных).

 Реакция «двойного окрашивания». Срез помещают на 20 мин в раствор хлорида окисного железа, затем переносят на 2-3 мин в раствор метиленового синего, промывают водой и заключают в глицерин. Реакция выглядит особенно наглядно с поперечным срезом корня алтея: клетки со слизью окрашиваются в желтый цвет, механические волокна - в голубой, сосуды древесины - в зеленый.

 Реакция с тушью. Тушь (для черчения) разводят водой в соотношении 1:10 (реактив готовят по мере надобности). Порошок исследуемого сырья помещают на предметное стекло в каплю туши, тщательно размешивают и накрывают покровным стеклом. В поле зрения микроскопа на темно-сером (почти черном) фоне наблюдаются белые пятна - клетки со слизью. Тушь окрашивает все ткани, но не проникает в клетки со слизью.

Гидролиз полисахаридов. Полисахариды подвергаются кислотному или ферментативному гидролизу с образованием моно- или олигосахаридов. Образующиеся мономеры дают характерные для них реакции.

Хроматографический анализ. Под воздействием разведенных или концентрированных кислот гликозидные связи частично или полностью разрываются с образованием моно- и олигосахаридов. Методами БХ, ТСХ, ГЖХ устанавливают углеводный состав гидролизата. Физико-химические и хроматографические характеристики олигосахаридов свидетельствуют о строении отдельных фрагментов молекулы полисахарида.

Количественный анализ полисахаридов. Содержание полисахаридов в растительном сырье, как правило, определяют гравиметрическим методом. В препаратах проводят кислотный гидролиз, а далее оптическими методами измеряют плотность окрашенных растворов, которые образуются при взаимодействии восстанавливающих моносахаридов с кислотой пикриновой в щелочной среде. Происходит восстановление нитрогруппы кислоты пикриновой до аминогруппы с образованием кислоты пикраминовой. Соль ее имеет хиноидную структуру, поэтому окрашена в красный цвет.

Реакция взаимодействия восстанавливающих сахаров с кислотой пикриновой:

 

При подкислении раствора хиноидная структура переходит в фенольную и окраска слабеет.

Биологическая активность. Полисахариды обладают отхаркивающим, слабительным, обволакивающим, сорбирующим, детоксицирующим, противовоспалительным, противоязвенным и другим действием. Растворы декстрана применяют как заменители плазмы крови. Пектиновые вещества (пектин) в присутствии органических кислот и сахаров образуют студни, обладающие противовоспалительным и адсорбирующим действием. Пектин используют при отравлении солями тяжелых металлов и для улучшения пищеварения. Многие полисахариды служат вспомогательными веществами в фармацевтическом производстве (крахмал и его модификации, камеди, пектин, целлюлоза, ее производные и др.), выполняя функции наполнителей, стабилизаторов, эмульгаторов, пленко- и основообразователей.

Полисахариды широко распространены в природе. Растения содержат до 90% полисахаридов и являются основным источником их получения. В растениях полисахариды накапливаются в травах, листьях, семенах и подземных органах.

II. МАТЕРИАЛЫ ДЛЯ САМОПОДГОТОВКИ

Вопросы для подготовки к занятию (устно):

1.Дать определение понятия «полисахариды» как группы биологически активных веществ.

2.Привести классификацию полисахаридов.

3. Охарактеризовать физико-химические свойства полисахаридов.

4.Указать особенности сбора и сушки сырья, содержащего полисахариды. Особенности первичной обработки сырья (корни), содержащего полисахариды.

5.Указать особенности качественного обнаружения полисахаридов в лекарственном растительном сырье.

6.Охарактеризовать метод количественного определения полисахаридов в лекарственном растительном сырье, используемый в ГФ XI. На каких физико-химических свойствах полисахаридов основаны методы количественного определения?

7.Указать особенности хранения сырья, содержащего полисахариды.

8.Указать особенности фармакологического действия сырья, содержащего полисахариды. Пути использования сырья, применение, препараты.

 

Заполнить таблицы (письменно):

Задача 1.Внести в таблицу 1 необходимые данные для следующих видов ЛРС: корни алтея лекарственного, листья подорожника большого, трава череды трехраздельной, слоевища ламинарии.

Задача 2.Внести в таблицу 2 необходимые данные для следующих видов ЛРС: алтей лекарственный, подорожник большой, череда трехраздельная, слоевища ламинарии, мать-и-мачеха обыкновенная, лен обыкновенный, виды рода липа и лопух.

Задача 3.Записать в виде таблицы 3 возможные примеси, появление которых возможно при заготовке корней алтея лекарственного, листьев подорожника большого, травы череды трехраздельной, листьев мать-и-мачехи.

Основные отличительные признаки алтея лекарственного и алтея армянского

Название растения Стебли Срединные листья Верхние листья Цветки и соцветия
Алтей лекарственный -   Althaea officinalis Обычно многочисленные Округлые или яйцевидные, 3-5-лопастные; с обеих сторон опушенные, бархатистые Обычно цельные, ланцетные Цветки сидят на коротких цветоножках и образуют почти колосовидное соцветие
Алтей армянский –   Althaea armeniaca Большей частью одиночные Округлые или широкояйцевидные, от 3-5-лопастных до рассеченных; с обеих сторон опушенные Обычно 3-раздельные или 3-рассеченные Цветки сидят на длинных цветоножках и образуют почти кистевидное соцветие

 

Отличительные признаки алтея лекарственного и сходных видов

Название растения Листья Подчашие Лепестки венчика Плоды Опушение
Алтей лекарственный - Althaea officinalis Яйцевидные, 3-5  лопастные 8-12-ло- пастное Бледно-розовые, широкообратнояйцевидные, длиной 11-25 мм Дисковидны, короткоопу- шенные Бархатистое
Хатьма тюринг- ская - Lavatera thuringiaca Округло-почко - видные или широкояйцевидные, 5-лопастные с прилистниками 3-лопастное Ярко-розовые, обратнотреугольные, длиной 25-50 мм Округл оуш- ковидные, поперечноморщинистые, черные Шерстистое
Мальва лесная - Malva sylvestris Округло-почко - видные, 5-7-лопастные, с пленчатыми прилистниками 3-лопастное Розовые, с темными полосками, обратнояйцевидно-клиновидные, длиной 12-22 мм, на верхушке выемчатые Почковидные, морщинисты, голые, желтовато- бурые Жесткое, реже растение голое

 

Задача 4. Запишите в таблице 4 формулы глюкозы, галактозы, фруктозы, глюкуроновой кислоты, галактуроновой кислоты, альгиновой кислоты, амилозы, амилопектина, инулина, пектина.

Задача 5. Запишите химизм реакций полисахаридов с карбазолом, реактивом Фелинга, с реактивом Молиша.

Задача 6. Составьте схемы заготовки корней алтея, травы череды, листьев мать-и-мачехи, объясняя каждый этап работы.

Литература для подготовки к занятию

Муравьева Д.А., Самылина И.А., Яковлев Г.П. Фармакогнозия. — М.: Медицина, 2002.-С. 95-134.

Лекарственные растения Государственной фармакопеи: Ч. 1,2/ Под ред. И.А. Самылиной, В.А. Северцева. — М.: АНМИ, 1999; 2003.

Пронченко Г Е. Лекарственные растительные средства. — М: Гэотар-мед, 1999.

Материалы лекций по фармакогнозии.

 

III. РАБОТА НА ЗАНЯТИИ

Качественные реакции с гомо- и гетерополисахаридами.

Работа 1. Комплекс реакций с крахмалом (Amylum)

Цель: Провести качественные реакции с крахмалом и установить их специфику.

Материал и оборудование: сухой крахмал, лакмус, раствор Люголя, водный раствор сульфата меди (II), щелочной раствор сегнетовой соли (калиево-натриевая соль винной кислоты), 10 % ра-р серной кислоты, вода, ра-р йода в калии йодиде, эл.плитка, водяная баня, лаб.посуда, предметные стекла

 

Работа 1.1. Образование клейстера.

Ход работы: В 100 мл колбу поместить 1,0 г. крахмала и прибавить 50 мл воды. Смесь нагреть в течение 5-7 мин. на электроплитке при постоянном перемешивании до образования прозрачного клейстера беловатого цвета. Реакция среды должна быть нейтральной или слабокислой.

Задание: проверить рН среды по лакмусу. Проанализируйте и запишите полученные результаты.

 

Работа 1.2. Реакция с раствором йода.

Ход работы: к 2 мл. охлажденного крахмального клейстера (приготовленного в работе 1.1) добавить одну каплю раствора Люголя (синее окрашивание). Реакция очень чувствительна. Йод окрашивает крахмал даже в растворе 1 : 500 000. Реакции мешает присутствие спирта, танина, щелочи, кислоты азотной, хлора.

Нагреть колбу и наблюдать за изменением окраски (слабеет, а при 100 °С – исчезает). Охладить клейстер и проводить наблюдения (окраска восстанавливается).

Задание: Схематично зарисовать ход работы, отметив изменения окраски и условия при которых она происходит. Зафиксировать свои наблюдения и сделать вывод. Объяснить, почему окраска комплекса с йодом зависит от температуры?

 

Работа 1.3. Реакция с реактивом Фелинга.

Ход работы: к 2 мл крахмального клейстера прибавить 2 капли водного раствора меди (II) сульфата (раствор А) и 2 капли щелочного раствора сегнетовой соли - калиево-натриевой соли кислоты винной (раствор Б). Наблюдать выпадение голубого осадка меди (II) гидроксида, который с сегнетовой солью образует водорастворимый комплекс синего цвета. Смесь нагреть на водяной бане.

 

 

Задание: Зафиксировать свои наблюдения и сделать вывод.

Письменно ответить на вопрос - почему при взаимодействии крахмала с реактивом Фелинга не происходит окислительно-восстановительная реакция?

 

Работа 1.4. Кислотный гидролиз крахмала.

Ход работы: в пробирку поместить 1 мл 0,5 %-ного крахмального клейстера. Добавить 10 капель 10 %-ного раствора кислоты серной и нагреть на водяной бане (в течение 20 мин) помешивая. Отметить изменение цвета (раствор становится прозрачным).

Каплю гидролизата поместить на предметное стекло и смешать с 1 каплей раствора йода в калия йодиде. Отметить произошло ли изменение цвета, дать пояснения (отсутствие синего окрашивания свидетельствует о полном гидролизе крахмала).

В результате гидролиза крахмала образуется глюкоза, присутствие которой можно определить реакцией восстановления Cu2+ (с реактивом Фелинга). Для этого в гидролизат необходимо добавить реактив Фелинга, отметив изменение окраски раствора и цвет образовавшегося осадка (произойдет постепенное обесцвечивание ра-ра и образование красно-коричневого осадка оксида меди (I).

 

 

Задание: Зафиксировать свои наблюдения и сделать соответствующий вывод, объяснив причину всех изменений, происходящих в течение опыта.

Работа 2. Комплекс реакций с декстрином (Dextrinum)

Цель: Провести качественные реакции с декстрином и установить их специфику.

Материал и оборудование: 10% р-р гидроксида натрия, реактив Феллинга, 96 % спирт, водяная баня.

Работа 2.1. Реакция с раствором щелочи.

Ход работы: 0,1 г декстрина растворяют в 10 %-ном растворе натрия гидроксида. Исследуемый объект (порошок или поперечный срез) помещают в каплю реактива, накрывают покровным стеклом и наблюдают под микроскопом. Следует помнить, что окраска исчезает при нагревании. Приготовленный препарат надо исследовать тотчас, так как окраска держится недолго.

Задание: провести наблюдение, отметить изменение окраски (появится желтый цвет) и записать вывод.

 

Работа 2.2. Реакция с реактивом Фелинга.

Ход работы: к щелочному раствору декстрина (работа 2.1.) прибавить 1 мл реактива Фелинга, нагреть смесь на кипящей водяной бане.

Задание: провести наблюдение, обосновать разную скорость образования осадка меди (I) оксида в зависимости от размера молекулы декстрина. Записать вывод.

 

Работа 2.3. Взаимодействие со спиртом.

Ход работы:  к 0,5 мл 5 %-ного раствора декстрина прибавить 5 мл 96 %-ного спирта. Отметить появление молочной мути с последующим образованием осадка (дегидратация), что является отличием декстринов от сахаров.

Задание: записать результаты наблюдения и сделать вывод.

 

Работа 3. Комплекс реакций с целлюлозой (Cellulosa)

Цель: Провести качественные реакции с целлюлозой и установить их специфику.

Материал и оборудование: порошок целлюлозы, ра-р йода, раствор цинка хлорида и калия йодида (хлор- цинк-йод), предметные стекла, пипетка

 

Работа 3.1. Реакция с раствором йода.

Ход работы: 0,1 г. порошка целлюлозы нанести на предметное стекло и капнуть каплю раствора йода.

Задание: Отметить изменение окраски (целлюлоза окрашивается раствором йода в желтый или коричневый цвет в отличие от крахмала); записать результаты наблюдения и сделать вывод.

 

Работа 3.2. Реакция с йодом в растворе цинка хлорида и калия йодида (хлор- цинк-йод).

Ход работы: на кончик шпателя набирают порошок целлюлозы и  поместить его на предметное стекло и смочить реактивом.

Задание: записать наблюдения, по результатам сформулировать вывод о подлинности образца целлюлозы (целлюлоза окрашивается в синий цвет).

 

Работа 4. Комплекс реакций с инулином (Inulinum)

Цель: Провести качественные реакции с целлюлозой и установить их специфику.

Материал и оборудование: корни растений (цикория одуванчика, эхинацеи, девясила или клубней топинамбура), 20 % спиртовой ра-р α-нафтола, конц. серная кислота.

 

Работа 4.1. Реакция с α-нафтолом (реакция Молиша).

Ход работы: на поперечный разрез корня цикория (одуванчика, эхинацеи, девясила или клубней топинамбура) нанести пипеткой 1 каплю 20 %-ного спиртового раствора а-нафтола и каплю кислоты серной концентрированной.

Задание: провести наблюдение, отметить время и цвет окраски (фиолетовая). Сделать вывод.

 

 

 

Работа 5. Комплекс реакций со слизями (Mucilagines)

Цель: Провести качественные реакции со слизями и установить их специфику.

Материал и оборудование: 10 % настой корня алтея, ра-р гидроксида натрия (или аммиака), конц. хлористоводородная кислота, 96% спирт, свинца ацетат, пробирки, лаб.посуда.

Работа 5.1. Реакция настоя корня алтея с ра-ром гидроксида натрия.

Ход работы: к 1-2 мл 10 %-ного настоя корня алтея, приготовленного на холодной воде, прибавить 2 капли раствора натрия гидроксида (или аммиака).

Задание: провести наблюдение, отметить изменение окраски (лимонно-желтая), сделать соответствующий вывод.

 

Работа 5.2. Реакция настоя корня алтея с конц. хлористоводородной кислотой.

Ход работы: в пробирку налить 1 мл 10 %-ного настоя корня алтея и прибавить 2-3 капли кислоты хлористоводородной концентрированной. К смеси приливают 2 мл спирта. Слизь коагулирует в пористый сгусток.

Задание: провести наблюдение, отметить изменение окраски (желтовато-зеленое). Объяснить причину коагуляции. Сделать вывод.

 

Работа 5.3. Реакция настоя подорожника с ацетатом свинца.

Ход работы: к 2 мл раствора, приготовленного для количественного определения полисахаридов подорожника (работа 6), прибавить 2 мл раствора свинца ацетата.

Задание: провести наблюдения и зафиксировать результаты опыта (выпадает объемный осадок слизи).

Работа 5.4. Определение индекса набухания сырья (по методике PhEur).

Ход работы: 1,0 г цельного или измельченного сырья, содержащего слизь, поместить в мерный цилиндр вместимостью 25 мл с притертой пробкой и ценой деления 0,5 мл. Сырье увлажняют 1 мл спирта, добавляют воду до метки и тщательно взбалтывают смесь каждые 10 мин в течение 1 ч для равномерного смачивания сырья. Через 1,5 ч цилиндр вращают вокруг вертикальной оси для того, чтобы осели всплывшие частицы сырья. Через 2 ч измеряют объем набухшего сырья с окружающей слизью. Проводят не менее трех определений одновременно. Рассчитывают среднюю величину индекса набухания.

 

Задание: Сравнить полученный результат с требованиями АНД. Сделайте вывод.

Примечание. Индекс набухания — это объем в миллилитрах, занимаемый ЛРС и окружающей слизью после набухания сырья в водной среде.

Индекс набухания семян льна: не менее 4 - для цельного сырья, не менее 4,5 - для порошка (сито 710); семян подорожника исфагула (аналог семян подорожника блошного) - не менее 40 для навески 0,1 г измельченного сырья (сито 355); корней алтея (сито 710) - не менее 10; листьев алтея - не менее 12 для навески 0,2 г измельченного сырья (сито 355).

 

Работа 6. Выделение полисахаридов из лекарственного растительного сырья.

Цель: выделить полисахариды из ЛРС подорожника большого

Материал и оборудование: 96% спирт, центрифуга, эл.плитка, весы, сито с отверстиями диаметром 2 мм., мерная колба 500 мл, воронка, марля,

 

Для выполнения задания используют извлечение, которое получают в процессе количественного определения полисахаридов в листьях подорожника (ст. 20 ГФ ХI).

Ход работы: аналитическую пробу сырья измельчают до частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. Около 10 г (точная навеска) измельченного сырья поместить в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавить 200 мл воды, колбу присоединяют к обратному холодильнику и кипятят при перемешивании на электрической плитке в течение 30 мин. Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя первый раз 200 мл, второй раз - 100 мл воды. Водные извлечения объединяют, центрифугируют с частотой вращения 5000 об/мин в течение 10 мин, декантируют в мерную колбу вместимостью 500 мл через 5 слоев марли, вложенной в стеклянную воронку диаметром 55 мм и предварительно промытой водой. Фильтр промывают водой и доводят объем раствора водой до метки (раствор А).

25 мл раствора А помещают в колбу вместимостью 200 мл, прибавляют 75 мл 96 %-ного спирта, перемешивают, подогревают на водяной бане в течение 3 мин для лучшей коагуляции осадка. Появляются хлопьевидные сгустки, которые образуют осадок при отстаивании. Осадок представляет собой сложный комплекс полисахаридов, связанных с белками и минеральными веществами.

Осадок фильтруют через бумажный фильтр и делят на две части для обнаружения восстанавливающих и кислых моносахаридов.

Работа 7. Качественный моносахаридный состав полисахаридов.

Цель: установить качественный моносахаридный состав полисахаридов.

Материал и оборудование: разведенная хлористоводородная кислота (или 10% серная кислота), реактив Фелинга, 0,1 моль/л раствора натрия гидроксида, конц.серная кислота, 0,5 % раствор карбазола (готовят - 0,5 г карбазола растворяют в очищенном 95 %-ном спирте в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят объем раствора этим же спиртом до метки.), колба 25 мл, водяная баня.

Работа 7.1. Обнаружение восстанавливающих моносахаридов.

Ход работы: Половину осадка (работа 6) переносят в колбу вместимостью 25 мл, перемешивают с 5 мл кислоты хлористоводородной разведенной (или 10 мл 10 %-ного раствора кислоты серной) и нагревают на водяной бане в течение 20 мин. К охлажденному гидролизату прибавляют 10 мл реактива Фелинга и нагревают на водяной бане в течение 5 мин. Появляется кирпично-красный осадок меди (I) оксида.

Задание: Проведите наблюдения, запишите вывод. Объясните, почему реакция на восстанавливающие сахара проводится после гидролиза полисахаридов.

 

Работа 7.2. Обнаружение кислых моносахаридов.

Ход работы: вторую часть осадка растворяют в 5 мл 0,1 моль/л раствора натрия гидроксида. К 1 мл полученного раствора прибавляют 0,25 мл 0,5 %-ного раствора карбазола и 5 мл кислоты серной концентрированной, перемешивают и нагревают на кипящей водяной бане в течение 10 мин.

Задание: провести наблюдения, отметить изменение окраски (появляется красно-фиолетовая) при наличии кислоты галактуроновой или глюкуроновой.

 


Дата добавления: 2018-04-04; просмотров: 1864;