Мёллер предложил делить мутации по характеру изменения функционирования гена на
Более простым и доступным является метод выращивания клеток крови. В крови здоровых людей нет делящихся клеток. Однако митоз этих клеток можно стимулировать искусственно, например обработав их фитогемагглютинином ФГА). Спустя один час после инкубации с ФГА начинается синтез РНК, а через 24 ч начинается синтез ДНК. Суспензию лейкоцитов выращивают в культуральной среде 72 ч и затем готовят препараты хромосом. Чтобы остановить клетки в прометафазе, подавляют образование веретена деления веществами с колхициноподобным действием, предпочтительно колцемидом. В специальных условиях время культивирования можно сократить до 48 ч. Для свободного распределения хромосом в плоскости препарата клетки обрабатывают в течение 10-30 мин гипотоническим раствором, а затем фиксируют смесью этанола и уксусной кислоты. Каплю такой суспензии наносят на стекло, высушивают на воздухе и окрашивают. Окрашивание. Наиболее простой способ окрашивания—красителем Гимза или 2%-ным ацетоорсеином, или 2%-ным ацеткармином. Эти красители окрашивают хромосомы целиком, равномерно и интенсивно. Для некоторых диагностических целей (например, для выявления численных аномалий хромосом) этот метод вполне достаточен. Для получения более детальной картины структуры хромосом и идентификации отдельных хромосом или их сегментов используются различные способы дифференциального окрашивания. Дифференциальное окрашивание. Многие исследователи отмечали в хромосомах, окрашенных по обычной методике, некоторую неоднородность в плотности окрашивания отдельных участков. Этот факт оставался без внимания, пока Касперсон с сотр. (1968) [320] не обнаружили, что после обработки акрихин-ипритом флуоресценция по длине хромосомы распределена не равномерно, а в виде сегментов. Затем Касперсон с сотр. показали, что каждую хромосому человека можно надежно идентифицировать с помощью такого метода окрашивания. Вскоре после этого стало ясно, что очень сходный рисунок сегментации можно получить и с помощью красителя Гимза, если дополнить процедуру окрашивания некоторыми приемами. Многие исследователи предложили методики для окрашивания прицентромерных районов. Было показано, что частичная тепловая денатурация также приводит к выявлению сегментов в хромосомах. На Парижской конференции по стандартизации и номенклатуре хромосом человека в 1971 г. [468] полученные к тому времени данные были сопоставлены, и оказалось, что все методы выявляют в принципе одни и те же структуры, но каждый из них специфичен в отношении определенных хромосомных сегментов. Общепринятые методы [341; 200]. Различные типы сегментов обозначают по методам, с помощью которых они выявляются наиболее отчетливо: а) Q-сегменты (quinacrine, акрихин)-участки хромосом, флуоресцирующие после окрашивания акрихин-ипритом или сходными соединениями. б) G-сегменты (Giemsa, Гимза) выявляются при окрашивании красителем Гимза в сочетании с дополнительными процедурами, которые способствуют тому, что краситель адсорбируется наиболее интенсивно на определенных участках. Q- и G-сегменты идентичны. В большинстве лабораторий в повседневной работе предпочитают G-метод, поскольку он не требует использования флуоресцентного микроскопа и окрашенные препараты можно длительно хранить. Однако специфическое преимущество Q-метода состоит в том, что он позволяет даже в интерфазном ядре идентифицировать Y-хромосому человека по яркой флуоресценции. в) R-сегменты (reverse, обратные) окрашиваются после контролируемой тепловой денатурации. Они располагаются между Q(или G-) сегментами. г) С-сегменты (constitutive heterochromatin, конститутивный гетерохроматин) ограничивают прицентромерные районы в обоих плечах хромосомы. 44 2. Хромосомы человека д) Т-сегменты (telomeric, теломерные) расположены в теломерных районах хромосом. Детальное описание этих методов можно найти в многочисленных публикациях. Многие лаборатории используют свои собственные модификации. Химические различия, выявляемые методами дифференциального окрашивания. Природа химических различий, выявляемых этими методами, еще только исследуется. Обычно обсуждаются две основные гипотезы: так называемая ДНК-вая и белковая. Первая исходит из данных о том, что различные участки хромосом человека отличаются по количественному содержанию А—Т (аденин—тимин) и G—С (гуанин— цитозин) пар оснований. Акрихин-иприт связывается преимущественно с АТ-богатыми участками [466, 341]. Акридиновый оранжевый, соединяясь с одноцепочечной ДНК, дает красную флуоресценцию. После контролируемой денатурации R-сегменты окрашиваются в красный цвет. На основании этих данных можно предложить следующую гипотезу: а) Q-сегменты соответствуют участкам, богатым А—Т-парами. б) R-сегменты соответствуют участкам, богатым G—С-парами, которые более устойчивы к тепловой денатурации, чем А—Т-богатые участки. Эта гипотеза не объясняет, однако, все особенности рисунка сегментации. С другой стороны, белковая гипотеза исходит из данных о том, что протеолитическая обработка индуцирует появление G-сегментов. Но поскольку разные ДНК связаны в хромосомах с разными белками, можно полагать, что рисунок сегментации тем или иным образом зависит от особенностей целостного комплекса ДНК—белок. 2) - связывается с белком образующим микротрубочки, и, вследствие этого, блокирует деление клеток на стадии метафазы. Применяется для получения полиплоидных форм растений. - Колхицин используют для лечения подагры (для уменьшения боли) и профилактики семейной средиземноморской лихорадке. 3) Раствор Рингера — сложный физиологический раствор. Применяется в медицине, в физиологии для изучения деятельности тканей вне органов 4) Различают четыре типа строения хромосом: · телоцентрические (палочковидные хромосомы с центромерой, расположенной на проксимальном конце); · акроцентрические (палочковидные хромосомы с очень коротким, почти незаметным вторым плечом); · субметацентрические (с плечами неравной длины, напоминающие по форме букву L); · метацентрические (V-образные хромосомы, обладающие плечами равной длины). Набор хромосом человека, число хромосом во всех клетках человека, кроме половых, равно 46. Этот набор хромосом называют диплоидным (парным). В половых клетках человека хромосом вдвое меньше -23, т.е. эти клетки гаплоидны. При оплодотворении диплоидность восстанавливается. Концы обоих плеч хромосом называют теломерами. 5) Кариоти́п — совокупность признаков полного набора хромосом. 6)Группа А включает хромосомы 1, 2, 3, причем хромосомы 1 и 3 – метацентрики, а хромосома 2 - субметацентрик Группа В состоит из двух хромосом - 4 и 5. Это субметацентрические хромосомы Группа С включает семь аутосом (с 6 по 12) и половую Х-хромосому. Это метацентрические и субметацентрические хромосомы Группа D включает три акроцентрические хромосомы среднего размера: 13, 14 и 15. Группа Е также включает три хромосомы — с 16 по 18. Это метацентрики и субметацентрики, с центромерным Группа F состоит из двух небольших метацентрических хромосом (19 и 20) Группа G состоит из двух аутосом (21 и 22) и Y-хромосомы. Эти хромосомы имеют небольшой размер и относятся к акроцентрическим 7) Мута́ция — стойкое, т.е. может наследоваться потомками, изменение генотипа, происходящее под влиянием внешней или внутренней среды.
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Мёллер предложил делить мутации по характеру изменения функционирования гена на
-гипоморфные(измененные аллели действуют в том же направлении, что и аллели дикого типа; синтезируется лишь меньше белкового продукта),
-аморфные (мутация выглядит, как полная потеря функции гена, например, мутация white у Drosophila),
-антиморфные (мутантный признак изменяется, например, окраска зерна кукурузы меняется с пурпурной на бурую) и
-неоморфные.
9)Гипоморфные мутации —в том же направлении, что и нормальный аллель, но дают несколько ослабленный эффект. Например, у дрозофилы окраска глаз при мутации значительно бледнее.
10) гиперморфные - изменяется признак. колличество белка увеличивается.
Дата добавления: 2018-04-04; просмотров: 347; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!