Цитогенетические особенности больных с вторичной аменореей
Наиболее частые генетические причины вторичной аменореи у женщин – численные и структурные изменения кариотипа. Так, в различных исследованиях доказано, что при тесте на тельца Барра (определение полового хроматина) 85% процентов больных имеют нормальный половой хроматин, а у 15 % наблюдаются аномалии.
Среди численных изменений кариотипа преобладает синдром Шерешевского-Тернера – 10-20% больных вторичной аменореей. Синдром Тернера является следствием полного или частичного отсутствия одной из двух половых хромосом, фенотипически определяется женский пол. Как известно, синдром характеризуется тремя основными признаками: половым инфантилизмом, низкорослостью и соматическими аномалиями. Наиболее характерным проявлением аномалий являются крыловидные кожные складки шеи, укорочение 4-5 пястных и плюсневых костей, «бочкообразная» грудная клетка, широкое и низкое расположение сосков, лимфатический отек стоп, несколько реже встречается коарктация аорты.
У больных ВА встречаются различные генетические варианты при синдроме Тернера, в частности мозаицизм половых хромосом типа 45,XO/46,XX или 45,XO/46,XY. В таких случаях возможно развитие дисгенетических гонад. При наличии в генетической мозаике женского кариотипа 46,XX происходит в меньшей или большей степени развитие овариальной ткани и появление даже дисгенетических яичников, а при включении в мозаику мужского кариотипа 46XY могут развиться элементы тестикулярной ткани и сформироваться дисгенетические яички.
|
|
|
Среди структурных нарушений хромосомного аппарата у больных ВА преобладают:
· Одиночные и парные фрагменты – 25% нарушений.
· Делеции короткого плеча соматических хромосом – 33% нарушений.
· Делеции короткого плеча половых хромосом – 30% нарушений.
· Разрыв центромер – 8% нарушений.
· Преждевременное расхождение хромосом - 4% нарушений.
Также встречаются полиплоидные клетки, и множественные аберрации – 2% нарушений.
По данным различных исследований больные ВА имеют на 24% больше структурных нарушений хромосом, нежели больные первичной аменореей.
Мозаичный кариотип выявляется у 10% больных ВА.
Таким образом, обобщая данные литературы, можно сделать следующие выводы:
1.
2.
3.
4.
ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Объект исследования
Исследование проводилось по типу «опыт - контроль».
В ходе исследования, для разных его этапов, была сформирована выборкабольных лиц, в которую вошли больные девочки-подростки с нарушениями менструальной функции, поступившие на обследование в ГУ «Институт охраны здоровья детей и подростков НАМН», а также выборка здоровыхдевочек-подростков.
|
|
|
Генеральная совокупность, анализируемая в исследовании, представлена в первом случае девочками-подростками до 18 лет, проживающими в г. Харькове, во втором случае – девочки-подростки с различными нарушениями менструальной функции.
Объектом исследования в данной работе являются хромосомы культуры лимфоцитов периферической крови больных женского пола в возрасте до 18 лет (с 7 до 18 лет).
Предмет исследования – частота и типы спонтанных хромосомных нарушений.
В выборку вошли 19 девочек-подростков, поступивших на обследование в ГУ «Институт охраны здоровья детей и подростков НАМН». В институте также было обследовано 19 здоровых девочек в возрасте 14-18 лет (контрольная группа), отобранных при проведении эпидемиологических осмотров за период с 2007 по 2012 годы. Таким образом, нами были набраны 2 группы девочек-подростков: 1 опытная – девочки-подростки с вторичной аменореей, 2 группа – контрольная – здоровые девочки-подростки. Эти группы являлись несвязанными.
Таким образом, при исследовании спонтанного мутагенеза количество метафаз составляло: – в контрольной группе и в группе больных девочек.
Методика приготовления хромосомных препаратов
|
|
|
Постановка культуры лимфоцитов периферической крови состоит из нескольких этапов (Т.Е. Зерова-Любимова, Н.Г. Горовенко, 2003):
1. На первом этапе разливают во флаконы по 5 мл питательной среды RPMI фирмы ПАНЭКО в 2 флакона на каждого пациента, добавляют во флаконы по 0,5 мл эмбриональной сыворотки и 0,1 мл фитогемагглютинина (ФГА фирмы Sigma), 1 каплю антибиотика, затем добавляют по 0,5 мл крови и осторожно перемешивают. Помещают флаконы в термостат при t+370 C на 72 часа.
2. Второй этап: снятие культуры. На 70 часу культивирования в каждый флакон добавляют по 0,3 мл раствора колхицина (в конечной концентрации 10мк/мл), за 2 – 2,5 часа до снятия культуры. Пробирки центрифугируют в течение 5-7 минут при 1000 об./мин., сливают надосадочную жидкость, хорошо взбалтывают осадок, добавляют 2 мл гипотонического раствора KCl (0,555 мг KCl на 100 мл дистиллированной воды), предварительно подогретого до t+370 C. Затем проводят экспозицию в гипотоническом р-ре – 7 минут; затем снова проводится центрифугирование пробирки в течение 10 минут, сливается надосадочная жидкость, взбалтывается осадок.
3. На третьем этапе проводится фиксация препаратов хромосом. Для этого в пробирку добавляется фиксирующая смесь этанола и ледяной уксусной кислоты в соотношении 3:1 на 30-40 минут, затем центрифугируется в течение 10 минут. Эту процедуру повторяют 3 раза, пока смесь не станет прозрачной.
4. Четвертый этап: раскапывание. Клеточную суспензию раскапывают дозатором (на высоте поднятой вверх руки) на мокрые охлажденные предметные стекла и высушивают над пламенем горелки.
Дата добавления: 2018-04-04; просмотров: 322; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!