Инактивированные корпускулярные вакцины
Инактивированные корпускулярные вакцины, в отличие от живых, получают из производственных, предварительно отселекционированных, или свежевыделенных вирулентных и иммуногенных штаммов возбудителей. Государственная служба контроля ветеринарных препаратов (ВГНИИК ветпрепаратов) предъявляет определенные требования к штаммам микроорганизмов, которые могут быть использованы для изготовления средств специфической иммунопрофилактики, включая инактивированные корпускулярные вакцины. Такие штаммы называют производственными. Наряду с ними в таких учреждениях биопромышленности имеются такие же штаммы микроорганизмов, используемые только для заражения подопытных животных при контроле активности вакцин и иммунных сывороток. Такие штаммы называют контрольными. Производственные и контрольные штаммы микроорганизмов должны быть классифицированы, т.е. должна быть установлена их видовая принадлежность, клонирование, т.е. они должны представлять собой однородную популяцию, происходящую из одной клетки или вируссодержащей бляшки, с характерными для нее генетически закрепленными признаками: морфологическими (размер, форма, пигментация колонии; размер и форма клеток или вирионов; наличие или отсутствие жгутиков, капсул, спор); биохимическими (приобретение или утрата клетками способности использовать определенные аминокислоты, фактору роста, способность утилизировать углеводы); антигенными (утрата тех или иных антигенов или их наличие); другие признаки (например, степень чувствительности к физическим, химическим факторам воздействия на бактериальную клетку или вирион). Общебиологической закономерностью считаются появление диссоциантов в потомстве даже одной микробной клетки или вириона. Поэтому в популяции производственных и контрольных штаммов микроорганизмов допускают присутствие диссоциированных форм микроорганизмов в количестве, не превышающем 5% от общего числа клеток (вирионов), при условии, если они не влияют отрицательно на фенотипические свойства штамма. Штаммы, предназначенные для изготовления инактивированных вакцин, анатоксинов или диагностикумов, должны представлять собой культуру типичного представителя определенного рода и вида микроорганизмов, обладать четко очерченным набором свойства, позволяющих отнести этот штамм в этому роду и виду. В живом состоянии эти штаммы должны сохранять высокую вирулентность (меру патогенности). Вирулентность определяют на в каждом случае конкретных восприимчивых крупных и лабораторных животных, на развивающихся эмбрионах птиц или на культурах клеток. Вирулентность выражают ЛД50, ИД50, ТЦД50. Производственные штаммы, используемые для приготовления инактивированных вакцин, анатоксинов и диагностикумов, по антигенности и другим свойствам должны быть идентичными большинству культур, циркулирующих в естественных условиях и вызывающих инфекционные заболевания (эпизоотические штаммы). Кроме того, такие штаммы микроорганизмов должны обладать высокими иммуногенными свойствами, т.е. вызывать состояние невосприимчивости к заражению живыми вирулентными культурами соответствующего вида или серологического варианта у соответствующих сельскохозяйственных и лабораторных животных. Наиболее достоверные сведения об иммуногенных свойствах штамма получают при постановке опытов по прямому заражению предварительно вакцинированных этим штаммом лабораторных животных или естественно восприимчивых сельскохозяйственных и домашних животных. Перечисленные нами требования должны быть общими для всех производственных и контрольных штаммов, независимо от того, какой препарат готовится на их основе. Кроме этих основных требований имеются дополнительные, предъявляемые штаммам, используемым при изготовлении живых и инактивированных вакцин. В зависимости от методов инактивации производственных штаммов микроорганизмов различают: гретые вакцины, полученные прогреванием суточной бульонной культуры микробов при температуре 56-60° в течение 0,5-2,0 часов; анавакцины, полученные при воздействии на культуру формалином (0,3-0,5%) и теплом (39-40°С) в течение 28-30 суток. Кроме того, в зависимости от применяемого химического вещества, способного вызвать инактивацию клеток, бывают спиртовые, ацетоновые, мертиолятовые, хлороформенные, карболовые вакцины. Для получения инактивированных (убитых) вакцин необходимо сохранить антигенные свойства исходной культуры, что требует сложных питательных сред и щадящих способов инактивации микробов. Убитые корпускулярные вакцины менее эффективны по сравнению с живыми, для достижения напряженного иммунитета их нужно вводить в организм многократно. Это на длительное время продлевает иммунизацию, что особенно нежелательно в условиях неблагоприятной эпизоотической обстановки. Наличие у инактивированных вакцин большого количества балластных веществ является причиной аллергических и других побочных реакций и отклонений при их введение.
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Химические вакцины
|
|
|
Химические вакцины готовят из молекулярных антигенов, извлеченных из микробной клетки тем или иным способом (чаще с помощью химических средств или ультразвука). Поэтому их еще и называют молекулярными вакцинами. К ним относят такие вакцины, полученные из растворимых дериватов микробной клетки, например, токсинов, но описывают как анатоксины. Химические (молекулярные) вакцины могут быть получены как методом биосинтеза, так и химическим синезом. До сих пор в практике используют, начиная с 40-гг. нашего века, лишь биосинтетический метод. Однако эксперименты последних лет показывают возможность в ближайшем будущем на практике использовать и химически синтезированные вакцины. Несомненно, что современные химические вакцины, полученные из очищенных антигенов, по иммуногенности все же уступают живым вакцинам. Но в то же время они обладают неоценимыми преимуществами: уменьшена опасность поствакцинальных осложнений, они менее реактогенны, более стандартны, имеется возможность концентрировать антигены в небольшие объемы, адсорбировать их на различных веществах, применять адъюванты и таким образом повышать антигенные свойства биопрепаратов. Более того, химические вакцины могут быть применены в ассоциированных препаратах, т.е. возможно конструирование многокомпонентных препаратов против многих возбудителей. Для создания химических вакцин необходимо, во-первых, расшифровать структуру микробной клетки, особенно специфичность антигенных структур. Из микробной клетки выделяют так называемые протективные антигены – это иммунологически активные вещества, имеющие различную химическую природу, способные при введении в организм обеспечивать формирование специфического иммунитета. Протективные антигены состоят из тех структурных элементов, которые обеспечивают патогенность микроорганизма, но в то же время определяют антигенность и специфическую иммуногенность. Они находятся или на поверхности микробной клетки, или на ЦПМ, или в клеточной стенке, и также могут быть внеклеточными продуктами жизнедеятельности микробных клеток. С химической точки зрения протективные антигены – это макромолекулы. Они являются высокомолекулярными полимерами – гликопротеидами, белково-полисахаридно-липидными комплексами. У всех микроорганизмов – бактерий, вирусов, риккетсий – природа протеиновых антигенов общая. Известно, что антигенность вещества в значительной степени обусловлена его макромолекулярностью – она, в свою очередь, зависит от молекулярной массы антигена. При конструировании химических вакцин имеется возможность укрупнения молекул антигена путем агрегации, образования ковалентных химических связей. Считается общепризнанным, что полимеризация антигена является одним из практических путей повышения его иммуногенности.
Получение химической вакцины биосинтетическим путем включает:
1. подбор соответствующего микроорганизма, максимально продуцирующего протективный антиген;
2. выбор питательной среды, обеспечивающей прирост биомассы и выход протективного антигена. Самыми приемлемыми являются синтетические и полусинтетические среды (отсутствие балластных веществ);
3. отработку условий культивирования, включая глубинное, в биореакторах большой скорости;
4. отработку методов промышленного извлечения антигена из биомассы и его очистки, позволяющие сохранить первоначальную антигенную структуру препарата и обеспечить достаточную степень чистоты препарата при удовлетворительном содержании антигена (экстрагирование биомассы цельных и лизированных клеток: ферментативный лизис, длительное замораживание и быстрое оттаивание, озвучивание, механическая обработка, щелочной лизис).
Очистку антигена производят в зависимости от свойств антигена и применяют изоэлектрическое осаждение кислотами и щелочами, высаливание нейтральными солями, осаждение спиртов, сорбцию и элюцию, ультрафильтрацию, хроматографические способы и т.д. Антигены выделяют как из живой, как и из инактивированной культуры. Для инактивации используют те же физические и химические методы, которые применяют для получения убитых вакцин (формальдегид, фенол, глутаральдегид, солянокислый гидроксиламин, перекись водорода, азид натрия и др.). Главным принципом получения антигена является применение щадящих физико-химических методов, возможное сокращение числа этапов в технологической цепи и повышение иммуногенности препарата. Принципиально важным вопросом является обеспечение безвредности вакцины, ее стерильности (фильтрация, 0,3%-й формалин при 40°С в течение 5 суток, β-пропиолактон и др.). Для сорбции антигенов чаще используют гель гидроокиси алюминия, который одновременно обладает и адьювантным действием. Сорбированные вакцины создают в организме депо, из которого постепенно всасываются антигены, обеспечивающие пролонгированное действие препарата. Это дает возможность уменьшить кратность вакцинации при сохранении высокого профилактического эффекта.
Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 27; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!