ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛЕТУЧИХ ЖИРНЫХ КИСЛОТ В РУБЦОВОМ
СОДЕРЖИМОМ ПО МЕТОДУ МАРКГАМА
В результате ферментации углеводов в рубце образуются летучие жирные
кислоты: уксусная, пропионовая, масляная, высшие жирные кислоты.
Промежуточный продукт расщепления углеводов в рубце – молочная кислота.
Принцип.
Под действием пара происходит возгонка летучих жирных кислот, которые конденсируются в виде дистиллята после охлаждения и титруются раствором едкого натрия до полного связывания с ним кислот. Окончание титрования устанавливают по изменению окраски титруемой смеси в присутствии фенолфталеина.
Оборудование:
аппарат Маркгама, электроплитка с закрытой спиралью, асбестовые прокладки, прокладки обычные, стаканчики химические на 100 мл, пипетки на 5 мл, микробюретка.
Реактивы:
1. 2,5%-ный раствор серной кислоты (по объему); 25 мл серной кислоты смешивают с 976 мл дистиллированной воды. В термостойкую посуду вносят 300 – 400 мл дистиллированной воды, цилиндром отмеривают 25 мл серной кислоты и осторожно по стенке вливают в емкость с дистиллированной водой, смешивают с осторожностью, затем добавляют оставшееся количество отмеренной дистиллированной воды. Дают остыть и переносят в склянку для хранения при комнатной температуре.
2. Насыщенный раствор сернокислого магния в 2,5%-ном растворе
серной кислоты.
3. 0,1 н. раствор едкого натрия; готовят из фиксанала.
4. 1%-ный спиртовой раствор фенолфталеина.
Ход определения.
|
|
|
2 мл профильтрованной рубцовой жидкости вносят в заранее обработанный паром аппарат Маркгама, добавляют 2 мл насыщенного раствора сернокислого магния на серной кислоте. Зажим воронки на аппарате быстро перекрывают, под холодильник подставляют стаканчик и включают плитку под колбой-парообразователем. Под действием горячего водяного пара происходит возгонка летучих жирных кислот. Получаемый дистиллят в количестве 50 мл собирают в стаканчик, затем титруют из бюретки 0,1 н. раствором едкого натра в присутствии фенолфталеина (1 – 2 капли) до изменения окраски раствора. Между пробами аппарат Маркгама снова пропаривают. Общее количество ЛЖК рассчитывают по формуле:
X = (Н · 0,1 · 100) : 2,
где X – общая концентрация летучих жирных кислот в 100 мл рубцовой жидкости, моль/100 мл; Н – количествораствора едкого натрия, пошедшее на титрование; 100– пересчет на 100 мл рубцовой жидкости; 2 – количество мл рубцовой жидкости, взятой для исследования.
Клиническая оценка.
В норме общая концентрация летучих жирных кислот у крупного рогатого окота находится в пределах 6,0 – 44,0 ммоль/100 мл, у овец – 6,0 – 15,0. Общие ЛЖК в рубце и их соотношение в значительной степени зависят от вида животного, состава рационов и времени, прошедшего после кормления. До кормления уровень ЛЖК бывает самым низким, максимум ЛЖК наблюдается через 2 – 6 ч после кормления; на рационе, богатом легкопереваримыми углеводами, – через 2 – 3 ч; на сено-концентратном – через 3 –3,5 ч. Оптимальное время для исследования ЛЖК – через 3 ч после кормления.
|
|
|
Образование кислот брожения в рубце зависит от кормов, приемов их
технологической подготовки. ЛЖК участвуют в энергетическом обмене, в синтезе
глюкозы и составных частей молока. При нарушении всасывания летучих
жирных кислот и их утилизации организмом возникают ацидоз и кетонемия. При
интенсивном содержании животных в кормлении используют большое количество зерновых концентратов, силосованных, гранулированных, пеллетированных, брикетированных кормов, что влияет на скорость образования ЛЖК и их соотношение.
ЛАБОРАТОРНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
ЖЕЛУДОЧНОГО СОДЕРЖИМОГО (СОКА).
В каждой извлеченной порции вначале определяют физические свойства, а
затем проводят химическое и микроскопическое исследование.
Определение физических свойств.
Полученное количество желудочного содержимого измеряют мензуркой. Его цвет, консистенцию, прозрачность, а также наличие в нем слизи определяют визуально, запах – обонянием, относительную плотность – ареометром.
|
|
|
Химическое исследование включает определение рН, свободной и
связанной НСl и ряд других показателей.
О п р е д е л е н и е р Н .
Для этого используют рН-метр или индикаторную бумагу (универсальную, «Фан», «Рифан» и др.).
О п р е д е л е н и е с в о б о д н о й Н С l и о б щ е й кислотности.
Берут в стаканчик 5 мл профильтрованного желудочного содержимого или желудочного сока (можно не фильтровать) и прибавляют в качестве индикатора 1 – 2 капли 0,5%-ного спиртового раствора диметиламидиазобензола. В присутствии свободной НСl реактив окрашивает содержимое в вишнево-красный цвет. После взбалтывания смесь титруют 0,1 н. раствором едкого натра до исчезновения красного окрашивания. Количество раствора щелочи, израсходованное при титровании, умножают на 20 и получают число, выражающее количество единиц свободной НСl в 100 мл желудочного содержимого (сока). Если в пробе свободная НСl отсутствует, то после прибавления диметиламидиазобензола содержимое стаканчика приобретает желтый цвет. Определив свободную НСl, в тот же стаканчик добавляют 1 – 2 капли 1 %-ного спиртового раствора фенолфталеина и продолжают титровать 0,1 н. раствором едкого натра до перехода желтой окраски в неисчезающий красный цвет. Количество раствора щелочи, израсходованное на титрование свободной НСl и добавочное титрование других кислот (до появлениякрасного окрашивания), умножают на 20 и получают величину общей кислотности в 100 мл желудочного содержимого (сока).
|
|
|
Определение связанной НСl.
К 5 мл желудочного содержимого (сока) прибавляют 1 – 2 капли 1 %-ного водяного раствора ализарин сульфоновокислого натрия, после чего содержимое окрашивается в желтый цвет. Титрование проводят 0,1 н. раствором едкого натрия до перехода желтого цвета в фиолетовый.
Таким титрованием можно определить все кислореагирующие вещества
желудочного содержимого, за исключением связанной НСl. Для количественного
определения последней необходимо из величины общей кислотности вычесть
результаты титрования с ализарин сульфоновокислым натрием (при пересчете на
100), тогда получим показатель числа единиц связанной НСl. При отсутствии
связанной НСl от прибавления индикатора получается сразу фиолетовое
окрашивание, а не желтое, как это бывает при положительной реакции.
Если сумма свободной и связанной НСl меньше общей кислотности, то это
объясняется тем, что часть 0,1 н. раствора щелочи расходуется на нейтрализацию
органических кислот (молочной, масляной, уксусной и др.) и фосфорнокислых
солей, большое количество которых может быть при застое содержимого желудка, брожении или при поступлении их с кормом.
Определение дефицита соляной кислоты.
Определяют его только в желудочном содержимом, в котором нет свободной НС l. Следовательно, с помощью этой методики определяют то количество 0,1 н. раствора соляной кислоты, которое приходится израсходовать, чтобы получить положительную реакцию на свободную НСl в 100 мл желудочного содержимого. Для этого к 5 мл желудочного содержимого прибавляют 1 – 2 капли 0,5%-ного спиртового раствора диметиламидиазобензола и титруют 0,1 н. раствором соляной кислоты до появления красного окрашивания. Число истраченных миллилитров, рассчитанное на 100 мл желудочного содержимого, соответствует дефициту соляной кислоты.
Определение желчных п и г м е н т о в .
Присутствие желчи в желудочном содержимом можно определить визуально, в сомнительных случаях прибегают к химическим пробам и количественному определению. Методика определения их та же, что при исследовании мочи.
Определение крови.
Кровь в желудочном содержимом иногда заметна макроскопически, часто в виде комочков бурого цвета. Небольшую ее примесь можно определить микроскопически по эритроцитам или при помощи химических реакций, методика которых такая же, как при исследовании фекалий и мочи.
О п р е д е л е н и е п е р е в а р и в а ю щ е й с п о с о б н о с т и п е п с и н а .
Активность пепсина определяют по способу Метта (видоизмененному, с
сывороточным белком крови лошади). В стаканчик наливают 10 – 15 мл
желудочного содержимого (сока), опускают в него 1 – 2 отрезка стеклянной
трубочки, заполненной свернувшимся белком сыворотки крови лошади, и помещают в термостат, где выдерживают в течение 24 ч при температуре 38 – 39
°С. Длину переварившейся части белкового столбика измеряют при помощи
миллиметровой бумаги (берут средний показатель). Стеклянные трубочки
заполняют белком следующим образом. В трубочки с диаметром просвета 1 –
1,5 мм и длиной 20 – 30 см насасывают сыворотку крови лошади и опускают в
кипящую воду на 1 – 2 мин. Концы трубочек запаивают сургучом или
менделеевской замазкой. Трубочки можно хранить в течение 1 – 2 месяцев, перед
использованием их режут на куски длиной 2 – 3 см. Определение активности пепсина имеет диагностическое значение, в частности позволяет установить ахилию.
Дата добавления: 2020-04-25; просмотров: 331; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!