Молекулярно-генетические методы
Длительность получения результатов культуральным методом исследования неблагоприятно сказывается на эффективности химиотерапии, особенно в связи с вероятностью неправильного выбора схемы химиотерапии при наличии ЛУ у возбудителя и расширением спектра устойчивости МБТ. Основное преимущество молекулярных методов в том, что они являются «быстрыми» методами, позволяющими получить результаты в относительно короткий временной период. Заключение о наличии МБ в диагностическом материале делается на основании выявления ДНК МБ, а вывод о ЛУ – на основании выявления мутаций в генах, ассоциированных с ЛУ.
Выявление ДНК МБТ. В настоящее время в РФ зарегистрировано большое количество тест-систем для выявления ДНК МБТ методом ПЦР, отличающихся способом детекции результатов. Предпочтительными являются тест-системы, исключающие кросс-контаминацию образцов, с детекцией результата в режиме реального времени. Получение положительного результата методом ПЦР позволяет в течение 1 рабочего дня установить наличие МБТ в диагностическом материале.Картриджная технология рекомендована для экстренного выявления возбудителя ТБ с одновременной диагностикой его устойчивости к рифампицину. Однократное выявление ДНК возбудителя без подтверждения микроскопией или культуральными методами требует осторожной интерпретации положительного результата и согласования с клинико-анамнестическими данными.
|
|
|
Методы идентификации. Методы идентификации, основанные на ПЦР, имеют преимущество в специфичности и быстроте анализа по сравнению с культуральными и биохимическими методами.Молекулярные методы дифференциации МБТ от НТМБ основаны на выявлении видоспецифических структур в геноме или белковом спектре возбудителя. Ряд методов направлен только на то, чтобы дифференцировать МБТК от НТМБ, ряд – пригоден для точной видовой идентификации возбудителя. К методам, дифференцирующим МБТК от НТМБ, относится ПЦР, выявляющая вставочную последовательность ДНК IS6110, присутствующую только у МБТК.При обследовании больных с поствакцинальными осложнениями, включая костные поражения, больных ВИЧ-инфекцией и больных с иммуносупрессией, при подтверждении наличия ДНК и/или выделения культуры МБТ, необходимо исключить наличие M. bovis или M. bovis BCG в диагностическом материале. Для этого необходимо провести идентификацию возбудителя с помошью молекулярно-генетических тест-систем
Иммунохроматографический метод (метод поддержан ВОЗ), основанный на определении наличия специфического антигена МБТ МРТ-64, отличается простотой выполнения и обеспечивает идентификацию МБТ за 15 мин. Данный метод может быть рекомендован в качестве основного при проведении идентификации культур, выросших на жидких и/или плотных питательных средах, а также в контаминированных культуральных образцах.
|
|
|
Иммунохроматографический тест на основе выявления белка MPT-64 рекомендован в качестве основного при проведении идентификации культур, выросших на жидкой и/или плотных питательных средах.
Гибридизационные технологии на нейлоновых мембранах (ДНК-стрипы), позволяющие идентифицировать следующие виды НТМБ: M. avium ssp., M. chelonae, M. abscessus, M. fortuitum, M. gordonae, M. intracellulare, M. scrofulaceum, M. interjectum, M. kansasii, M. malmoense, M. peregrinum, M. marinum, M. ulcerans, M. xenopi и M. simiae, M. mucogenicum, M. goodii, M. celatum, M. smegmatis, M. genavense, M. lentiflavum, M. heckeshornense, M. szulgai, M. intermedium, M. phlei, M. haemophilum, M. ulcerans, M. gastri, M. asiaticum и M. shimoidei.
Этим методом можно исследовать культуры с плотной и жидкой питательных сред и получить результат в течение 1-2 дней.
Идентификация МБ до вида может проводиться также с помощью ПЦР в режиме реального времени, секвенирования, MALDI-ToF масс-спектрометрии, высокоэффективной жидкостной хроматографии, тонкослойной хроматографии, результаты которых основаны на выявлении уникальных для каждого вида МБ структур.
Дата добавления: 2020-01-07; просмотров: 192; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!