УСЛОВИЯ РЕПАРАЦИИ ПОВРЕЖДЕНИЙ
Поврежденные клетки, например S. aureus восстанавливаются в питательных средах при температуре около 15 °С, но не ниже 10 °С. Процесс восстановления не мгновенен, а происходит поэтапно. Молоко обеспечивает большую сохранность, чем физиологический раствор или смесь аминокислот.
Показано, что травмированныевысокой температурой споры С. perfringens приобретают повышенную чувствительность к антибиотикам.
Поврежденные радиацией споры Clostridium botulinum неспособны росту расти при низкой температуре.Радиационное повреждение восстанавливается на специальных средах телурит-полимиксиновый желточный агар.
НЕКУЛЬТИВИРУЕМЫЕ ФОРМЫ
При резком изменении условий существования микроорганизмыс помощью различных сенсорных и регуляторных механизмов перестраивают работу своего генетического аппарата, что позволяет им сохранять свою жизнеспособность. Но что происходит, если крайне неблагоприятные условия сохраняются и индукция стрессовых генов не в состоянии спасти клетку? До последнего времени считалось, что у грамотрицательных бактерий следующей стадией является гибель клетки. Но в последние годы появилось достаточно экспериментальных данных, дающих основание утверждать, что следующей "крайней мерой" в реакции грамотрицательных бактерий является переход в состояние "спячки", выражающейся во временной потере воспроизводимости бактерий. У грамотрицательных бактерий морфологически дифференцированные структурные образования, подобные эндоспорам бацилл, не обнаружены, однако в настоящее время накоплено достаточно данных, свидетельствующих о способности неспорообразующих бактерий к длительному существованию во внешней среде в виде клеток со значительно сниженной метаболической активностью, не обнаруживаемых традиционными методами лабораторного культивирования на питательных средах. Подобное состояние покоя с временной потерей воспроизводимости у грамотрицательных бактерий, впервые обнаруженное в лаборатории R.Colwell, было предложено называть не культивируемым (НС), а сами бактерии в таком состоянии ''не культивируемыми формами" (НФ). В настоящее время способность к переходу в не культивируемое состояние обнаружена у широкого круга бактерий.
|
|
|
Ниже представлен неполный перечень бактериальных видов, для которых к настоящему времени продемонстрирована способность к переходу в НС:Enterobacteraerogenes , Enterococcusfaecalis , Escherichiacoli , Klebsiella pneumonia , Legionellapneumophila , Listeriamonocytogenes , Pseudomonasputida , Salmonellaenteritidis , Salmonellatyphimurium , Shigelladysenteria , V ibrio chaleraeи другие.
Значимость некультивируемых форм бактерий.Феномен существования жизнеспособных бактерий в НС имеет серьезное значение в санитарной микробиологии, поскольку установлено, что НФ патогенных, условно патогенных и токсигенных бактерий сохраняют свои вирулентные свойства. Прямые доказательства вирулентности НФ бактерий получены при введении инокулята V . cholerae и энтеротоксигенных E . coli в перевязанную петлю кишечника кролика. НФ Legionellapneumophilia также как и нормальные вегетативные клетки высевались из желточного мешка при инокулировании их в куриные эмбрионы. Надо отметить, что пассажи НФ через организм чувствительного животного являются в большинстве случаев наилучшим способом рекультивации или вывода бактерий из НС. Вероятно, в этом случае бактерии попадают в условия, благоприятные для активного деления, а именно: оптимальная температура, богатая и сбалансированная смесь ростовых субстратов. Было показано, что введение культур двух вирулентных штаммов S . typhimurium, находящихся в НС в течение трех месяцев, внутрибрюшинно беспородным мышам привело в одном случае к гибели животных, а во втором - выделению культуры из селезенки и печени животных. В обоих случаях штаммы были маркированы, что позволило легко отличить их от любого дикого штамма, случайно вызвавшего заболевание. Поскольку в данном случае не определяли точно дозу заражения НФ, довольно трудно оценить LD-50. Однако приблизительная оценка количества некультивируемых клеток методом ПЦР позволяет считать, что LD-50 в случае НФ несколько выше, чем при заражении культивируемыми клетками тех же штаммов. Это может свидетельствовать либо о некотором ослаблении вирулентных свойств, либо о том, что не все некультивируемые клетки сохраняют способность к рекультивации. Одновременное использование других лабораторных приемов рекультивации НФ указанных штаммов, а именно: перенесение их в богатую питательную среду, повышение температуры инкубации до 37° С, кратковременный тепловой шок, облучение слабыми дозами УФ-света не дали положительных результатов. Аналогичные сведения рекультивации НФ разных видов бактерии в лабораторных условиях имеются в научной литературе.
|
|
|
|
|
|
В настоящее время роль НФ в сохранении вирулентных штаммов в объектах внешней среды ипищевых продуктах продемонстрирована для возбудителей сапронозов - иерсиний и листерий.
В некоторых случаях результаты индикации микроорганизмов из пищевых продуктов показывают отсутствие какого-либо количества колониеобразующих единиц (КОЕ), или количество значительно ниже, чем фактическое. Это можно расценить как результат метаболического повреждения клеток, как описано выше. Но некультивируемые клетки находятся в состоянии, которое отличается от состояния поврежденных клеток.
|
|
|
Контрольные вопросы
1. Перечислить и охарактеризовать четыре метода исследования оценки общей численности микроорганизмов.
2. Назовите сущность и способы пробоподготовки.
3. Назовите сущность и способы гомогенизации. Опишите принцип действия гомогенизаторов.
4. Сущность метода стандартного подсчета колоний (СПК).
5. Опишите работу спирального плоттера.
6. Опишите методов мембранных фильтров, в том числе путем введения флуоресцентного окрашивания.
7. Опишите методы микроскопического подсчета колоний: метод агаровых капелек, петрифильмы.
8. В чем сущность методов наиболее вероятного числа и восстановления красителей?
9. Чем отличается метод прямого микроскопического подсчета?
10. В чем сущность методов микробиологической оценки поверхностей: смывов, посевов отпечатков, метода «агаровых колбасок», липкой пленки, аэрозольной пушки?
11. Раскройте сущность и значимость репаративных свойств бактерий и некультивируемых форм бактерий.
Дата добавления: 2019-09-13; просмотров: 328; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!