РУЧНЫЕ МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ
К ручным методам идентификации микроорганизмов относятся: систему индикаторных бумажек, наборы мультимикротестов, метод хроматографии.
Ручные тесты, применяемые для индикации и идентификации микроорганизмов, важны для медицинской микробиологии и широко используются в санитарной микробиологии. Их постановка требует соблюдения стандартных условий проведения. В последние десятилетия разработаны различные тест-системы: API-20E, Enterotube, Mycolube, Patho-Tec, СИБ, ПБДЭ и другие. Система Enterotube представляет собой пластиковую камеру с 12 ячейками, содержащими окрашенные диагностические среды. Засев всех сред производится поступательно-вращательными движениями через камеру петли с посевным материалом. Инкубацию проводят в течение 24 ч при 37 °С. О положительном или отрицательном результате теста судят по изменению цвета среды, разрыву агара (тест на газообразование), или после введения специальных реактивов (тест на образование индола, реакция Вогес-Проскауэра). Каждый признак обозначают определенной цифрой, поэтому полученные данные можно ввести в компьютер с соответствующей программой и получить ответ о таксономическом положении исследуемого штамма.
Система индикаторных бумажек (СИБ). СИБ представляет собой диски, которые пропитанны различными питательными средами. Эти специальные дискиможно вносить в пробирки с бактериямиили предварительно вложить в лунки планшетов, куда вносят исследуемые культуры микроорганизмов. В частности, используют наборы дисков фирмы Minitek Enterobacteriaceae и Minitek Neisseria для идентификации энтеробактерий и нейссерий.Способ позволяюет получить результаты через 4 ч инкубации при 37°С.
|
|
|
Наборы мультимикротестовпредставляют собой планшеты из пластика с лунками. В лункахрасполагаются питательные субстраты с индикаторами продуктов метаболизма бактерий. В лунки помещают суспензии изучаемых бактерий и термостатируют.Для идентификации гемофилов,
энтеробактерий, листерий, стафилококкови др. используют тесты RapID NH, которые позволяют получить ответ не позднее 4-8 ч.
Серологические методы идентификации бактерий.С помощью серологических реакций выявляют бактериальные антигены, использую специфические антитела.Чаще всего в настоящее время пользуются методами ИФА- твердофазный и латекс-агглютинации.
Иммуномагнитное разделение. В основу метода положено использование активированных парамагнитных частиц (размер частиц порядка 2-3 мкм), которые покрываются антителами путем выдерживания при пониженной температуре до 24 ч. После инкубации несвязавшиеся антитела отмывают. После такой обработки частицы, покрытые антителами, добавляют к суспендированной пробе продукта питания, в которой предположтельно содержатся антигены, к которым специфичны антитела частиц (токсины или целые клетки в случае грамотрицательных бактерий). После добавления частиц пробу инкубируют при нормальной температуре от нескольких минут до нескольких часов для того, чтобы антитела связались с антигеном. Образованные комплексы собирают магнитом, после чего элюируют антиген и подсчитывают количество связавшихся частиц. Элюированный и сконцентрированный антиген может быть подвергнут другим методам анализа. Так, в одном из исследований иммуномагнитное разделение было сопряжено с проточной цитометрией для установления присутствия в пробе одного из штаммов Е. coli. После отмывки от парамагнитных частиц клетки были помечены флуоресцентными антителами, что позволило подсчитать их количество с помощью проточной цитометрии. Этот метод обладает чувствительностью в менее чем 10 КОЕ на грамм чистой культуры и примерно 10 КОЕ в пробе говяжьего фарша.
|
|
|
Хроматографические методы. С целью индикации и идентификации микроорганизмов нередко используют хроматографические методы.В объектах исследования определяют химический состав клеточной стенки и некоторые метаболиты микроорганизмов, как промежуточные, так и уникальные.Чаще всего у бактерий определяют короткоцепочечные жирные и тейхоевыекислоты, миколевую кислоту, используя метод газожидкостной хроматографии.
|
|
|
Нередко пользуются тонкослойной хроматографией.Содержание этих веществ у различных родов постоянное и это явление позволяет идентифицировать виды.
Различия в составе липидов используют для идентификации бактерий на уровне рода и даже вида. Однако этот метод имеет определенные ограничения, поскольку содержание жирных кислот в клетках может зависеть от условий культивирования и возраста культуры.
В систематике некоторых бактерий учитывается состав хинонов и других переносчиков электронов, а также пигментов.
Важная информация о взаимном родстве бактерий может быть получена при изучении клеточных белков - продуктов трансляции генов. На основании изучения мембранных, рибосомных, суммарных клеточных белков, а также отдельных ферментов сформировалось новое направление - белковая таксономия. Спектры рибосомных белков относятся к числу наиболее стабильных и используются для идентификации бактерий на уровне семейства или порядка Спектры мембранных белков могут отражать родовые, видовые и даже внутривидовые различия. Однако характеристики химических соединений клетки не могут использоваться для идентификации бактерий изолированно от других данных, описывающих фенотип, поскольку нет критерия оценки значимости фенотипических признаков.
Дата добавления: 2019-09-13; просмотров: 342; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!