ГЖХ (газожидкостная хроматография)
Газо-жидкостная хроматография используется как косвенный метод диагностики дисбактериоза кишекника, основанный на определении в фекалиях летучих жирных кислот
Газовая хроматография - разновидность хроматографии, метод разделения летучих компонентов, при котором подвижной фазой служит инертный газ (газ-носитель), протекающий через неподвижную фазу с большой поверхностью. В качестве подвижной фазы используют водород, гелий, азот, аргон, углекислый газ. Газ-носитель не реагирует с неподвижной фазой и разделяемыми веществами.
Газо-жидкостная хроматография — разделение газовой смеси вследствие различной растворимости компонентов пробы в жидкости или различной стабильности образующихся комплексов. Неподвижной фазой служит жидкость, нанесенная на инертный носитель, подвижной — газ.
Табл. Причины неудач ГЖХ-анализа при диагностике дисбактериоз:
| Ложноположительные (пики есть, бактериологически не выделяются) | Ложноотрицательные (пики отсутствуют, бактериологически выделяются) |
| Продукция уксусной и изовалериановой, пропионовой и н-масляной кислоты S.aureus, продукция пропионовой кислоты E.coli | Наличие в пробе анаэробов, не продуцирующих ЛЖК (Peptococcus magnus, Peptostreptococus intermedius) |
| Эффект «памяти» хроматографических колонок, пневматического дозатора при массовых исследованиях | Низкий уровень продукции ЛЖК некоторыми анаэробами (Bacteroides fragilis) |
| Некоторые глистные инвазии | Некоторые аэробы могут метаболизировать ЛЖК, продуцируемые анаэробами (напр., P.aeruginosa) |
Определение казеинолитической/ протеолитической активности супернатантов фекалий
|
|
|
Этот метод диагностики дисбиоза основаны на том, что различные таксономические виды бактерий, колонизирующие разные отделы кишечника, обладают неодинаковой протеолитической способностью. Как правило, индигенная микрофлора кишечника человека и его фекалий, в частности бифидо- и лактофлора, обладает выраженной сахаралитической, нежели протеолитической активностью. Возрастание суммарной протеолитической активности супернатантов фекалий тесно связано с увеличением количественного содержания многих видов условно-патогенных бактерий в кишечнике или с возрастанием доли бактерий, продуцирующих протеолитические энзимы, колонизирующих стенку кишечника.
Постановка:
1) Среда: в расплавленный МПА вносят 1,5% казеин на 0,2Н NaOH в соотношении 1:10, рН доводят до 7,2-7,4
2) Фекалии+ физ. р-р 1:10, цетрифугирование при 3000 об/мин 15 мин., обработать хлороформом
3) Вносят в лунки по 20 мкл
4) Инкубация при 37ºС 6-8ч
5) Проявление добавлением 5 мл 5% водного р-ра соляной кислоты
|
|
|
6) Оценка результата: 0 степень – менее 10 мм, 1 степень – от10 до 12 мм, 2 степень – от 13 до 16 мм, 3 степень – от 17 мм и более
Рис. ….
Техники посева и питательные среды при исследовании на дисбактериоз
Табл. «Среды для культивирования микроорганизмов для диагностики дисбактериоза»
| Среды | Разведения | Микроорганизмы |
| Мюллера, селенитовая, магниевая | Без разведения | Патогенные энтеробактерии |
| Плоскирева, Левина с синтомицином | 10-1 | |
| Печеночная среда Блаурока | 10-3-10-10 | Бифидумбактерии |
| Агар Хенеля (анаэробные условия) | 10-3-10-7 | Бактероиды |
| МРС-4 (анаэробные условия) | 10-3-10-7 | Лактобациллы и стрептококки |
| Среда Калины или ДИФ-3 | 10-3-10-5 - взрослые 10-5-10-7 - дети | Энтерококки |
| Желточно-солевой агар | 10-3-10-5 | Стафилококки |
| Среда Сабуро | 10-3-10-5 | Грибы рода Кандида |
| Среда Левина | 10-3-10-5 | Энтеробактерии |
| Среда Плоскирева | 10-3 | Энтеробактерии |
| Среда Эндо | 10-5 | Энтеробактерии |
| Малахитовый агар | 10-1, 10-3, 10-5, 10-7 | Синегнойная палочка |
| Кровяной агар | 10-5, 10-7 | Гемолизирующие культуры |
| Среда Вильсона-Блер | 10-3, 10-5, 10-7 | Клостридии |
Рис.
Дата добавления: 2019-09-13; просмотров: 403; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!