Микроскопия: подсчет и исследование морфологии клеток костного мозга.
3.3.1 Подсчет миелокариоцитов в счетной камере и окрашенных мазках костного мозга
Оборудование: бинокулярный микроскоп, счетная камера Горяева.
В счетной камере Горяева подсчет миелокариоцитов проводится в 5 или 100 больших квадратах. В настоящем стандарте приведены 2 способа подсчета.
3.3.1.1 Последовательность процедур (1 способ):
- доставленную в лабораторию взвесь пунктата костного мозга в растворе 3,5 % уксусной кислоты (разведение в 20 раз) тщательно перемешивают;
- заполняют взвесью камеру Горяева, подсчет клеток проводят через 1 - 2 минуты;
- миелокариоциты считают в 5 больших квадратах (аналогично подсчету числа эритроцитов).
Количество миелокариоцитов рассчитывают по формуле:
n x 20x 250 х 106
X =-------------------- = n x109, где
5
Х – количество миелокариоцитов в 1 литре; n - количество миелокариоцитов в 5 больших квадратах; 20 – разведение костного мозга; 250 – коэффициент пересчета на 1 мкл (объем одного большого квадрата 1/250), 106 - коэффициент пересчета на 1 литр.
При высокой клеточности (более 50 клеток в большом квадрате камеры), пунктат костного мозга перед подсчетом следует дополнительно развести в 5 или 10 раз 3,5 % раствором уксусной кислоты. Общее разведение - соответственно в 100 или 200 раз учитывается при расчете количества миелокариоцитов.
3.3.1.2 Последовательность процедур (2 способ).
Если клеточность пунктата низкая (в большом квадрате камеры обнаруживают менее 5 клеток), клетки необходимо считать в 100 больших квадратах (аналогично подсчету лейкоцитов). Количество миелокариоцитов рассчитывают по формуле:
|
|
|
n x 20x 250 х 106
X =-------------------- = n x 50 х 106, где
100
n – количество миелокариоцитов в 100 больших квадратах.
Нормальные величины: количество миелокарицитов колеблется в широких пределах: 41, 6 x109 – 195, 0 x109 в 1 л; до 250, 0 x109 в 1 л [7,8].
3.3.1.3 Подсчет миелокариоцитов в окрашенных мазках костного мозга.
Ориентировочная оценка клеточности костного мозга проводится при микроскопическом изучении окрашенных мазков. Для этого просматривают весь препарат на малом увеличении (10÷40) х 10 и выбирают участок мазка для подсчета, который должен быть тонким (все клетки располагаются в один слой) и, в то же время клеточным – содержать преимущественно костномозговые элементы. Далее изучают препарат под иммерсией при увеличении 100 х 10.
Количество миелокариоцитов считается нормальным, если при просмотре препарата иммерсионным объективом в каждом поле зрения встречается 15 - 25 миелокариоцитов. При количестве миелокариоцитов менее 15 в поле зрения, костный мозг оценивается как гипоклеточный, более 25 - как гиперклеточный.
|
|
|
3.3.2 Подсчет мегакариоцитов во взвеси костного мозга и окрашенных мазках
Подсчет мегакариоцитов во взвеси костного мозга выполняется в камерах Горяева и Фукса-Розенталя:
- мегакариоциты подсчитывают в той же счетной камере Горяева, где проводился подсчет миелокариоцитов (используется взвесь костного мозга в разведении 1:20). Подсчет гигантских клеток проводится по всей сетке камеры Горяева. Количество мегакариоцитов рассчитывают по формуле:
X = n x 20 х 106, где
Х – количество мегакариоцитов в 1 л; n – количество мегакариоцитов во всей камере; 20 – разведение костного мозга.
- для подсчета мегакариоцитов в счетной камере Фукса-Розенталя
используется взвесь костного мозга в разведении 1:20. Подсчет мегакариоцитов проводится по всей сетке камеры Фукса-Розенталя. Количество клеток рассчитывают по формуле:
n x 20
X =---------- х 106, где
3,2
Х – количество мегакариоцитов в 1 л; n – количество мегакариоцитов по всей камере; 20 – разведение костного мозга; 3,2 мкл – объем камеры Фукса-Розенталя.
Нормальные величины: количество мегакариоцитов составляет 50,0 х 106 –150,0 х 106 в 1 л.*
|
|
|
Подсчет мегакариоцитов в окрашенных мазках костного мозга проводится под малым увеличением (10х10 , 20х10). Препарат просматривается в области щеточки, где преимущественно концентрируются мегакариоциты.
Количество в препарате более 2-3 мегакариоцитов считается нормальным.
3.3.3 Морфологическое исследование и подсчет форменных элементов костного мозга (миелограммы)
В настоящем стандарте приведена методика М.И. Аринкина [9] для морфологического исследования костного мозга и подсчета его форменных элементов (миелограммы). Миелограмма – процентное соотношение всех кроветворных клеток костного мозга (миелокариоцитов). После дифференцированного подсчета оцениваются морфологические особенности клеток, кинетика созревания и составляется заключение по миелограмме в целом, при обязательном сопоставлении с показателями гемограммы.
Реактивы:
- иммерсионное масло;
- диэтиловый эфир.
Оборудование:
- микроскоп;
- счетчик для подсчета миелограммы (лейкоцитарной формулы).
Последовательность процедур:
- предварительное изучение окрашенных препаратов костного мозга проводится под малым увеличением (40 х 10);
|
|
|
П р и м е ч а н и е ⎯ Исследование мазка под малым увеличением позволяет выбрать участки препарата для подсчета миелограммы (миелокариоциты и эритроциты лежат в один слой, отдельно друг от друга). Выявляются: клеточность костного мозга; наличие и число мегакариоцитов; состав (характер) костномозгового пунктата; крупные клеточные элементы или скопления клеток (клетки Гоше, клетки Ниммана-Пика, метастазы рака в костный мозг и др.).
- после предварительного изучения мазка, на препарат наносится капля иммерсионного масла, в которую погружают иммерсионный объектив, и проводится подсчет клеток под увеличением (90-100)х10. Подсчитывают все, встречающиеся в поле зрения миелокариоциты, не менее 500 клеток в разных участках 3 или более препаратов, регистрируя их число с помощью счетчика;
- вычисляется процентное соотношение каждого вида клеток.
Дополнительную информацию для оценки костномозгового кроветворения получают при расчете следующих индексов: лейкоэритробластическое соотношение (Л/Э), индекс созревания нейтрофилов (ИСН), индекс созревания эритрокариоцитов (ИСЭ), парциальная эритронормобластограмма, способы, вычисления которых приведены в приложении А.
Дата добавления: 2019-07-17; просмотров: 274; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!