Получение зародышей крс (хирургические и нехирургические способы).
При нехирургическом способе извлечения зародышей животных фиксируют в станке. Прямую кишку освобождают от содержимого и проводят тщательное ректальное исследование. Определяют, сколько желтых тел находится в каждом яичнике. Хвост с помощью тесемки фиксируют. Проводят туалет и дезинфекцию наружных половых органов и промежности. Для прекращения перистальтики прямой кишки эпидурально вводят 10 мл 2%-ного раствора новокаина. Для вымывания зародышей из матки применяют различные инструменты. Большинство авторов используют гибкий одноходовой катетер Фолея с упругим мандреном и надувным баллончиком.
Сперва катетер вводят во влагалище по верхнему его своду и проводят под ректальным контролем через канал шейки матки в рог матки. После того как катетер достигнет в роге матки необходимого положения, мандрен удаляют и в баллончик катетера накачивают 10— 15 мл воздуха. При этом катетер фиксируется в роге матки и промывная жидкость не вытекает мимо катетера.
Закрепив катетер, промывают полость рога матки с помощью шприца
Наполнение матки промывной средой и степень ее оттока контролируют рек- тально.
Для более полного извлечения зародышей верхушку рога матки приподнимают и выпрямляют. Некоторые авторы рекомендуют яйцепровод вблизи верхушки рога матки осторожно зажать большим и указательным пальцами. При этом предотвращается поступление в брюшную полость жидкости, содержащей зародыши. Перед извлечением катетера следует удалить воздух из баллончика. Таким же образом промывают и второй рог.
|
|
|
Собранную в цилиндр промывную жидкость отстаивают 20—35 мин при температуре 20—37 °С, чтобы зародыши опустились на дно, после чего верхний слой удаляют с помощью сифона.
Для обнаружения зародышей исследуют в больших часовых стеклах или чашках Петри под бинокулярной лупой при 10—50-кратном увеличении. Найденных зародышей с помощью пастеровской пипетки переносят в среду для кратковременного хранения . После оценки зародышей их культивируют при 37 °С до момента пересадки или оставляют для хранения.
Хирургическим способом зародышей извлекают при общем или местном обезболивании. Разрезают брюшную стенку по белой линии или чаще в области голодной ямки справа или слева, подтягивают рог матки к поверхности раны, делают разрез вблизи его основания и вставляют специальный катетер. Затем через иглу, введенную в полость рога у его верхушки, или через канюлю, вставленную в яйцепровод, вводят специальную среду, которую вместе с зародышами собирают через катетер. При этом методе получают до 70 % жизнеспособных зародышей. У кролика, свиньи, овцы, коровы и кобылы можно извлекать зародышей непосредственно из яйцепровода (в течение первых 4 дней после осеменения). Однако хирургический способ трудоемок, требует больших расходов, и поэтому в настоящее время его применяют только у мелких животных (овец, коз и др.). После операции у животного значительно снижается уровень молочной продуктивности, имеется риск потери высокоценного донора при общем обезболивании. Его нельзя часто повторять, так как в послеоперационный период образуются спайки, из-за чего возникают трудности в извлечении зародышей, а затем могут развиваться необратимые изменения, приводящие к бесплодию доноров.
|
|
|
Экстракорпоральное оплодотворение и трансплантация зародышей. Современное состояние и основные технологические процессы.
Экстракорпоральное оплодотворение — вспомогательная репродуктивная технология, чаще всего используемая в случае бесплодия.
Во время ЭКО яйцеклетку извлекают из организма самки и оплодотворяют искусственно в условиях «in vitro» («в пробирке»), полученный эмбрион содержат в условиях инкубатора, после чего эмбрион переносят в полость матки для дальнейшего развития.
Как правило, для экстракорпорального оплодотворения стараются получить несколько яйцеклеток.
|
|
|
Крупный рогатый скот. Применяют следующие варианты оплодотворения in vitro и культивирования ранних ооцитов у коров. В первом варианте:
1. Оплодотворение проводят в капле модифицированной среды Тироде.
2. После созревания in vitro ооциты очищают от окружающих кумулюсных клеток и переносят шприцем в микрокапли по пять ооцитов в каждой.
3. Суспензия сперматозоидов объёмом 5 мкл вводится в капли с ооцитами, чтобы достичь концентрации сперматозоидов в каплях 1 млн./мл.
4. Через 48 ч после оплодотворения in vitro определяют наличие дробления ооцитов.
5. Затем эмбрионы, помещают в монослой эпителиальных клеток, для дальнейшего развития в течение 5 дней, т. е. до пересадки постоянному реципиенту на 7 день цикла.
Во втором варианте проводят оплодотворение дозревших in vitro фолликулярных ооцитов в яйцепроводе эстральной крольчихи. Через 20 ч после оплодотворения зиготы помещали на 3 дня в яйцепроводы ложнобеременных крольчих (бывших ранее, т. е. 48 ч назад, в состоянии охоты). Здесь они развивались до стадии морулы и дальнейшей пересадки реципиентам.
В обоих случаях оценённые на жизнеспособность эмбрионы пересаживают в рога матки тёлок с синхронизированной охотой на 7 день полового цикла.
Дата добавления: 2019-02-22; просмотров: 589; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!