Оттаивание спермы, замороженной в соломинках
Для оттаивания спермы в соломинках необходимо использовать водяную баню или специальный оттаиватель, термометр, анатомический пинцет длиной 25-30 см, ножницы, стерильные марлевые салфетки, полотенце, тампонницу с тампонами, пропитанными 96°-ным спиртом-ректификатом, микроскоп с нагревательным столиком, предметные и покровные стекла, 2,9%-ный раствор лимоннокислого натрия и защитные очки.
После очистки и дезинфекции рабочего стола раскладывают весь необходимый инструмент, включают водяную баню или оттаиватель и нагревательный столик с микроскопом, на который кладут чистые предметные и покровные стекла.
Как только температура водяной бани или оттаивателя достигнет рабочего диапазона (38-40°С), надевают защитные очки, открывают крышку сосуда Дьюара, охлаждают погружением в жидкий азот бранши пинцета, быстро подтягивают к верхней трети горловины сосуда канистру со спермой и извлекают одну соломинку, энергично стряхивают с нее остатки жидкого азота и быстро переносят в оттаиватель или водяную баню.
Сперму в соломинках оттаивают в водяной бане или оттаивателе при температуре 38-40°С в течение 8-10 с. Соломинку после оттаивания насухо протирают марлевой салфеткой и, держа за конец, встряхивают, чтобы воздушный пузырек опустился к пробке. Острыми ножницами или специальным приспособлением отрезают пробку с одного конца соломинки, заправляют соломинку в шприц для осеменения, надевают санитарный чехол, затем, аккуратно нажимая на поршень шприца, выдавливают каплю спермы на предметное стекло, лежащее на нагревательном столике микроскопа, стеклянной палочкой добавляют каплю 2,9%-ного раствора лимоннокислого натрия, перемешивают, накрывают покровным стеклом и оценивают по подвижности. Оттаянную сперму необходимо использовать в течение 10-15 мин.
|
|
|
Подготовка спермы для искусственного осеменения.
Подготовка спермы к инсеминации занимает около 2-х часов и включает в себя следующие этапы:
1. - забор эякулята путем мастурбации или разморозка (если сперма была предварительно криоконсервирована);
2. - проведение анализа спермы для оценки ее качества;
3. - разжижение спермы, которое проводится путем ее инкубации при 37°С в течение 30 минут;
4. - сама процедура очистки;
5. - разведение полученного концентрата из функционально здоровых сперматозоидов питательной средой.
Перед эмбриологом стоит задача очистить сперму от следующих компонентов:
- Семенная жидкость - жидкая часть эякулята, содержащая антигенные протеины, которые могут вызвать аллергическую реакцию, и простагландины, которые могут спровоццировать болезненные сокращения матки при попадании в ее полость.
|
|
|
- Посторонние клетки - иммунные и эпителиальные клетки, лейкоциты, незрелые герминативные клетки, а также клеточные элементы.
- Неактивные, поврежденные, мертвые и погибающие сперматозоиды. Разлагающиеся остатки таких спермиев выделяют реактивный кислород, при большой концентрации отрицательно влияющий на выживаемость и функциональность сперматозоидов. Очищение спермы от них облегчает перемещение жизнеспособных сперматозоидов при инсеминации, повышает их способность связываться с мебраной яйцеклетки и проникать через нее.
- Сперматозоиды с дефектами морфологии хотя иногда и способны оплодотворить яйцеклетку, но дальнейшее развитие таких эмбрионов может остановиться или нарушиться.
- Инфекционные агенты - бактерии и вирусы. Сами бактерии, прикрепляясь к поверхности сперматозоидов, снижают их подвижность и оплодотворяющую способность. Кроме того, выделяемые такими микроорганизмами эндотоксины снижают выживаемость спермиев. При попадании в женские половые пути бактерии и вирусы способны вызвать воспаление.
Кроме очистки спермы от примесей необходимо добиться наибольшей концентрации в питательной среде живых подвижных сперматозоидов без патологий - тех, с помощью которых оплодотворения наиболее вероятно. При этом подготовка должна быть проведена с минимальным повреждением мужских половых клеток. При выборе техники подготовки спермы применяют индивидуальный подход в зависимости от ее исходных качеств.
|
|
|
На сегодняшний день существует несколько методов обработки спермы для внутриматочной инсеминации. У каждой из них есть как преимущества, так и недостатки.
Метод флотации (всплывания, swim-up)
1. Этот метод основан на том, что подвижные сперматозоиды самостоятельно перемещаются вверх в промывающей среде, которая наносится на образец спермы. Во время инкубации такого образца активные сперматозоиды всплывают из эякулята в промывающую среду, которая затем аккуратно собирается для использования при инсеминации.
2. Метод относительно прост и нетребователен к лабораторному оборудованию и персоналу.
3. Недостатком такой техники является то, что с ее помощью не отсеиваются сперматозоиды с плохой морфологией, бактерии и вирусы.
4. Затраты времени на процедуру - 1-1,5 часа.
Метод промывания спермы
1. Это традиционный и несложный метод обработки спермы для удаления жидкой ее части. При использовании этого метода сперму смешивают с промывающей средой и центрифугируют. При этом сперматозоиды опускаются к дну пробирки, образуя осадок, который вновь промывается по той же схеме несколько раз.
|
|
|
2. Затраты времени на процедуру - менее часа.
Метод центрифугирования в градиенте плотности
1. Этот метод позволяет отделить жизнеспособные сперматозоиды от всех других компонентов спермы. При использовании этого метода в пробирку, в которой будет проходить очистка спермы, одна на другую аккуратно наслаивают специальные коллоидные жидкости с различной концентрацией. Сверху помещают разведенную сперму. Пробирку с таким "слоеным пирогом" центрифугируют. При этом наиболее подвижные сперматозоиды, осаждаясь на дно пробирки и, проходя через слои коллоидного раствора, очищаются от семенной плазмы, мертвых сперматозоидов, посторонних клеток и бактерий. Остаток жидкости осторожно убирается из пробирки, после чего осадок переносится в другую пробирку и промывается для удаления остатков использованного раствора.
2. Затраты времени на процедуру - от 20 минут до 1 часа.
Метод фильтрации
1. Этот метод используется после предварительного промывания спермы в промывающей среде путем центрифугирования. Осадок, полученный после такого промывания, фильтруется через стекловолокно под действием гравитации. Собранный фильтрат используют для внутриматочной инсеминации.
2. Затраты времени на процедуру - около 10 минут.
Специалист, занимающийся подготовкой спермы к инсеминации, выбирает среди доступных ему методов тот, который сможет обеспечить оптимальный результат для конкретного образца спермы. Эти же методики используются для подготовки спермы в программах ЭКО.
1. Пробная обработка эякулята
2. Если по результатам спермограммы у врача-репродуктолога возникают сомнения, к какой репродуктивной технологии прибегнуть - ВМИ, ЭКО или ИКСИ, возможно проведение пробной обработки спермы.
Так как положительный результат проведения внутриматочной инсеминации, как и любой другой процедуры ВРТ, в большой степени зависит от этапа подготовки спермы, репродуктивные клиники уделяют огромное внимание эффективности своих лабораторий и профессионализму занимающихся такой подготовкой сотрудников.
Дата добавления: 2019-02-22; просмотров: 1629; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!