СКОРОПОСТИЖНАЯ СМЕРТЬ ОТ ЕСТЕСТВЕННОЙ ПРИЧИНЫ. 10 страница

⇐ ПредыдущаяСтр 40 из 112Следующая ⇒

Де Доминицис (De Dominicis) применяет для получения кристаллов гемохромогена
!0 % раствор гидрацин-гидрата; Леха-Марцо (Lecha-Marzo) вымачивает пятно в 10%
оастворе соды, выпаривает его, прибавляет каплю спиртового раствора иода в йодистом
калии, а затем пиридин и сернистый аммоний. Малер получает кристаллы гемохромогена
•: помощью реактива Такайама, состоящего из 10% едкого натра, пиридина и вино-
.•радного сахара аа по 3 см³ и дестиллированной воды 7 смз. Он отмечает про
стоту техники, с помощью которой легко отыскиваются блестящие красные кристаллы.
Реактив должен быть свежим. Лохте (Lochte) и Данцингер (Danziger) рекомендуют
получать кристаллы гематопорфирина, что весьма хлопотливо. Получение кристаллов
гемоглобина из влажных или не слишком засохших кровяных пятен, предложечное
также для отличия крови человека от крови животных, непременимо для судебно-меди
цинских целей. *?•

Опыт учит, что за кровяные следы часто принимают всякие красноватые или буро-красноватые пятна, происходящие от красок, плодов, водорослей или ржавчины. Красно-бурые пятна, находимые на древесных опилках, неоднократно оказывались следами от коры дерева. Равным образом грязь на деревянной рукоятке топора, молотка или кухонной утвари может показаться несведущему подозрительной. Нам были передаваемы в качестве подозрительных пятна от табачного сока и даже от опаления. Опытный сумеет распознать кровяное пятно, если оно не слишком старо, мало и тонко, по цвету и блеску и редко бывает удивлен результатом микроскопического и спектрального анализа. Пятна от клопов, блох, вшей или мух обыкновенно дают положительную реакцию на кровь, так как в экскрементах .етихнасекомых кровь содержится частью в разложившемся, частью же в не-

«. ' " 355

разложившемся состоянии. Уже Шауенштейн (A. Schauenstein) упоминает, что из подобных экскрементов «можно всегда получить геминовые кристаллы, а в большинстве случаев также кровяные тельца». Янечек (Janecck) обратил внимание на то, что из экскрементов мух легко получаются кристаллы гемина и спектр гематина. Нередко в следах от насекомых можно обнаружить части последних или их яичек, на что также указывал Шеф(.р (Schäfer), нашедший в пятне от клопа части насекомого. В пятнах грязи в шейной части рубашки, загрязненной вшами, Шефер нашел кристаллы гемина, части жевательных органов и щетинки, свойственные платяным вшам.

Красные пятна, происходящие от бактерий, могут также симулировать кровяные следы. В наш инсштут был прислан комок, найденный в бочке с клейстером; существовало предположение, что это кровь, происходящая от преступного выкидыша. Комок был буро-красного цвета, шел очной реакции; при микроскопическом исследовании были обнаружены в большом количестве палочки b. prodigiosus и картофельный крахмал. Все реакции на кровь дали отрицательный результат.

Эксперту редко приходится ответить только на вопрос, происходит ли подозрительное пятно от крови вообще, но и решить, какому виду животных принадлежит кровь, главным образом имеется ли человеческая кровь, ибо подобные исследования производятся большей частью в случаях убийства человека или нанесения ему повреждений. Вопрос о принадлежности крови животному приходится решать тогда, когда обвиняемый, объясняет происхождение подозрительного пятна случайным загрязнением благодаря своей профессии мясника, охотника и т. п. ^

Уже было упомянуто, что при микроскопическом исследовании можно различить вид крови только тогда, когда будут обнаружены овальные и ядросодержащие эритроциты. Вообще отличие крови человека от крови млекопитающих нельзя установить но величине кровяных телец, которые нельзя восстановить из сухого пятна никакими добавочными жидкостями. Так как в судебно-медицинских случаях нередки заявления обсиняыюго, что кровяное пятно происходит от убитого животного и т. п., нача, нсь энергичные поиски отличительного признака. Ни белые кровяные тельца, ни различие в кристаллах гемоглобина, ни приводимая Цимке устойчивость красящего вещества крови различных видов животных по отношению к щелочам не дали верного средства для отличия крови человека от крови млекопитающих.

Только в 1901 г. благодаря открытию Краузом (R. Kraus) преципитинов, подробнее изученных Борде (Bordet), Чистовичем, Эрли-хом (Erlich) и др., Уленгутом (Uhlenhut) и почти одновременно Вас-серманом (Wassermann) и Шютце (Schütze) был предложен и разработан верный способ отличия разных видов крови с помощью биологического осаждения белка.

Если животному, напр, кролику, впрыскивать чужеродный белок в форме кровяной сыворотки другого вида животного или человека, то в кровяной сыворотке кролика образуются специфические вещества, обладающие способностью осаждать (преципитировать) растворенный белок только того вида животного, от которого кролику впрыскивалась сыворотка. Оказалось, что кроне крови или сыворотки ее можно пользоваться для инъекции рлзв'ральным и перитонеальным трансудатом, а также содержащей кровь вытяжкой из органов и вытяжкой из засохшей крови.

• Следовательно реакция преципитации, как подтвердили уже Вас-серман и Шютце, а также Уленгут, является специфической не для крови, а для бел к а. Для установления при-

356

надлежности крови тому или другому виду животного необходимо предварительно доказать присутствие крови в подозрительном пятне с помощью употребительных способов.

* Полученная от определенного вида крови (белка) преципитирующая -сыворотка реагирует еще только лишь с родственным видом крови, кроме той, для которой она специфична. Конечно с последней она реагирует сильнее и в более высоком разведении, с первым — слабее и только в соответствующей концентрации.

Если животному впрыскивалась человеческая кровь, то сыворотка его действует преципитирующим образом и на кровь обезьяны, но это ограничение специфичности сыворотки в наших широтах едва ли имеет значение. Для отличия более пригодно применение агглютининов ¹. Диферен-циальная возможность исчезает также для таких родственных видов животных, как напр, лошадь и осел, овца и коза, собака и лисица.

Вслед за работой Уленгута появились опыты, подтвердившие пригодность преципитиновой реакции не только для свежей крови и ее раст-ьоров, но и для вытяжки из старой засохшей крови, следовательно для случаев, наиболее часто встречающихся в судебно-медицинской практике.

Этот способ издавна завоевал себе повсюду право гражданства. В Пруссии он введен официально декретом от 8 сентября 1903 года, в Австрии — от 13 августа 1903 года. Однако эта реакция должна производиться опытными экспертами в специальных институтах, снабженных необходимыми приспособлениями. Поэтому в старой Австрии сначала подобные исследования производились только в судебно-медицинском инлитуте венского университета, затем в таких же институтах главных провинциальных городов. Необходимая сыворотка изготоявляется в Вене в государственном серотерапевтическом институте и в отдельных судебно-медицинских инстит тах 2,

Для получения прецшштирующей сыъорслкь с целью судебно-медицинского распознавания вида крови служат молодые кролики — самцы. Последним с многодневными промежутками впрыскивается сыворотка человеческой крови, полученной из плаценты или путем венесекций, и, что мало рекомендуется (H. Pfeiffer), из свежих трупов. Инъекции производятся внутривенно или внутри брюшинно. После 4-—5 впрыскиваний из уха животного добывается немного крови для пробы с целью убедиться в образовании преципитина и в достаточно высоком титре антисыворотки. Последняя должна вызвать помутнение с последующим осадком в растворе челове-' ческой крови в разведении 1 : 1000 почти тотчас же, а в разведении 1 : 20 000 через несколько минут. В случае положгтельного результата животное умерщвляют, и кровь извлекается из вскрытого сердца или сонных артерий, или же, если кролика оставляют в живых,— из ушей. Кровь берется стерильным путем. Отстоявшаяся сыворотка должна быть прозрачна или фильтруется. Мутная опалесцирующая сыворотка непригодна. Полученная сыворотка может сохраняться в жидком состоянии, лучше всего безо всяких примесей ³, в запаянных темных трубочках, или в сухом виде на темной бумаге в каплях, соответствующих единичной дозе в 0,1 см³.

i.Landsteiner und v. d. S с h e e r, Ref. D. Ztschr. f. d. ges. ger. Med., 1925, т. 5, стр. 229.

i Karganow рекомендовал в сухом виде. Прибавление хлороформа делает вскоре сыворотку недеятельной.

³ В РСФСР преципитирующие сыворотки изготовляются в Центральной судебно-медиц. лаборатории Наркомздрава в Москве и в некоторых областных суд.-мед. лабораториях на периферии. Кроме того— в Томском суд.-мед. институте. В УССР— Харьковским суд.-мед. институтом. Ред.

Для судебно-медицинских целей не следует пользоваться сывороткой со слишком высоким титр ом, ибо последняя может вызвать помутнение раствора гетерогенного белка и ввести в заблуждение относительно вида крови. Поэтому в судебно-медицинских случаях необходимо всегда производить, несколько контрольных проб, а именно: с заведомо человеческой кровью, с вытяжкой из исследуемого кровяного пятна без прибавления антисыворотки, с экстрактами крови животных разных видов и с физиологическим раствором поваренной соли, применявшимся в качестве средства для извлечения, с прибавлением антисыворотки. На практике проба производится следующим образом. Исследуемый объект подвергается извлечению 0,85%. раствором поваренной соли в маленьких.пробирках шириной в 4—5 мм, применяющихся в серологической практике. Пробирки должны быть совершенно чисты и прозрачны, стенки их не должны опалесцировагь. Измельченные частички подозрительного пятна помещают в пробирку и подвергают извлечению достаточно долгое время в леднике. Если кусочек материи впитал в себя всю поваренную соль, то его выжимают. Если полученная вытяжка недостаточно светла и прозрачна, то ее центрифугируют или фильтруют.

Что касается концентрации вытяжки, то она должна быть вначале по возможности высокой, желтоватого цвета, с остающейся после встряхивания продолжительное время пеной. Вытяжки красноватого цвета разводят до бледно-желтой окраски. Максимальное разведение должно еще давать белковую реакцию от прибавления азотной кислоты. С помощью этой реакции можно убедиться в пригодности бесцветной вытяжки для сывороточной пробы Ч Вообще отрицательный результат сывороточной пробы было бы ошибочно отнести за счет отсутствия человеческой крови.

К вытяжке в количестве 0,5 см⁸ прибавляют десятую часть противо-человеческой сыворотки кролика, с испытанным заранее преципитирующим действием по отношению к крови человека. Стекая по стенке пробирки, антисыворотка кролика образует нижний слой жидкости. Если имеется засохшая на бумаге сыворотка, то прибавляют половину засохшей капли> причем сыворотка отделяется или же помещается в вытяжку путем соскабливания с помощью обожженной платиновой иглы.

Положительный результат реакции распознается по вскоре наступающему помутнению вытяжки, особенно Заметному на границе двух слоев в виде серовато-белого кольца; через %—У2^часа образуется осадок в виде хлопьев. Поздно появляющаяся муть не принимается во внимание. Вышеупомянутые контрольные пробы должны производиться всегда; контрольный раствор остается прозрачным за исключением пробирки с заведомо человеческой кровью, которая должна дать положительный результат. Лучше всего производить реакцию в точно обозначенных пробирках на маленьком штативе, рассматривая их в проходящем свете на темном фоне (рукав темного халата, черная матовая пластинка).

При малых кровяных пятнах необходимо экономить исследуемый материал. В этом случае полезно применять предложенный Гаузером (Hauser '²) капиллярный метод, состоящий в том, что в капиллярную трубку из двух полых предметных сгекол насасывают по 1 капле вытяжки и антисыворотки до соприкосновения. В случае положительного результата на месте соприкосновения обеих жидкостей появляется кольцо, быстро распространяющееся; затем выпадают хлопья. В венском судебно-медицинском*

1 Bachrach. Vierteljatusschr. f. ger. Med., 1910, т. 40, стр. 261.

2 Munch. Med. Wochen., 1904, № 7.

институте в течение многих лет применяется исключительно сходный с методом Гаузера, описанный Веркгартнером (Werkgartner¹) способ, по которому в пробирках шириной в 1,5—2 мм переслаивается преци-питин и раствор крови. При этом преципитация обнаруживается резко ограниченным диском помутнения, погружающимся на дно в виде хлопьев. Этот способ отличается экономией исследуемого материала, высокой чувствительностью, отчетливым результатом реакции даже с мутным раствором и возможностью повторного контроля результата через несколько часов и даже дней. Якобсталь (Jakobstahl²), Маркс³ и Г. Штрассман ⁴ рекомендуют исследование под микроскопом в затемненном поле; Елце (Oelze) получал хорошие результаты с помощью этого способа в висячей капле.

Если речь идет не о крови человека, а об определенном виде крови животного, то следует применять антисыворотку, реагирующую с белками этого вида животного. Если ее нет, то необходимо ее приготовить, что затягивает дачу заключения. Это обстоятельство может иметь значение в судебных случаях, поэтому необходимо поставить суд об этом в известность. Если вопрос идет не о крови убойного скота, сыворотку которого легко достать для инъекций в естественном виде, а о крови диких животных — в судебных случаях браконьерства и т. д., то в качестве материала для инъекций можно применять засохшую кровь, растворенную в физиологическом растворе поваренной соли, введя ее внутрибрюшинно. Таким образом можно получить антисыворотки с высоким титром.

В отдельных случаях может представиться необходимым применение нескольких антисывороток при исследовании кровяного пятна, напр, человеческой или свиной аати-сыворотки, если пятно может происходить от крови человека и свиньи. В подобных случаях следует соответствующим образом увеличить и количество контрольных проб.

При исследовании жидкой крови приготовляют разведения ее при помощи 0,85% раствора поваренной соли до слабо красноватого цвета и пользуются ими для биологической пробы.

Реакция преципитации дает отрицательный результат при крайне малых размерах кровяного пятна, содержащего только следы белка ^ь. Гниение крови, выраженное не слишком сильно, не мешает реакции. Препятствие может быть создано химическим воздействием на кровяное пятно, напр, ржавчины, а также высокой температурой (Ferrai⁶), за исключением случаев, когда действию последнего подвергается засохшая кровь.

Техника приготовления и метод тит p ова ни я -n p еци пи« тирующих сывороток.

(составили д-р Я.Левин и д-р С. Фейгина).

Центральная судебно-медицинская лаборатория НКЗдрава готовит сыворотки: противочеловеческую, противосвиную, противолошадиную, противорогатого скота (ко-рова, баран, коза), противобычью и противокуриную.

Другие антисыворотки готовятся только в исключительных случаях, когда но указаниям следственных властей требуется проверить показания подсудимого.

Для приготовления преципитирующих сывороток Центр, суд.-мед. лаборатория

i D. Ztschr. f. d. ges. ger. Med., 1926, т. 8. a Münch. Med. Wochen. 1910, стр. 215. 8 Vierteljahres f. ger. Med. 1920, т. 59, стр. 149.

* Deut. med. Wochen. 1921, № 20.

» См. A. M. M a r x, Vierteljahres f. ger. Med., 1920, т. 53, стр. 149 о новых способах диференциации мельчайших кровяных следов.

• Bolletini della R. Accademia Medica di genova 1901, год изд. 16, № 7.

Öö9

почьзуется исключительно кроликами весом в 2—2% кг. Попытки получить преципити-рующие сыворотки от лошади и козы пока не увенчались успехом.

v Антигеном служит соответствующая жидкая сыворотка или полученный из нее
'свернутый белок. Для сохранения впрок сыворотки прогревают в течение 30 минут в во
дяной бане при 56° и прибавляют к ним небольшое количество хлороформа. ^

Для получения свернутого белка сыворотку разводят в 10 раз дестиллированной 'одой, прибавляют к ней i'_B общего объема насыщенного раствора поваренной соли и ческолько капель ледяной уксусной кислоты и кипятят до полного выпадения белка. Бепок отфильтровывают через бумажный фильтр, отжимают и хранят в толуоле (метод Фуйвата— Fujiwata). В исключительных случаях лаборатория пользуется высушенной сывороткой.

Кролики иммунизируются по методам:

1) Уленгута: 1,0 — 2,0 — 3,0см⁸ сыворотки вводится в ушную вену крочика
с промежутками в 5—6 дней.

2) Пфейфера: 1,0—2,0—3,0 см⁸ ежедневно; проба через 7 дней. Если сыво
ротка слаба, вводится 2 дня под ряд %—' ^см3 сыворотки в брюшную полость (во
избежание анафилаксии), затем опять 1,0—2,0—3,0 см⁸ ежедневно в ушную вену;
спустя 7 дней вторая проба, и т. д.

3) Форне (Fornet) и Мюллера: 5,0—10,0—15,0 см« в брюшную полость Здня
под ряд.

4) Райского: иммунизация малыми количествами сыворотки; 0,2 — 0,4—
—0,5 см⁸ с большими промежутками в 10—-14 дней.

Во избежание анафилаксии за два дня до повторного впрыскивания в ушную вену в брюшную полость вводится антиген в количестве 0,5—1,0.

5) Метод Фуйивата: иммунизация свернутым белком широко применяется в
лаборатории. Тонкая эмульсия белка в физиологическом растворе (1—2 горошины
в5 см⁸ физ раствора) вводится через день-два в ушную вену 10 раз. '

Применяются в лаборатории и другие методы иммунизации (Р. Крауза и др.).

Спустя 8—10дней,а по методу Райского через 10—14дней после последней инъекции берется проба для определения крепости и специфичности сыворотки.

Из ушной вены берут приблизительно 5 civ³ крови. Для ускорения процесса свертывания кровь на 20—30 минут ставится в термостат при 37°. Отстоявшуюся сыворотку отсасывают пипеткой, центрифугируют, определ1ют ее титр и специфичность. Если сыворотка годна для судебно-медицинских целей, кролика подвергают голоданию в течение 24 часов, а затем обескровливают частично или полностью.

Взятие крови производится в Центр, суд.-мед. лаборатории путем пункции сердца. Кролика привязывают к операционному столу; шерсть в области сердца выстригают, место пункции обтирают спиртом, иглу довольно крупного калибра вкалывают в 2—3-меж-реберное пространство немного правее грудной кости и насасывают кровь в шприц Этим способом можно получить or 50 до 75 см³ крови, иногда больше. Прооирки с кровью ставятся на 20—30 минут в термостат при 37°, а затем переносятся в ледник. На следующий день отстоявшаяся сыворотка сливается, центрифугируется, для стерилизации фильтруется через маленькие фарфоровые свечи типа Шамберляна или асбестовые фильтры Цейтца (Seitz) и тут же разливается в ампулы по 1 см⁸.

Отсутствие мути и опалесценции, стерильность, высокий титр и специфичность являются условиями пригодности преципитирующей сыворотки для судебно-медицинских целей.

Прозрачность и стерильность сыворотки достигаются фильтрацией через свечи Беркефельда, Шамберляна, Зильбершмидта или асбестовые фильтры Цейтца. Труднее избежать опалесценции. Отчасти это удается, если подвергать кроликов голоданию за сутки до взятия крови. Опалесцирующие сыворотки бракуются.

Определение крепости и специфичности преципитирующей сыворотки производится следующим образом: в абсолютно чистые а гпмэтчна тонные пробирки налиьаюг по 1 с«³ соответствующего антшена в разведении 1/1000, 1/5000, 1/10000, 1/20000 и для контроля 1 см⁸ физиологического раствора, затем стерильней пастеровской пипеткой опускают на дно каждой пробирки, под антиген, приблизительно по 0,1 преципитирующей сыворотки. На границе между обеими жидкостями —антигеном и антисывороткой появляется белое кольцо мути.

Дата добавления: 2019-02-13; просмотров: 179; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 35 36 37 38 394041 42 43 44 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!