Вопрос 1. Луи Пастер – основоположник микробиологии как науки. Влияние работ Пастера на развитие медицинской микробиологии. Формирование прикладной иммунологии.

Стр 1 из 10Следующая ⇒

Билет №1 Капсула, ее биологическая роль. Методы выявления. Некоторые бактерии (пневмококки, клепсиеллы и др.) образуют капсулу. Капсула – слизистое образование, прочно связанное с клеточной стенкой, имеющее четко очерченные внешние границы. Капсула различима в мазках-отпечатках из патологического материала, выявляется с помощью специальных методов окраски, создающих негативное контрастирование веществ капсулы. Обычно капсула состоит из полисахаридов, иногда из полипептидов (сибиреязвенная бацилла). Капсула выполняет защитную роль: препятствует фагоцитозу бактерий. Многие бактерии образуют микрокапсулу. От капсулы следует отличать слизь, которая в отличие от капсулы, четких границ не имеет. Окраска по Гинесу-Бурри. Этап Вещество Время обработки Негативное контрастирование Черная тушь (смешивается с культурой и высушивается) Фиксация В пламени спиртовки Окраска микробных клеток (по Гинсу) Водный фуксин 5 мин Промывка Вода 5-10 сек Морфология кокков и заболевания, вызываемые ими. Кокки- неподвижные бактерии шаровидной формы Микрококки – отдельно расположенные клетки (или в виде) Диплококки (попарно расположенные кокки) - 1) имеющие с противоположных сторон ленцетовидную форму (возбудители пневмонии – пневмококки, напр. ) 2) имеющие форму бобов, оброщенных вогнутой стороной друг другу (возбудители менингитов – менингококки, возбудители гонореи - гонококки) Стрептококки – клетки округлой или вытянутой формы, составляющие цепочку. Делятся в одной плоскости, сохраняют связи, между собой. Вызывают гнойные поражения кожи, слизистых оболочек, внутренних органов (Streptococcus pyogenes) Тетракокки - располагающиеся по 4, делятся в двух взаимноперпендикулярных плоскостях. Сарцины - бактерии обычно сферической формы, которые после деления (в трёх плоскостях) не расходятся, а образуют скопления, располагающиеся в виде пакетов (8, 13 и более клеток). В патологии человека значения не имеют; могут обитать в водоёмах, на коже. Стафилококки – клетки округлой или вытянутой формы , делятся во взаимно перпендикулярных плоскостях, характерно расположение микробных клеток «виноградными гроздьями» в чистой культуре. Золотистый стафилококк – возбудитель более 100 заболеваний, вызывает гнойный поражения практически любых органов и тканей. Задача. При микрокопировании препаратов, приготовленных из срезов головного мозга собаки, покусавшей несколько человек, в цитоплазме клеток ЦНС обнаружены включения. Какими микроорганизмами инфицирована собака? Как называются выявленные включения? Какова природа этих включений? Ответ: Вирус бешенства. Выявленные включения называются тельцами Бабеша — Негри , являются скоплениями вирионов (или их отдельных компонентов) в цитоплазме.

Билет №2 Спорообразование у бактерий. Стадии, функциональное значение. Споры— особая форма покоящихся клеток со сведённой к нулю метаболической активностью. Они резистентны к нагреванию, радиации, высыханию и воздействию химических веществ. Благодаря этим свойствам, споры могут длительно сохраняться и обеспечивать сохранение вида в неблагоприятных условиях. Подготовительная стадия споруляции сопровождается прекращением деления и увеличением количества липидных включений. Рис. 4-14. Расположение спор у бактерий. Стадия предспоры споруляции обычно начинается бурно. В клетке появляется эллиптическая оболочка, окружающая участок цитоплазмы с изменёнными плотностью и тинкториальными свойствами. Подобное образование обозначают терминами «предспора», или «примордиальная спора». Третья стадия споруляции включает появление оболочки (обычно в течение 10 мин после образования предспоры) и ещё большее увеличение коэффициента светопреломления. Стадия созревания споры сопровождается её уплотнением и снижением метаболической активности клетки. Споры могут располагаться центрально, субтерминально или терминально (рис. 4-14). У видов Bacillus диаметр споры не превышает ширины клетки, тогда как у многих видов Clostridium — значительно превышает. В ряде случаев клетка приобретает весьма характерный вид, нередко являющийся диагностическим признаком. Окраска по Цилю-Нильсену и ее этапы. 1. на фиксированный мазок наносят карболовый фуксин через полоску фильтровальной бумаги и подогревают до появления паров 3-5 мин. 2. снимают бумагу, промывают мазок водой 3. На мазок наносят 5% серную кислоту на 1-2 мин. 4. Промывают водой 5. Докрашивают мазок водным раствором метиленового синего 3-5 мин. Промывают водой, высушивают Вирусы, вироиды, прионы, особенности структуры, отличительные свойства. Вызываемые заболевания. Вирусы – мельчайшие микроорганизмы, не имеющие клеточного строения, белоксинтезирующей системы, содержащие только один тип нуклеиновый кислоты (ДНК или РНК). Вироиды – небольшие молекулы кольцевой, суперспирализированной РНК, не содержащие белка, вызывающие заболевания растений. Прионы – белковые инфекционные частицы, являющиеся агентами белковой природы, имеющие вид фибрилл размером 10-20 * 100-200 нм. Вызывают у человека и животных энцефалопатии в условиях медленной вирусной инфекции (куру, болезнь Крейтцфельдта-Якоба) Задача. При микроскопии мазков из зев, больного с тяжелой некротической ангиной, обнаружены палочки, располагающиеся под углом друг к другу, с утолщениями на концах. Какие это могут быть микроорганизмы? Какие дополнительные методы окраски нужно провести для уточнения морфологии данных бактерий? Ответ: Это могут быть Corynebacterium diphtheriae, возбудитель дифтерии. Необходима окраска по Нейссеру, позволяющая выявить зёрна волютина, характерные для данной бактерии.

Билет №3 Фазово-контрастный микроскоп. Устройство, применение. Метод фазово-контрастной микроскопии основан на том, что живые клетки и микроорганизмы, слабо поглощающие свет, тем не менее способны изменять фазу проходящих через них лучей (фазовые объекты). В разных участках клеток, отличающихся показателем преломления и толщиной, изменение фаз будет неодинаковым. Эти разности фаз, возникающие при прохождении видимого света через живые объекты, можно сделать видимыми с помощью фазово-контрастной микроскопии. Фазово-контрастная микроскопия осуществляется с помощью обычного светового микроскопа и специального приспособления, куда входят фазово-контрастный конденсор с кольцевыми диафрагмами и фазовая пластинка, имеющая форму кольца. Для первоначальной наводки используют вспомогательный микроскоп, с помощью которого добиваются того, чтобы через кольцевую диафрагму конденсора в объектив проникало лишь кольцо света. Луч света, пройдя через прозрачный объект, расщепляется на два луча: прямой и дифрагированный (преломленный). Прямой луч, проникнув через частицу, фокусируется на кольце фазовой пластинки, а дифрагированный луч как бы огибает частицу, не проходя через нее. Поэтому оптические пути их различны и между ними создается разность фаз. Она сильно увеличивается с помощью фазовой пластинки и благодаря этому контрастность изображения повышается, что позволяет наблюдать не только фазовые объекты целиком, но и детали строения, например, живых клеток и микроорганизмов. Простые методы окраски. Простые методы окраски – с использованием одного красителя. (Например водный фуксин Пфейффера и метиленовый синий Леффлера) Характеристика палочковидных бактерий и заболевания, вызываемые ими. ПАЛОЧКОВИДНЫЕ БАКТЕРИИ – РАЗЛИЧАЮТСЯ ПО РАЗМЕРАМ, ФОРМЕ КОНЦОВ КЛЕТКИ И ВЗАИМНОМУ РАСПОЛОЖЕНИЮ. ДЛИНА КЛЕТОК 1-8 МКМ, ТОЛЩИНА – 0,5-2 МКМ. Палочки-коккобактерии – бордетеллы (возбудители коклюша), бруцеллы (бруцеллёз) Одиночно расположенные палочки правильной формы с закругленными концами – бактерии из семейства кишечных (эшерихии, сальмонеллы (сальмонеллёз), шигеллы) Палочки неправильной формы – коринебактерии (например возбудитель дифтерии) Ветвящиеся – актиномицеты, образуют мицелий – нитевидные переплетающиеся клетки. Вызывают актиномикоз. Слегка изогнутые (вибрионы) – холерный вибрион (холера) Риккетсии – возбудители сыпного тифа, марсельской лихорадки, ку-лихорадки. Задача. Из крови больного с подозрением на токсоплазмоз приготовлен тонкий мазок. Какой метод окраски необходимо использовать? Какие морфологические признаки имеет возбудитель? Ответ: Окраску по Романовскому-Гимзе: ядро окрасится в рубиново-красный цвет, цитоплазма в голубой. Характерная форма – апельсиновая долька или полемесяц размером 4-7 * 1,5 – 2 мкм.

Билет №4 Морфология, ультраструктура и химический состав бактерий. Протопласты и сферопласты. Основные отличия эукариот и прокариот. Окраска по Романовскому-Гимзе. Краска состоит из смеси: азура, эозина, метиленового синего (перед окраской ее растворяют в дистиллированной воде 1:10. Готовят мазок. препарат фиксируют метиловым или этиловым спиртом 5-15 мин. Окрашивают препарат 30-40 минут. Высушивают и микроскопируют Спирохеты и риккетсии окрашиваются в сиреневато-синий цвет, или розовый Ядра простейших в ярко-розовый Простейшие. Классификация. Морфологические особенности. Вызываемые заболевания. Простейшие – эукариотические одноклеточные микроорганизмы, входят в подцарство Протозои царства Животные, размеры 5-30 мкм. Снаружи окружены мембраной, ядро эукариотическое, в цитоплазме присутствует ЭПС, лизосомы, митохондрии, рибосомы. Могут передвигаться посредством жгутиков, ресничек или псевдоподий. Способны образовывать при неблагоприятных условиях покоящиеся стадии – цисты. 3 типа патогенны для человека: Саккомастигофоры: подтип Мастигофофоры (жгутиконосцы, т.е. имеют жгутики): трипаносома (сонная болезнь), лейшмания (кожная и висцеральная форма лейшманиозов; есть 1 жгутик), трихомонады (трихомоноз, паразитирование в кишечнике; есть 4 свободных жгутика, 1 ундилирующая мембрана), лямблии (лямблиоз). Подтип Саркодовые: дизентерийная амёба (передвигается с помощью псевдоподий, вызывает амёбную дизентерию) Апикомплексы: из класса Споровиков патогенны: токсоплазма (токсоплазмоз), кокцдии (кокцидоз), саркоцисты (саркоцистоз), малярийные плазмодии (малярия), бабезии (пироплазмоз), изоспоры (изоспороз). Цилиофоры: балантидии (имеют многочисленные реснички, подвижны, паразиты толстого кишечника, вызывают балантидиаз) Микроспоридии: Внутриклеточные паразиты всех групп животных (чаще— членистоногих). Лишены митохондрий. Вызывают нозематозы – заболевания пчел, тутового шелкопряда, рыб, иногда человека. Задача. В материале больного с подозрением на сифилис были обнаружены мелкие, извитые, подвижные формы бактерий, напоминающие спираль. Какие это могут быть бактерии? Как был приготовлен препарат для определения подвижности бактерий и с какой целью проводится изучение подвижности? При использовании какой системы светового микроскопа изучается подвижность микроорганизмов? Ответ: Спирохеты. Подвижность определяют методом раздавленной капли или методом висячей капли вроде как. Подвижность – важный диагностический признак, позволяет дифференцировать возбудителей. С помощью темнопольной микроскопии.

Билет №5 Люминесцентный микроскоп, устройство, применение. Люминесцентный метод микроскопии занимает важное место в исследовании микроорганизмов. Люминесценцией (или флюоресценцией) называют излучение клеткой света за счет поглощенной энергии. Только немногие бактерии (люминесцирующие) способны светиться собственным светом в результате интенсивных процессов окисления, протекающих у них со значительным выделением энергии. Большинство микроорганизмов приобретает способность люминесцировать, или флюоресцировать, при освещении их ультрафиолетовыми лучами после предварительной окраски специальными красителями — флюорохромами. Поглощая короткие ультрафиолетовые волны, объект излучает более длинные волны видимой части спектра. Вследствие этого разрешающая способность микроскопа повышается. Это дает возможность исследовать более мелкие частицы. Чаще используют красители- флюорохромы: акридин оранжевый, аурамин, корифосфин, флюоресцеин в виде очень слабых водных растворов. При окраске корифосфином коринебактерии дифтерии дают желто-зеленое свечение в ультрафиолетовом свете, микобактерии туберкулеза при окраске аурамин-родамином — золотисто-оранжевое. Для успешной микроскопии необходим яркий источник света, в качестве которого используют ртутно-кварцевую лампу высокого давления. Между источником света и зеркалом помещают сине-фиолетовый светофильтр, который пропускает только короткие и средние волны ультрафиолетового света. Попав на объектив, эти волны возбуждают в нем люминесценцию. Чтобы увидеть ее, на окуляр микроскопа надевают желтый фильтр, который пропускает длинноволновый свет флюоресценции, возникающий при прохождении лучей через объект. Короткие волны, не поглощенные исследуемым объектом, убираются, отсекаются этим фильтром. Существуют специальные люминесцирующие микроскопы МЛ-1, МЛ-2, MЛ-3, а также простые устройства: комплект ОИ-17 (опакиллюминатор), ОИ-18 (осветительное устройство с ртутно-кварцевой лампой СВД-120А), дающие возможность применять для люминесцентной микроскопии обычный биологический микроскоп. Систематика и номенклатура бактерий. Принципы классификации. Систематизированы по сходству, различиям и взаимоотношениям между собой. В основу классификации положены их морфологические, физиологические, биохимические, молекулярно-биологические свойства. По классификации Берджи, бактерии составляют царство прокариот и делятся на 4 отдела: грацикулоциты – с тонкой клеточной стенкой, Грам -; фирмикуты – с толстой клеточной стенкой, Грам +; тенерикуты – с без ригидной клеточной стенки, «мягкие», «нежные», включает микоплазмы; архебактерии – с дефектной кл.стенкой, особенностями строения рибосом, мемран и рибосомных РНК. Таксономические категории: класс, отдел, порядок, семейство, род, вид (выдовое название состоит из двух слов, т.е. соответствует бинарной номеклатуре, первое слово в названии указывает на принадлежность к определённому роду (с прописной буквы), второе на вид). Строение дермомицетов и заболевания, вызываемые ими. Дерматомицеты — облигатно патогенные паразиты кожи человека, вызывающие дерматомикозы (эпидермомикозы): эпидермофитию, микроспорию, трихофитию. Дерматомицеты являются основными возбудителями микозов кожи человека, паразитируют в роговом слое кожи и вызывают поражение кератинсодержащих структур (волос и ногтей). Дерматомицеты вырабатывают энзимы — кератиназы, которые расщепляют кератин, что способствует инвазии дерматомицетов в поверхностные слои кожи, где в дальнейшем они и продолжают существовать. Клеточная стенка дерматомицетов содержит мананы — вещества, которые ингибируют местный клеточный иммунитет и приводят к замедлению слущивания роговых чешуек с поверхности кожи и развитию хронического течения инфекции. Задача. Из отделяемого влагалища женщины был приготовлен мазок и окрашен по Граму. При микроскопии мазков видны кокки, располагающиеся попарно, а также клетки имеющие грушевидную форму. Какие микроорганизмы обнаружены в исследуемом материале? Возбудителями каких инфекций они являются? Какие дополнительные методы исследования можно использовать для более точной дифференциации обнаруженных микробов? Ответ: Судя по описанию, у женщины выявлены гонококки и трихомонады. Т.е. у неё гонорея и трихомоноз. Трихомонады можно выявить окрашиванием по Романовскому – Гимзе (ядро окрасится в красный цвет, цитоплазма в синий), наличие жгутиков у трихомонады можно выявить окрашиванием по Морозову. Билет

№6 И.И. Мечников и его учение о невосприимчивости к инфекционным заболеваниям – важный этап в развитии медицины. Роль отечественных ученых в развитии микробиологической науки (Г.Н. Габричевский, С.Н. Виноградский, Н.Р. Гамалея, Л.А. Зильбер, П.Ф. Здородовский, З.В. Ермольева, В.Д. Тимаков). Открытие Д.И. Ивановского – важный этап в развитии вирусологии. Электронный микроскоп. Принцип устройства. Разрешающая способность применения. Риккетсии. Морфология и заболевания, вызываемые ими. Риккетсии – мелкие грамотрицательные палочковидные бактерии размером 0,35 – 1 мкм, облигатные внутриклеточные паразиты. Обитают в организме членистоногих, которые являются их хозяевами или переносчиками. Форма клеток (неправильная, нитевидная) может меняться в зависимости от условий роста. Вызывают эпидемический сыпной тиф, пятнистую лихорадку Скалистых гор, ку-лихорадку, марсельскую лихорадку. Задача. При изучении морфологии бактерий, студент для микроскопии окрашенных препаратов использовал иммерсионную систему светового микроскопа. По каким признакам можно отличит иммерсионный объектив микроскопа? Почему при изучении морфологии бактерий необходимо использовать иммерсионную систему микроскопа? Какие правила необходимо соблюдать при изучении мазков с помощью иммерсионной системы? Билет №7 Открытие микробов (А. Левенгук). Морфологический период в истории микробиологии, исследования Д. Самойловича и Э. Дженнера. Роль русских ученых в развитии микробиологии (Л.С. Ценковскиий, Ф.А. Ценковский, Ф.А. Леш, П.Ф. Боровский). Темнопольный микроскоп, устройство, применение. Темнопольная микроскопия основана на способности микроорганизмов сильно рассеивать свет. Для темнопольной микроскопи пользуются обычными объективами и специальными темнопольными парабалоид-конденсорами, центральная часть которых затемнена, так что прямые лучи от осветителя в объектив микроскопа не попадают. В объектив попадают только те лучи, которые отклоняются частицами препарата. Поэтому в темнопольном микроскопе микроорганизмы видны бесцветными на темном фоне. Метод темнопольной микроскопии используется для изучения живых бактерий и их подвижности. При помощи этого метода могут быть обнаружены мельчайшие микроорганизмы, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности микроскопа. С помощью темнопольной микроскопии изучают нативные препараты типа "раздавленной" или "висячей капли". Характеристика извитых бактерий и заболевания, вызываемые ими. Спиралевидные бактерии – имеют вид штопорообразно извитых клеток (например спириллы - возбудители содоку – болезни укуса крыс). Кампилобактеры – имеют изгибы, как у крыла летящей чайки. Спирохеты – тонкие, длинные, извитые (спиралевидной формы) бактерии, отличаются подвижностью (благодаря наличию аксиальной нити из сократительного белка флагеллина). Подробнее на стр. 30-31 учебника. Для человека патогенны три рода спирохет: трепонемы, боррелии, лептоспиры.

Задача. В лаборатории микробиолог исследовал мазок из мокроты. В мазках, окрашенных по методу Циля-Нильсена, были обнаружены тонкие палочки, расположенные ветвисто, окрашенные в красный цвет. Как называются микроорганизмы, имеющие такую морфологию. Почему исследуемые бактерии окрасились в красный цвет? Какие виды бактерий окрашиваются по Цилю-Нильсену в красный цвет? Ответ: Это микобактерии из порядка актиномицетов, возбудители туберкулёза. В красный цвет окрасились, потому что кислотоустойчивы.

Билет №8 Работы Р.Коха и их значение в практической микробиологии и инфекционной патологии. Жгутики и реснички бактерий, и функциональное значение. Химический состав. Способы обнаружения. Жгутики состоят из белка – флагеллина, являющегося H –антигеном. Субъединицы флагеллина закручены в виде спирали. Число жгутиков у бактерий различных видов варьирует. Определяют подвижность клетки. Способ обнаружения – окраска по Морозову или исследование методом висячей и раздавленной капли. Насчёт ресничек пока ничего не нашла Микоплазмы, морфология и заболевания, вызываемые ими. Микоплазмы - мелкие бактерии (0,15 - 1,0 мкм), окруженные цитоплазматической мембраной и не имеющие клеточной стенки. Из-за отсутствия клеточной стенки микоплазмы осмотически чувствительны. Имеют разнообразную форму: кокковидную, нитевидную, колбовидную. Эти формы видны при фазово-контрастной микроскопии чистых культур микоплазм. На питательной среде образуют колонии, напоминающие яичницу-глазунью. Патогенные микоплазмы вызывают хронические инфекции - микоплазмозы.

Задача. Из мокроты больного пневмонией был приготовлен мазок и окрашен по Граму. При микроскопии мазка обнаружены парные ланцетовидные кокки. Как они окрашиваются по Граму? Какие бактерии имеют такую морфологию? Какие дополнительные методы исследования можно провести для выявления морфологических особенностей обнаруженных бактерий? Ответ: В синий цвет (Грам(-)). Пневмококки. Может понадобиться окраска капсул по Бурри-Гинесу, выделение чистой культуры.

Билет №9 Л. Пастер – основоположник микробиологии как науки. Влияния работ Пастера на развитие медицинской микробиологии. Формирование прикладной иммунологии. Понятие о виде, как о низшей номенклатурной единице. Варианты (биовар, хемовар, серовар и другие). Вид – совокупность особей с одинаковым фенотипом, дающих плодовитое потомство и обитающих в определённом ареале. Вариант –штаммы микробов одного вида, которые отличаются друг от друга по каким-то признакам: Морфовары – по морфологическим, серовары – по антигенным, фаговары – по чувствительности к бактериофагам, биовары – по биологическим или культуральным признакам, хемовары – по биохимическим. Строение плесневых грибов и заболевания, вызываемые ими.

Задача. Из испражнений больного с острой кишечной инфекцией приготовлен мазок. В мазке обнаружена грам «-» палочки. В какой цвет окрашиваются грам «-» бактерии и чем объяснить их окрашивание? Какие микробы могут иметь такую морфологию? Можно ли определить по данной морфологии возбудителя заболевания? Ответ: Грам (-) окрашиваются в красный цвет, так как образуют с основными красителями и йодом легко разрушающееся под действием спирта соединение. В результате микробы обесцвечиваются, а затем окрашиваются фуксином, приобретая красный цвет. Такую морфологию могут иметь эшерихии, сальмонеллы, шигеллы. Поэтому, наверное, по данной морфологии определить точно возбудителя нельзя.

Билет №10 Понятие о популяции, штамме, клоне. Штамм – культура микробов, выделенных из определённого источника (оргинизма, среды) Клон – культура микробов, полученных из одной микробной клетки. Популяция - совокупность бактерий одного вида, вегетирующих в определенном биотопе или выращенных на искусственной питательной среде из одной или нескольких клеток, которые обмениваются генетическим материалом только друг с другом и не имеют контактов с другими группами тех же самых видов. Включения бактериальной клетки. Волютиновые зерна и методы окраски. Для выявления зерен волютина применяют окраску по Нейссеру: 1. На фиксированный препарат наносят уксусно-кислый синий 2-3 мин. 2. Сливают краску и наносят раствор Люголя 1 мин. 3. Промывают препарат водой. 4. Докрашивают раствором хризоидина или везувина 2 мин. промывают водой, высушивают Характеристика ветвистых бактерий и заболевания, вызываемые ими.

Задача. У больного с подозрением на кожную форму сибирской язвы из содержимого карбункула приготовлен мазок, в котором обнаружены крупные палочки с обрубленными концами, располагающиеся в виде цепочки. Какие методы окрашивания можно использовать для определения морфологии этих бактерий? Как определить имеется ли у них капсула? Ответ: Наличие капсулы определяется с помощью окрашивания по методу Бурри – Гинса. Для выявления спор можно воспользоваться окрашиванием по Ожешко: для спор сибиреязвенной палочки характерно центральное расположение спор.

Билет №11 Биологические свойства вирусов. Их отличие от прокариот и эукароиот. Неклеточная форма жизни, проявляет себя как живой организм только внутри живой клетки (облигатный внутриклеточный паразит) Не имеет клеточного строения, белоксинтезирующей системы, содержит только один тип нуклеиновый кислоты (ДНК или РНК). Сложные методы окраски. Окраска по Граму, её этапы. Сложные методы окраски – с использованием нескольких красителей (напр. По Граму, Цилю-Нильсену, Нейссеру, Ожешко) Окраска по Граму: Этап Вещество Время обработки Основной краситель Генцианвиолет (кристаллвиолет) 1-2 мин Протрава Раствор Люголя 1-2 мин Дифференцирующее вещество Спирт этиловый 96 0С 5-10 сек Промывка Вода 5-10 сек Дополнительный краситель Водный фуксин 2-3 мин Промывка Вода 5-10 сек Морфология дрожжеподобных грибов, заболевания, вызываемые ими. Дрожжеподобные грибы представлены отдельными овальными клетками, размножаются почкованием, но иногда образуют псевдомицелий. Дрожжеподобные грибы рода Candida являются возбудителями кандидозов – поражений кожи, слизистых оболочек и внутренних органов.

Задача. В лабораторию доставлен материал от больного с открытой формой туберкулёза. Какой метод окрашивания применяется для выявления туберкулёзных бактерий в исследуемом материале? В какой цвет окрасится данный микроорганизм и почему? Какую форму и расположение имеет возбудитель туберкулёза в мазках? К какой группе относятся данные микробы? Ответ: Для выявления грамположительных КИСЛОТО– И СПИРТОУСТОЙЧИВЫХ микобактерий туберкулеза, которые из–за большого количества в клеточных оболочках жировосковых веществ, миколовой кислоты и других оксикислот непроницаемы для разведенных растворов красителей, используют окраску по методу ЦИЛЯ – НИЛЬСЕНА. По Цилю – Нильсену окрасится в красный цвет, т.к. они кислотоустойчивы. Длинные, тонкие, слегка изогнутые палочки, неподвижные, спор не образуют. Расположены ветвисто. Группа: Микобактерии из порядка Актиномицеты.

Билет №12 Морфология хламидий. Заболевания, вызываемые ими. Хламидии - имеют округлую грушевидную форму, диаметр 250—350 нм, размножаются внутриклеточно (облагатные внутриклеточные паразиты). Chlamydia trachomatis — возбудитель трахомы, конъюнктивитов с включениями (паратрахома), урогенитальной патологии, пневмонии у новорожденных и младенцев, венерической формы синдрома Рейтера, пахового лимфогранулематоза и др. Методы окраски спор. Окраска спор по Ожешко – споры окрашиваются в красный цвет, тело бактерий – в синий. 1. На нефиксированный мазок наливают 0,5% HCL – прогревают 1-2 минуты. 2. Промывают водой. 3. Высушить, зафиксировать в пламени. 4. На мазок помещают фильтровальную бумагу, и наливают фуксин Циля, нагревают до отхождения паров – 3 раза. 5.Промывают 5% H2SO4 – до обесцвечивания. 6. Промывают водой. Докрашивают метиленовой синью Леффлера – 3-5 минут Спорообразующие бактерии. Заболевания, вызываемые ими. Коринебактрии возбудитель дифтерии Клостридии - род грамположительных, облигатно анаэробных бактерий, способных продуцировать эндоспоры[1]. Отдельные клетки — удлинённые палочки, название рода происходит от др.-греч. κλωστήρ «веретено». Расположение спор терминальное – возбудитель столбняка, субтерминальное – газовой гангрены, ботулизма, центральное – сибирской язвы.

Задача. В лабораторию доставлена спинномозговая жидкость, полученная от больного с подозрением на менингит. Какие методы окрашивания можно применить для выявления менингококков? В какой цвет они окрасятся по Граму? Каковы их морфологические особенности? Грамотрицательны, окрасятся в красный цвет. Можно так же применить окраску по Бурри-Гинесу для выявления капсулы. Морфологические особенности: мелкие диплококки, характерно расположение в виде пары кофейных зёрен, расположенных вогнутой стороной друг к другу. Неподвижны, спор не образуют, капсула непостоянна, имеют пили.

МИКРОСКОПЫ

Изучение морфологии микробов проводят с помощью микроскопов: светового, светового микроскопа с иммерсионной системой, светового микроскопа с темнопольным конденсором, фазового-контрастного, люминесцентного и электронного.

Исследуют убитые окрашенные микробы, иногда микробы в живом состоянии.

Для световой микроскопии применяют микроскоп, состоящий из системы линз конденсора, объектива и окуляра. Конденсор, расположенный между источником света и изучаемым объектом, расположенном на предметном стекле, собирает лучи света в поле микроскопа. Объектив создает изображение поля микроскопа внутри тубуса. Окуляр увеличивает изображение и делает его видимым для глаза. Предел разрешения светового микроскопа 0,2 мкм.

Световая микроскопия с иммерсионной системой.

Объективы разделяют на сухие и иммерсионные или погружные. Сухим называют объектив, между фронтальной линзой которого и рассматриваемым препаратом находится воздух. При этом ввиду разницы показателей преломления стекла (на котором находится изучаемый объект) и воздуха, часть световых лучей отклоняется и не попадает в глаз наблюдателя.

Разрешение микроскопа можно повысить за счет увеличения коэффициента преломления. Коэффициент преломления жидких сред больше коэффициента преломления воздуха (n=1,0).

При исследовании микробов применяют иммерсионный или погружной объектив. Данные иммерсионного объектива находятся на его оправе: 90, буквенные индекс ОИ или МИ, а также черная маркировочная линия в нижней части объектива. На исследуемый препарат, приготовленный на предметном стекле, наносят каплю иммерсионного масла (кедрового, касторового, вазелинового), в который погружают объектив. Его преимущество перед сухими объективами состоит в том, что между стеклом и линзой помещается однородная среда (стекло препарата-масло- стекло объектива) с одинаковым показателем преломления. Благодаря этому все лучи, не преломляясь и не изменяя направления, попадают в объектив, чем и достигается наилучшее освещение мельчайших объектов.

Темнопольную и фазово-контрастную микроскопии применяют для исследования микробов в живом неокрашенном состоянии (для выявления подвижности или изучения морфологии некоторых бактерий, слабо воспринимающих красители).

Темнопольный микроскоп отличается от обычного микроскопа способом освещения препарата. В обычном микроскопе исследуемый объект рассматривают в проходящем свете, в темнопольном микроскопе применяют яркое боковое освещение, вследствие чего получается изображение светящегося объекта на темном поле. Такое освещение препарата достигается применением специального темнопольного конденсора с затемненной средней частью. Поэтому центральные лучи света задерживаются. В плоскость препарата попадают только боковые лучи, при этом эти лучи не попадают в объектив, а следовательно, в глаз наблюдателя, в силу чего поле зрения оказывается совершенно неосвещенным (темное поле зрения). В глаз наблюдателя попадают только лучи, отраженные от исследуемого объекта (лучи, претерпевшие в объекте дифракцию). Препарат готовят по методу «раздавленной капли»: каплю исследуемого материала на предметном стекле накрывают покровным стеклом, помещают каплю масла, исследуют через иммерсионный объектив.

Фазово-контрастная микроскопия. Большинство препаратов живых микробов слабоконтрастны. При прохождении света через микробную клетку за счет разницы в показателях преломления структур клеток происходит изменение фазы проходящих световых лучей. Фазово-контрастное устройство позволяет оптическим путем превращать различия по фазе в изменения амплитуды света, в результате чего живые прозрачные объекты становятся контрастными, хорошо видимыми глазом: темное изображение объекта в светлом поле зрения или светлое изображение объекта на темном фоне.

Люминесцентная микроскопия основана на явлении фотолюминесценции – способности некоторых веществ (флюорохромов) светиться при воздействии коротковолнового излучения. При этом испускаемые световые волны длиннее волны, вызывающей свечение, то есть флюорохромы поглощают свет определенной длины волны и излучают свечение в другой области спектра. Эти вещества (флюоресцеина изоцианат, родамин и др.) используют как флюоресцирующие красители. В люминесцентном микроскопе свет от источника (ртутная лампа сверхвысокого давления) проходит через два фильтра. Первый фильтр задерживает свет перед исследуемым материалом на предметном стекле и пропускает свет определенной длины волны, возбуждающей флюоресценцию. Второй фильтр пропускает только свет, излучаемый флюоресцирующим объектом и воспринимаемый глазом.

Люминесцентную микроскопию применяют для учета результатов иммунных реакций: РИФ (реакции иммунофлюоресценции) и РНИФ (реакции непрямой иммунофлюоресценции), основанных на специфическом взаимодействии меченных флюорохромами антител с антигенами микробов.

Электронная микроскопия. Позволяет наблюдать объекты, размеры которых находятся за пределами разрешающей способности светового микроскопа. Используют для изучения структуры микробных клеток, структуры вирусов и т.д. В просвечивающем электронном микроскопе пучок света заменен потоком электронов. Движение электронов происходит в вакууме. Исследуемый материал наносят на тонкие пленки и помещают на пути потока электронов. Пучок электронов, фокусируемый кольцевыми магнитами, проходит через образец. Проходящие через образец электроны наблюдают на экране и регистрируют при помощи фотопластинки.

Сканирующий электронный микроскоп применяют для получения объемного изображения объектов за счет управляемого пространственного перемещения пучка электронов. Разрешающая способность его ниже, чем микроскопа просвечивающего типа.

икробиология. Модуль I: «Морфология микробов»

Вопрос 1. Луи Пастер – основоположник микробиологии как науки. Влияние работ Пастера на развитие медицинской микробиологии. Формирование прикладной иммунологии.

· Луи Пастер доказал, что каждый тип брожениявызываютмикроорганизмы конкретного типа;

· Он обнаружил, что некоторые микроорганизмы могут жить только при отсутствии кислорода, в связи с чем в практику вошли термины «аэробный» (жизнь в присутствии кислорода) и «анаэробный» (жизнь в отсутствии кислорода);

· Доказал, что самостоятельного зарождения не существует;

· Совершенствуя технику стерилизации, ввёл в практику нагревание до 120^оС в паровом котле, получившем название «автоклав». Разрабатывая методы сохранения вкусовых качеств вина и пива, Пастер предложил нагревать их до 60-70^оС, убивая тем самым вегетативные клетки бродильных микробов – метод пастеризации;

· В связи с появлением данных о находках неких «телец» в крови животных, больных сибирской язвой, Пастер сделал вывод о том, что между болезнью и наличием микроорганизмов существует тесная связь;

· Главный вклад Пастера – разработка теории аттенуации – искусственного ослабления вирулентных свойств микроорганизмов, а также ядовитых свойств их токсинов. Пастер установил, что в определённых условиях культивирования патогенные микробы теряют вирулентность и, будучи введёнными здоровым птицам, предохраняют их от заражения. Пастер применил принципы аттенуации в отношении возбудителя сибирской язвы и создал эффективное средство вакцинопрофилактики;

· Пастер изучал бешенство и установил, что если высушивать спинной мозг кролика, заражённого фиксированным вирусом (агентом, постоянно дающим самый короткий период инкубации, для вируса бешенства – 7 дней), в банках с гидроксидом калия, то возбудитель постепенно теряет свою вирулентность и делается безвредным ПРИ ПОДКОЖНОМ ИЛИ ДАЖЕ СУБДУРАЛЬНОМ введении. Так была создана антирабическая вакцина (вакцина от бешенства).

Дата добавления: 2019-02-12; просмотров: 1305; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

12 3 4 5 6 7 8 9 10 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!