Радиоиммунный анализ (РИТ-РИА)

 

№	Шаги проведения	Баллы
1	Специфицеский антиген адсорбируют в лунках полистиролового планшета.	25
2	Инкубируют с испытуемыми сыворотками человека.	25
3	Отмывают несвязавшиеся иммуноглобулины.	5
4	Связавшиеся иммуноглобулины выявляют с помощью антиглобулиновой (человеческой) сыворотки, отмеченными радиоактивными изотопами (J 125).	25
5	При соответствии антигена и антитела образуется комплексы, количество которых устанавливается с помощью гамма или В – счетчиков.	20
	ИТОГО:	100

 

 

РИФ прямая

 

№	Шаги проведения	Баллы
1	При прямом методе готовится препарат, содержащий исследуемые микроорганизмы (АГ).	15
2	Фиксируют его жидким фиксатором (ацетоном).	15
3	Обрабатывают специфической люминесцирующей сывороткой (ацетон).	15
4	Отмывают избыток сыворотки.	10
5	Высушивают препарат и рассматривают в люминесцентном микроскопе.	10
6	При положительной реакции наблюдаются свечение антигена.	10
7	Это реакция позволяет за 1-2 часа обнаружить микробные антигены.	10
8	Метод прост и высокоспецифичен , но требует большого набора различных люминесцирующих сывороток.	15
	ИТОГО:	100

РИФ непрямая

№	Шаги проведения	Баллы
1	При непрямом методе готовится препарат, содержащий исследуемые микроорганизмы (АГ).	15
2	Фиксируют его жидким фиксатором.	15
3	Обрабатывают кроличьей специфической сывороткой.	15
4	Промывают препарат.	10
5	Обрабатывают люминесцирующей антиглобулиновой сывороткой против глобулинов кролика.	10
6	Снова промывают.	10
7	Высушивают препарат и рассматривают в люминесцентном микроскопе.	10
8	При положительной реакции наблюдаются свечение комплекса антиген+антитело.	15
	ИТОГО:	100

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

№	Шаги проведения
1	ПЦР – это молекулярно – биологический метод диагностики.
2	Суть ПЦР состоит в циклическом удвоении определенного участка ДНК с помощью специфических праймеров (затравок) особых ферментов – полимераз.
3	В результате увеличения ДНК образуется достаточное ее количество, чтобы можно было выявить физико-химическими методами хроматографией или электрофорезом.
4	Праймеры получают из известных геномов возбудителей.
5	Обязательным условием проведения ПЦР является знание нуклеотидной последовательности объекта исследования (бактерии, вирусов и т.д.)
6	Исследуемую ДНК собирают в пробирке вместе с необходимыми компонентами и прогревают
7	При этом комлементарные нити ДНК разъединяются. Этот этап называется денатурацией ДНК.
8	К образовавшимся одноцепочечным ДНК присоединяют праймеры. Этот этап называется «отжигом» (присоединением)
9	Фермент полимераза достраивает комплементарные цепи ДНК. Этот этап называется «элонгация» (удлинение).
10	Как правило, проводится 30 циклов, что позволяет получить 2і° копий участка ДНК возбудителя.

 

---

Дата добавления: 2019-02-12; просмотров: 111; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

---

---

Мы поможем в написании ваших работ!