РТГА для определения типа вируса гриппа
| № | Шаги проведения |
| 1 | Реакция применяется для определения типа вируса. |
| 2 | В 5 луночек пластмассового планшета вносят по 0,25 мл вируссодержащий материал, добавляют типовые сыворотки против вируса гриппа – по 0,25 мл. А0; А1; А2; В; С. Затем – по 0,5 мл 1% куриных эритроцитов, планшет оставляют при комнатной температуре на 1 час. |
| 3 | Через 1 часа читают результат реакции. |
| 4 | Вирус гриппа относится к тому типу, с которым образовался осадок в виде «пуговки». |
| 5 | Прокомментируйте полученный результат. |
| ИТОГО: |
Цветная проба для определения типа вируса полиомиелита
| № | Шаги проведения | Баллы |
| 1 | Цветная реакция основана на том, что клеток культуры ткани при своем росте изменяет РН питательной среды за счет выделения или кислых продуктов метаболизма. Это определяется по изменению цвета индикатора фенолового красного, входящего в состав среды. В кислой среде феноловый изменяет свой цвет в желтый. При поражении клеток вирусом цвет среды красный. | 30 |
| 2 | В 3 пробирки вносят по 0,25 мл вируссодержащий материал, по 0,4 мл вазелинового масла, чтобы не было воздуха кислорода, по 0,25 мл типовой сыворотки вируса полиомиелита (1, 2, 3) в соответствующие пробирки. На 1 час оставляют при комнатной температуре. | 30 |
| 3 | Через 1 час во все пробирки добавляют по 0,25 мл клеточной суспензии. | 30 |
| 4 | Учет результатов. Через 48-72 час читают результат. | 10 |
| ИТОГО: | 100 |
|
|
|
Цветная проба для определения титра антител
| № | Шаги проведения | Баллы |
| 1 | Известная проба основана на том, что клетки культуры ткани при своем росте изменяют РН питательной среды за счет выделения ими кислых продуктов метаболизма. Это определяется по изменению цвета индикации фенолового красного, входящего в состав среды. В кислой среде феноловый изменяет свой цвет в желтый. При поражении клеток вирусом - цвет красный. | 20 |
| 2 | Сыворотку больного разводят от 1:4 до 1:64 и вносят в пробирки по 0,25 мл. Затем добавляют по 0,25 вируса и по 0,4 мл вазелинового масла, чтобы не было доступа кислорода. | 20 |
| 3 | Ставят 3 контроля: 1)Сыворотка + клеточная суспензия 2)физ.раствор + клеточная суспензия 3) Кв (вирус + клеточная суспензия) На 1 час оставляют при комнатной температуре. | 20 |
| 4 | Через 1 час добавляют по 0,25 мл клеточной суспензии. Учет результатов через 48-72 часа. | 10 |
| 5 | Читают результат реакции. Желтый цвет питательной среды наблюдается до соответствующего титра сыворотки, в остальных пробирках цвет среды - красный. В контролях: 1)желтый цвет 2)желтый цвет 3)красный цвет | 20 |
| 6 | Прокомментируйте полученный результат | 10 |
| ИТОГО: | 100 |
|
|
|
РПГА (РНГА)
| № | Шаги проведения | Баллы |
| 1 | РНГА является своеобразной модификацией РА. Сущность реакции состоит в том, что молекула антигена адсорбируется на поверхности эритроцитов. Такие эритроцитарные диагностикумы способны агглютинироваться иммунной сывороткой, специфичной для данного антигена. | 20 |
| 2 | В ряд лунок полистироловых планшетов вносят по 0,5 мл физиологического раствора, затем в 1-ю лунку вносят 0,5 мл исследуемой сыворотки в разведении 1:25 и готовят двухкратные разведения путем переноса из одной лунки в другую. Получают разведения от 1:50 до 1:800. В полученные разведения добавляют по 0,1 мл эритроцитарного диагностикума. | 20 |
| 3 | Реакция сопровождается 2-мя контроля: КА – контроль антигена (физиологический раствор и антиген) и КС – контроль сыворотки (физиологический раствор и сыворотка). | 20 |
| 4 | Планшет ставят в термостат при Т - 37°С на 2 часа. | 20 |
| 5 | При положительном результате на дне лунки образуется осадок в виде «зонтика», в отрицательном – осадок в виде «пуговки». | 20 |
| ИТОГО: | 100 |
Иммуноферментный анализ (ИФА)
| № | Шаги проведения | Баллы |
| 1 | Специфицеский антиген адсорбируют в лунках полистиролового планшета. | 15 |
| 2 | Инкубируют с испытуемыми сыворотками человека. | 5 |
| 3 | Отмывают несвязавшиеся иммуноглобулины. | 5 |
| 4 | Связавшиеся иммуноглобулины выявляют с помощью антиглобулиновой сыворотки, к которой прикреплен фермент пероксидаза. | 15 |
| 5 | Добавляется субстрат (пероксид водорода) и индикатор (диамин бензидин), которые позволяют оценить ферментативную активность по интенсивности окраски. | 15 |
| 6 | Интенсивнось окраски можно оценить визуально или с помощью спектрофотометра. | 15 |
| 7 | Интенсивность окраски пропорциональна сорбированных на антигене антител. | 15 |
| 8 | ИФА позволяет выявить антитела к разным антигенам. | 15 |
| ИТОГО: | 100 |
|
|
|
Дата добавления: 2019-02-12; просмотров: 257; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!