Определение токсигенности дифтерийных бактерии
Стр 1 из 3Следующая ⇒
Ориентировочн ая реакци я агглютинации.
| № | Шаги проведения |
| 1 | Определить в наличии необходимых принадлежностей: 1.1. предметное стекло 1.2. агглютинирующая поливалентная сыворотка ABCDE 1.3. физиологический раствор 1.4. микробная культура на скошенном агаре 1.5. бактериологическая петля 1.6. спиртовка со спиртом 1.7.подставка для предметных стекол 1.8.марлевая салфетка Протереть салфеткой предметное стекло. |
| 2 | Нанести каплю физиологического раствора для контроля. Рядом нанести на предметное стекло каплю сыворотки в разведении 1:20. Прокалить бактериологическую петлю. |
| 3 | В каждую каплю бактериологической петлей внести небольшое количество культуры до получения гомогенной взвеси бактерий. |
| 4 | Через несколько минут в капле с сывороткой появляется заметное скучивание бактерий, которое ускоряется, если слегка покачивать стекло. Контрольная капля остается равномерно мутной. |
Реакци я преципитации
| № | Шаги проведения |
| 1 | Преципитация – это осаждение антигена (преципитиногена) из раствора при воздействии на него иммунной сыворотки, содержащей антитела (преципитины). |
| 2 | В преципитационную пробирку наливают преципитирующую сыворотку и осторожно по стенке наслаивают преципитиноген. |
| 3 | При положительной реакции на границе обеих жидкостей появляется мутное кольцо (преципитат). В связи с чем эту реакцию часто называют кольцепреципитацией. |
| 4 | Обязательным условием для постановки реакции является полная прозрачность антигена и антитела. В противном случае результаты реакции будут неясны. |
| 5 | Реакция характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью. |
|
|
|
Фаготипирование стафилококков
| № | Шаги |
| 1 | Фаготипирование стафилококков проводится с целью выявления источников инфекции и их распространения (род.домах, детских учреждениях и т.д.). |
| 2 | Набор стафилококковых фагов содержит 22 типов. |
| 3 | Культуру выделенного стафилококка засевают шпателем на чашку с агаром. На дне чашки чертят квадраты по числу испытуемых фагов. В центр каждого квадрата наносят 1 каплю типового фага. |
| 4 | Чашку помещают в термостат при 37єС на 24 часа, после чего учитывают результат по лизису культуры. |
| 5 | При совпадении фаготипов определяют источник инфекции и путь передачи. |
Определение чувствительности бактерий
К антибиотикам методом бумажных дисков
| № | Шаги проведения |
| 1 | На МПА в чашке Петри сделать посев сплошным газоном выделенной культуры от больного. |
| 2 | Диски с антибиотиками стерильным пинцетом накладывать на поверхность агара, слегка придавливая к нему, на одинаковом расстоянии друг от друга. |
| 3 | Поставить в термостат на сутки при t0 – 370C |
| 4 | Учет результатов проводят измерением диаметра зоны задержки роста, включая диаметр диска. |
| 5 | Нечувствительный микроб имеет Д- менее 10 мм Малочувствительный -10-12 мм Умеренно чувствительный – 12-21 мм Чувствительный – свыше 22 мм. |
|
|
|
РСК
| № | Шаги проведения |
| 1 | Реакция основана на взаимодействи иммунной сыворотки со специфическим антигеном, при наличии комплемента. Образующиися комплекс антиген+ антитело связывает комплемент. |
| 2 | В случае отсутствия комплекса антиген+антитело комплемент остается свободным. |
| 3 | Процесс связывания комплемента с комплексом невидимый. |
| 4 | Для того чтобы установить, произошло связывание комплемента или нет, вводится вторая (гемолитическая) система, состоящая из гемолитической сыворотки и эритроцитов барана. |
| 5 | При наличии свободного комплемента наступает гемолиз. |
| 6 | РСК проводится в 2 этапа: I-этап. Взаимодействие антигена и антитела, связывания комплемента (в 1-й пробирке), (во 2-й и 3-й пробирках) связывания не происходит т.к. они являются контрольными, в них нет одного из ингредиентов (или антигена, или антитела). II-этап. Добавление гемолитической системы для определения в каком состоянии находится комплемент (в связанном или свободном). |
| 7 | В случае положительного результата на опытной пробирке не произойдет гемолиз ввиду отсутствия свободного комплемента. В контрольных пробирках произойдет гемолиз т.к. в присутствии свободного комплемента гемолитическая сыворотка гемолизирует эритроциты барана. |
| 8 | В случае отрицательного результата во всех 3-х пробирках – гемолиз. |
| 9 | Прокомментируйте полученный результат. |
|
|
|
Определение токсигенности дифтерийных бактерии
Оухтерлони
| № | Шаги проведения |
| 1 | Токсигенные бактерии – это те же бактерии, которые выделяют экзотоксин. Для определения токсигенности применяют метод диффузии в агар. |
| 2 | На середину с питательным агаром кладут фильтровальную бумагу, заранее смоченную антитоксической противодифтерийной сывороткой. |
| 3 | С 2-х сторон от бумаги делают посев культур, выделенных от больных. |
| 4 | Чашки помещают в термостат при t0 – 370С на 24 часа. |
| 5 | Через сутки учитывают результата: линии преципитации (или «усики») образуются в местах взаимодействия экзотоксина с антитоксином. Происходит реакция нейтрализации токсина антитоксином. |
| ИТОГО: |
|
|
|
РГА
| № | Шаги проведения |
| 1 | Агглютинация эритроцитов происходит в присутствии вируса, которые адсорбируются на эритроцитах. |
| 2 | РГА ставят на специальных пластмассовых планшетах с лунками. |
| 3 | В луночках готовят разведения вируса от 1:10 до 1:320-я луночка контроль эритроцитов. Во все луночки вносят по 0,5 мл взвеси куриных эритроцитов. Планшет оставляют при комнатной температуре. |
| 4 | Результат реакции читается через 30 мин. В контрольной луночке отмечается осадок эритроцитов в виде «пуговки», в случае положительной реакции на дне луночек образуется осадок в виде зонтика. |
| 5 | Прокомментируйте полученный результат |
| ИТОГО: |
РТГА для обнаружения антител
| № | Шаги проведения |
| 1 | Это реакция применяется как для обнаружения антител в сыворотке больного так и для определения типа вируса. |
| 2 | Сыворотку больного разводят в лунках планшета от 1:10 до 1:320. Во все луночки добавляют 0,25 мл вирусного диагностикума соответствующего заболевания. Затем добавляют по 0,5 мл 1% взвеси куриных эритроцитов. Реакция сопровождается контролями: 1. КС – сыворотка+эритроциты. 2. КВ – вирус+эритроциты. 3. КЭ – физиологический раствор+эритроциты. После 45 мин. стояния при комнатной температуре читают результат реакции. |
| 3 | При положительной реакции в опытных луночках образуется осадок в виде «пуговки» до соответствующего титра. |
| 4 | В контроле вируса – осадок в виде «зонтика», в контроле эритроцитов – в виде «пуговки», в контроле сыворотки – в виде «пуговки». |
| 5 | Реакция ставится как правило, с парными сыворотками больного т.е. в первые дни заболевания и на 12-20 день заболевания. |
| ИТОГО: |
Дата добавления: 2019-02-12; просмотров: 345; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!